HPLC测定半夏泻心汤中不同剂量黄芩配伍前后黄芩苷的煎出量

梁惠珍，高明焱，王佳佳，马晶晶

半夏泻心汤出自张仲景《伤寒杂病论》，主治寒热互结之痞证[1]。由半夏、黄连、黄芩、人参、干姜、炙甘草、大枣7 味药组成，全方能通过辛开苦降以调脾胃气机，又有培土生金之意[2]。临床上主要用于治疗胃肠动力障碍性疾病，如反流性食管炎、慢性胃炎、胃溃疡、胃癌等[3-4]。方中黄芩具有清热燥湿、泻火解毒、止血安胎等功效[5]，现代研究证实黄芩中的黄芩苷成分对于幽门螺杆菌相关性胃炎模型有显著的改善作用[6]，可见黄芩含苷量的多少关系到该方在临床上的疗效。本研究采用高效液相色谱法，探讨配伍中黄芩剂量的不同对半夏泻心汤中黄芩苷煎出量的影响。

1 仪器和试药

1.1 仪器

Agilent 1260系列高效液相色谱仪，包括二元泵、在线脱气机、VWD检测器；KQ3200E超声提取器（昆山市超声仪器有限公司）；FA/JA1004万分之一电子天平（上海精密科学仪器有限公司）；梅特勒AB135-S/FACT 电子分析天平（METTLER梅特勒集团）。

1.2 试药

半夏、黄芩、党参、黄连、炙甘草、干姜药材购于山西维康堂中药饮片有限公司，大枣为市售，由山西中医药大学中药鉴定教研室裴香萍副教授鉴定为正品。黄芩苷对照品（含量测定用，批号：110715-201318）购自中国食品药品检定研究院，甲醇（4 L）为色谱纯（迪马科技有限公司），乙醇（500 mL）为分析纯（天津市科密欧化学试剂有限公司），水为重蒸馏水。

2 方法与结果

2.1 黄芩单煎样品的制备

称取黄芩药材90 g，加8倍量水，浸泡10 min，煎煮2次，每次30 min，滤过，收集滤液，浓缩，60℃低温干燥，即得。

2.2 半夏泻心汤复方合煎样品（含9 g黄芩）的制备

称取复方各药材10倍量，按照黄芩单煎样品的制备方法制备，即得。

2.3黄芩阴性样品的制备

称取缺黄芩的复方各药材10倍量，按照黄芩单煎样品的制备方法制备，即得。

2.4 方法学考察

2.4.1 对照品溶液的制备 取在60 ℃减压干燥4 h的黄芩苷对照品适量，精密称定，加乙醇制成每1 mL含60 μg的溶液，即得[7]。

2.4.2 供试品溶液Ⅰ的制备 取黄芩单煎样品0.3 g，精密称定，置100 mL具塞三角瓶中，加70 %乙醇30 mL，超声处理20 min，滤过，滤液置50 mL量瓶中，加70 %乙醇至刻度，摇匀，精密量取1 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得[7]。

2.4.3 供试品溶液Ⅱ的制备 取半夏泻心汤复方合煎样品2.0 g，精密称定，按照供试品溶液Ⅰ的制备方法制备，即得。

2.4.4 阴性供试品溶液的制备 取黄芩阴性样品2.0 g，精密称定，按照供试品溶液Ⅰ的制备方法制备，即得。

2.4.5 色谱条件与系统适用性试验 Diamonsil C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)色谱柱，甲醇-0.4 %磷酸水溶液(53∶47)为流动相，流速为1.0 mL·min-1，检测波长为280 nm，理论板数按黄芩苷峰计算应不低于2500[7]。

2.4.6 测定法 分别精密吸取黄芩苷对照品溶液、供试品溶液Ⅰ、供试品溶液Ⅱ和阴性供试品溶液各10 µL，采用高效液相色谱仪测定。计算，以每克黄芩原药材提出的黄芩苷的量作为提取效率计算依据。结果阴性无干扰。

