Naa10p和CEA在唾液中联合检测对口腔鳞癌的诊断价值

余芯乐 郑军 徐江 曾妍

口腔鳞状细胞癌(Oral squamous cell carcinoma，OSCC)是口腔颌面部最常见的恶性肿瘤，虽然近年来口腔鳞癌的手术治疗和放化疗技术不断提升，但患者5年存活率仍然不到50%［1］。癌胚抗原(Carcinoembryonicantigen，CEA)作为广谱的肿瘤标志物，常用于口腔鳞状细胞癌的诊断、疗效观察等方面，但其特异度较低。近年来，国内外学者发现N端α位乙酰基转移酶10 蛋白(N-α-acetyltransferase 10 protein，Naa10p)在多种恶性肿瘤中高表达［2－5］，有可能作为新的肿瘤标志物用于临床。唾液因包括口腔黏膜脱落细胞及其分泌代谢产物而与口腔颌面部肿瘤密切相关。已有文献报道，在口腔鳞癌患者唾液中可检测出与口腔鳞癌相关的肿瘤标志物的改变［6－7］。本研究通过检测口腔鳞癌患者唾液中Naa10p和CEA的表达水平，探讨两者联合检测在口腔鳞癌早期诊断中的临床价值。

1 资料与方法

1.1 临床资料

选取2013～2016年新疆维吾尔自治区石河子大学医学院第一附属医院口腔科及新疆医科大学第一附属医院口腔科收治的60例口腔鳞癌患者为口腔鳞癌组，所有患者均经病理学检查确诊。男性32例，女性28 例，年龄21～83 岁，平均(63.20±4.17) 岁。选取同期收治的30例癌前病变(扁平苔藓、白斑、红斑、慢性溃疡长期不愈)患者为癌前病变组，所有患者均经临床体征或活检确诊。男性16例，女性14例，年龄20～87岁，平均(61.43±2.79)岁。同期体检的40例正常人为正常对照组，均经口腔检查确诊无牙周粘膜疾病和全身检查确诊无系统性疾病。男性17例，女23例，年龄26～82岁，平均(60.57±3.85) 岁。3组资料在性别、年龄比较差异无统计学意义，具有可比性。

1.2 标本采集

经过患者同意采集唾液。采用吐唾法收集［8］，为减少食物残渣对唾液的影响，采集时间为晨9:00～10:00，采集前5 min漱口，留取未经刺激的唾液1～2 ml，采集后室温下1 000 r/min离心2 min，留取清亮唾液，立即加入蛋白酶抑制剂，分装封口冻存于－80℃备用。

1.3 实验方法

1.3.1 主要试剂 Naa10p ELISA试剂盒、DLNAA10-Hu ELISA试剂盒(Dldevelop公司，加拿大);Can Ag CEA EIA试剂盒(Can Ag Diagnostics公司，瑞典)。

1.3.2 检测方法及判读标准 严格按照 Naa10p、CEA试剂盒说明书进行操作。以95%正常对照组唾液中Naa10p、CEA上限为临界值，即 Naa10p＜83.75 pg/ml，CEA＜110μg/L为标准，凡超过上述两临界值的病例计为阳性。

1.4 统计学处理

采用SPSS 17.0统计软件进行统计学分析，计量资料数据以珋x±s表示，组间比较采用t检验;计数资料以百分率表示，比较采用χ2检验;绘制ROC曲线并进行Logistic回归，分析各指标单独和联合检测乳腺癌的诊断价值，各指标间ROC曲线下面积的比较采用Z检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 口腔鳞癌组、癌前病变组、正常对照组唾液中Naa10p、CEA 的表达

口腔鳞癌组、癌前病变组、正常对照组唾液中Naa10p、CEA表达差异均有统计学意义(P均 ＜0.05)。口腔鳞癌组唾液中Naa10p、CEA表达均显著高于癌前病变组和正常对照组(P＜0.05);癌前病变组唾液中Naa10p、CEA表达均显著高于正常对照组(P ＜0.05)(表 1)。

2.2 唾液中 Naa10p、CEA单独及联合检测诊断口腔鳞癌的诊断价值评价

由表 2可见，单项肿瘤标志物中，唾液中的Naa10p的灵敏度和特异度均优于唾液中的CEA。与单项肿瘤标志物检测相比较，唾液中的 Naa10p和CEA两项联合检测的特异度由74.28%到72.79%略有降低，但敏感性由70.00%明显提高到92.50%，准确度由72.00%明显提高到84.62%。

