养血饮口服液对免疫系统的影响

李丽静，李 晶，刘同彦，陈思慧， 钱 圳，薛光辉，刘 佳，马 悦，马晓彤，贡济宇，李秋明*（.长春中医药大学，长春 307；.吉林敖东集团，吉林 敦化 33700）

养血饮口服液由当归、黄芪、鹿角胶、阿胶、大枣组成，具有助脾益肾，补气养血之功效，在临床应用多年，有很好的疗效，对各种原因引起的贫血均具有良好的疗效，对临床上放疗和化疗后造成的白细胞数减少疗效明显[1-2]。为进一步观察其补气养血相关的药理作用，通过开展针对养血饮口服液功能主治的药理学研究。为观察养血饮口服液对免疫系统的影响等实验，对养血饮进行了如下实验研究。

1 实验材料

昆明种小鼠，由吉林省长春市亿斯医学实验动物技术有限公司提供，动物许可证号SCXK（吉）-2011-0004。实验动物购入后，适应性饲养7 d，在实验开始之前，比较小鼠体质量，筛选出体质量18～22 g的健康小鼠，测血常规，选出各项指标的小鼠用于实验[4]。养血饮口服液（吉林敖东制药）规格10 mL/支，口服，1支/次，2次/d。阳性对照药：复方阿胶浆口服液（山东东阿阿胶股份有限公司）规格20 mL/支，口服，1支/次，3次/d。环磷酰胺（江苏圣迪医药），0.2 g/支。RPMI1640培养液、胎牛血清、胰蛋白酶、MTT（GIBICO），清洗液、稀释液、血细胞检测试剂（西森美康公司），其他所用试剂均为分析纯，实验用水为去离子蒸馏水。XT-2000i全自动血液分析仪、美国伯乐酶标仪，日本三洋二氧化碳培养箱，热电生物安全柜，奥林巴斯倒置显微镜。

2 实验方法

2.1 动物分组及给药 小鼠随机分成6组，分别为空白对照组、模型组、复方阿胶浆口服液组（7.8 mL/kg）、养血饮口服液高（10.4 mL/kg）、中（5.2 mL/kg）、低（2.6 mL/kg）剂量组。灌胃给药、持续给药10 d，除空白对照组外其余各组均从第6天开始，腹腔注射环磷酰胺持续给药5 d，40 mL/kg[5]。

2.2 养血饮对免疫低下模型小鼠体质量的影响 分别于给药第0、5、11天称体质量，调整灌胃量，并记录动物体质量，进行统计学分析。

2.3 养血饮对免疫低下模型小鼠免疫器官重量的影响 安乐死动物后，无菌状态下取脾脏、胸腺，称重量后保存于无菌培养液中，进行后续实验，并按公式计算脾和胸腺的脏器指数[7]。

2.4 养血饮对ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化率的影响（MTT法） 2.3所取脾脏制作脾淋巴细胞悬液，调整细胞浓度为（3～5）×106个 /mL。加75 μL Con A 液（100 μg / mL）。培养72 h后按常规MTT检测法，加入酸性异丙醇，混匀吹打，在570 nm 测定OD 值。用加Con A孔的OD和不加Con A 孔的OD 值之差表示淋巴细胞增值能力[8]。

2.5 统计学方法 原始实验数据采用SPSS12.0软件进行单因素方差分析。

3 实验结果

3.1 养血饮对免疫低下模型小鼠体质量的影响 造模后，模型组动物体质量下降明显（P＜0.05），造模同时给予阳性对照药物、养血饮高、中、低剂量组药物后，各给药组动物体质量降低明显得到控制和改善。见表1。

3.2 养血饮对免疫抑制小鼠胸腺指数和脾脏指数影响 环磷酰胺连续给药可明显降低胸腺和脾脏指数；与环磷酰胺模型组比较，养血饮口服液能使胸腺指数升高（P＜0.05或P＜0.01）、脾脏指数升高（P＜0.05）。同时可以升高白细胞数量。详见表2。

表1 养血饮对免疫低下模型小鼠体质量的影响（x± s ，n = 10）

3.3 养血饮对ConA诱导的免疫低下模型小鼠淋巴细胞转化率的影响（MTT法） 由表3可见，养血饮口服液对小鼠脾有丝分裂原 Con A对脾T细胞的增殖有促进作用（P＜0.05），对化疗药物引起的免疫抑制具有保护作用。

表3 养血饮对ConA诱导的免疫低下模型小鼠淋巴细胞转化率的影响（x± s ，n = 10）

表2 养血饮对模型小鼠白细胞数目、胸腺及脾脏指数的影响（x± s ，n = 10）

4 讨论

免疫功能抑制是环磷酰胺治疗过程中最常见的不良反应，会影响化疗效果并增加肿瘤细胞发生免疫逃逸的风险，同时增加肿瘤化疗患者感染的风险。由上述实验可以看出，环磷酰胺注射后模型小鼠发生了免疫功能抑制，可以导致实验动物白细胞、体质量、淋巴细胞免疫功能下降，而养血饮口服液对环磷酰胺引起的体质量下降具有保护作用，可升高白细胞数目、提高胸腺和脾脏指数、增强免疫功能。

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