表1 口腔鳞癌组、癌前病变组、正常对照组唾液中Naa10p、CEA的表达(珋x±s)Tab 1 Expression of Naa10p and CEA in saliva of the subjects with oral squamous cell carcinoma，precancerous lesion group and healthy controls(珋x±s)

表2 唾液中Naa10p、CEA单独及联合检测用于诊断口腔鳞癌的临床诊断性能评价结果Tab 2 The efficiency of salivary Naa10p and CEA detection for the diagnosis of oral squamous cell carcinoma

2.3 口腔鳞癌组唾液中不同临床分期Naa10p、CEA的检测结果

由表 3可见，Ⅲ、Ⅳ期口腔鳞癌患者唾液中的Naa10p、CEA表达明显高于Ⅰ、Ⅱ期口腔鳞癌患者(P＜0.05)。由表4可见，Ⅲ、Ⅳ期口腔鳞癌患者Naa10p检测的阳性率(88.88%)明显高于Ⅰ、Ⅱ期口腔鳞癌患者(75.76%)。Ⅲ、Ⅳ期口腔鳞癌患者CEA检测的阳性率(81.48%)明显高于Ⅰ、Ⅱ期口腔鳞癌患者(69.69%)。与单项检测相比，Naa10p、CEA联合检测可明显提高Ⅰ、Ⅱ期口腔鳞癌患者检测的阳性率(90.91%)(P ＜0.05)。

表3 口腔鳞癌组不同临床分期唾液中Naa10p、CEA的表达(珋x±s)Tab 3 The expression of Naa10p and CEA in saliva of OSCC patients at different clinical stages(珋x±s)

表4 口腔鳞癌不同临床分期唾液中Naa10p、CEA检测的阳性率［n(%)］Tab 4 The positive rate of Naa10p and CEA in saliva of OSCCpatients at different clinical stages ［n(%)］

2.4 唾液中Naa10p、CEA单项及联合检测ROC曲线分析

以病理学检查结果为金标准，将口腔鳞癌组60例及正常对照组40例唾液检测的唾液中Naa10p、CEA的结果，通过SPSS17.0软件绘制成ROC曲线。唾液中Naa10p检测曲线下方面积为 0.822，95% 可信区间为(0.765－0.92)。唾液中CEA检测曲线下方面积为0.736，95% 可信区间为(0.636 －0.837)。以 唾液中Naa10p、CEA为自变量，建立 Logistic回归模型，Logit(P)= －6.871+0.022 × Naa10p+0.037 × CEA，通过模型中的概率值来拟合联合检测的 ROC曲线(图1)。联合检测的 ROC曲线下面积为0.911，95%可信区间为0.852－0.969，联合检测的ROC曲线下面积均大于唾液中Naa10p、CEA单项检测，差异有统计学意义(P均＜0.05)。

图1 唾液中Naa10p、CEA单独及联合检测用于诊断口腔鳞癌的ROC曲线Fig 1 ROCcurves of Naa10p and CEA in saliva alone and in combination for the diagnosis of OSCC

3 讨论

随着医疗检测技术的进步，有学者发现肿瘤标志物的成分改变与局部组织细胞代谢密切相关，检测肿瘤附近体液中的肿瘤标志物较检测外周血的阳性率高［9］。尤其是对于口腔癌，唾液与其关系密切，且唾液所具有的无创取样、检测简单等优势也使操作更具有可行性。

Naa10p是 N-乙酰基转移酶(N-α-acetyltransferase，NAT)家族成员之一，其在多种肿瘤组织中高表达，参与细胞增殖、凋亡、转移、自噬等多个生物学过程［10］。Midorikawa等［3］发现肝癌组织中，Naa10p 的表达与鳞状上皮细胞分化呈正相关，细胞分化越成熟，Naa10p表达越强。Yu等［11］系统地检测多种癌组织中的Naa10p蛋白水平，发现有52.3%癌组织具有Naa10p高表达，且Naa10p在腺上皮癌中阳性率比鳞上皮癌中要低。本课题组研究［2］发现在 Naa10p在OSCC组织中高表达，并且其表达与OSCC患者的临床分期，淋巴结转移，分化程度和复发率相关，参与了口腔鳞癌的发生发展过程。CEA是一种位于细胞表面的糖蛋白，目前已将其作为重要常规辅助指标在临床上广泛应用于诊断肿瘤，但由于CEA是广谱标志物，特异性较差，常与其它肿瘤标志物联合应用。本研究结果显示，口腔鳞癌组唾液中的Naa10p和CEA表达均明显高于癌前病变组和正常对照组，提示两项指标对辅助诊断口腔鳞癌均有一定的临床应用价值。并且两项指标单独及联合检测的阳性率在口腔鳞癌组均高于癌前病变组，且口腔鳞癌组两项指标联合检测的阳性率高于各指标单独检测阳性率，差异均具有统计学意义(P均＜0.05)，提示两项指标均可用于口腔鳞癌的诊断及鉴别诊断，且两指标联合检测可提高口腔鳞癌的检出率。

唾液中Naa10p检测口腔鳞癌的灵敏度、特异度及其他各项性能指标均显著优于唾液中CEA的检测，表明唾液中Naa10p可能比CEA更适合作为口腔鳞癌的肿瘤标志物，但Naa10p单项检测口腔鳞癌的灵敏度为75%仍然较低，说明单项肿瘤标志物检测在口腔鳞癌的早期诊断中仍具有局限性。与单项指标Naa10p相比，唾液中Naa10p、CEA两项联合检测口腔鳞癌的特异度虽有所降低，但灵敏度和准确度均显著提高，这表明联合检测对口腔鳞癌的早期筛查和诊断具有良好的临床应用价值。另外，单项指标中Naa10p的ROC曲线下面积大于CEA，说明唾液中Naa10p对口腔鳞癌的诊断效能优于唾液中CEA。而联合检测的ROC曲线下面积高于任一单项检测，差异具有统计学意义(P＜0.05)，亦提示联合检测的诊断性能优于单项检测。

此外，本研究还按临床分期对60例口腔鳞癌患者进行了分析。结果表明唾液中Naa10p、CEA的表达水平与口腔鳞癌患者的临床分期情况密切相关。在早期诊断的灵敏度方面，单项检测时，唾液中Naa10p、CEA均较低，但两项联合测定Ⅰ、Ⅱ期口腔鳞癌的阳性率提高到90.91%，这表明联合检测可显著提高Ⅰ、Ⅱ期口腔鳞癌患者诊断的阳性率，有利于口腔鳞癌的早期诊断。

综上所述，唾液中Naa10p和CEA联合检测有助于提高口腔鳞癌的诊断性能和早期检出率，二者是口腔鳞癌早期诊断较为理想的标志物组合，可为临床医师早期诊断口腔鳞癌提供一定的帮助。

［1］ Omar E.Current concepts and future of noninvasive procedures for diagnosing oral squamous cell carcinoma-a systematic review［J］.Head Face Med，2015，11:6.

［2］ Zeng Y，Zheng J，Zhao J，et al.High expression of Naa10p associates with lymph node metastasis and predicts favorable prognosis of oral squamous cell carcinoma［J］.Tumour Biol，2016，37(5):6719 －6728.

［3］ Ren T，Jiang B，Jin G，et al.Generation of novel monoclonal antibodies and their application for detecting ARD1 expression in colorectal cancer［J］.Cancer Lett，2008，264(1):83－92.

［4］ Wang Z，Wang Z，Guo J，et al.Inactivation of androgeninduced regulator ARD1 inhibits androgen receptor acetylation and prostate tumorigenesis［J］.Proc Natl Acad Sci USA，2012，109(8):3053－3058.

［5］ Lee CF，Ou DS，Lee SB，et al.hNaa10p contributes to tumorigenesis by facilitating DNMT1-mediated tumor suppressor gene silencing［J］.JClin Invest，2010，120(8):2920－2930.

［6］ Liao PH，Chang YC，Huang MF，et al.Mutation of p53 gene codon 63 in saliva as a molecular marker for oral squamous cell carcinomas［J］.Oral Oncol，2000，36(3):272－276.

［7］ Cheng B，Rhodus NL，Williams B，et al.Detection of apoptotic cells in whole saliva of patients with oral premalignant and malignant lesions:A preliminary study［J］.Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol Endod，2004，97(4):465－470.

［8］ 林琴，白洁，包振英，等.3～4岁儿童唾液蛋白含量的研究［J］.实用口腔医学杂志，2007，23(4):568－570.

［9］ 汤钊酞.现代肿瘤学［M］.上海:上海医科大学出版社，1993:76.

［10］ 闵力，曾妍，寿成超.乙酰转移酶基因NAA10的生物学功能及其在肿瘤中的作用［J］.中国生物化学与分子生物学报，2013，29(10):902－909.

［11］ Yu M，Ma M，Huang C，et al.Correlation of expression of human arrest-defective-1(hARD1) protein with breast cancer［J］.Cancer Invest，2009，27(10):978 － 983.