图1 单煎和合煎样品的HPLC图

2.4.7 线性考察 精密吸取黄芩苷对照品溶液2 µL、4 µL、8 µL、10 µL、15 µL，分别采用高效液相色谱仪测定其峰面积。以黄芩苷质量（µg）为横坐标，峰面积值为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程Y=5555.3X - 44.949，r = 0.9998，表明黄芩苷在0.125µg～0.941 µg线性关系良好。

2.4.8 精密度考察 精密吸取对照品溶液10 µL，采用高效液相色谱仪测定峰面积，重复6次，结果RSD为0.91 %，表明仪器精密度良好。

2.4.9 稳定性考察 精密吸取同一供试品溶液10 µL，分别在0、2、4、6、10、12 h采用高效液相色谱仪测定峰面积，结果供试品溶液Ⅰ和供试品溶液Ⅱ中黄芩苷峰面积的RSD分别为1.82 %和1.25 %，说明样品在12 h内测定结果稳定。

2.4.10 重复性考察 取黄芩单煎样品0.3 g，6份，再取半夏泻心汤复方合煎样品2.0 g，6份，精密称定，分别按照供试品溶液Ⅰ制备方法进行制备，测定峰面积，计算黄芩苷煎出量。结果黄芩单煎样品和半夏泻心汤复方合煎样品中黄芩苷的平均煎出量（相当于黄芩原药材中的量）分别为48.79 mg·g-1和42.93 mg·g-1，RSD分别为1.62 % 和2.26 %，表明本方法重复性良好。

2.4.11 加样回收率考察[8-9]取黄芩单煎样品0.15 g，6份，再取半夏泻心汤复方合煎样品1.0 g，6份，精密称定，分别精密加入黄芩苷对照品20 mg，按照供试品溶液Ⅰ制备方法进行制备，测定峰面积，计算回收率。结果见表1、2。

表1 黄芩单煎样品回收率测定结果

表2 半夏泻心汤复方合煎样品回收率测定结果

2.4.12样品测定 取黄芩单煎样品0.3 g和半夏泻心汤复方合煎样品2.0 g，精密称定，按照供试品溶液Ⅰ制备方法进行制备，测定峰面积，计算黄芩苷煎出量。结果见表3。

表3 不同剂量黄芩配伍前后黄芩苷煎出量的测定

3 讨论

3.1 本试验主要是研究半夏泻心汤在传统煎煮法中黄芩配伍前后黄芩苷煎出量的变化，故没有对提取溶剂进行选择，直接采用水提取获得样品。

3.2 本试验对黄芩苷进行紫外扫描，最大吸收波长出现在210 nm和280 nm，结合相关文献[10]和药典[7]记载，选择280 nm作为测定波长。

3.3 试验结果表明，半夏泻心汤配伍后，黄芩苷的煎出量有所减少，可能是由于黄芩苷与黄连中的小檗碱发生了酸碱反应。而且，随着黄芩剂量的减少，黄芩苷的煎出量逐渐降低。黄芩苷属于黄芩中的有效成分，在半夏泻心汤中能发挥泻热消痞的作用，但又有一定的副作用，可引起胃部不适、腹泻、血压下降等。故黄芩的剂量要把握准确，既能最大程度发挥其有效作用，又能避免副作用的发生。目前临床上应用半夏泻心汤方时，黄芩的常用剂量为9 g，效果很好。

[1]蔡巧玲, 王莹, 崔波, 等.半夏泻心汤及不同配伍对大鼠肝微粒体中黄芩苷和黄芩素代谢的影响[J].中药材,2012, 35(8):1286-1290.

[2]黄少君, 范 良, 王宝爱, 等.半夏泻心汤加减配合拔罐治疗胃食管反流性咳嗽[J].中国实验方剂学杂志,2013, 19(2):305-307.

[3]崔姗姗, 陈玉龙, 周发祥, 等.半夏泻心汤及其拆方诱导胃腺癌SGC-7901细胞凋亡机制[J].中华中医药杂志2015, 30(4):1287-1289.

[4]童荣生, 肖开春, 李晋奇, 等.半夏泻心汤调节胃肠动力的物质基础研究[J].中国实验方剂学杂志,2015, 21(3): 160-163.

[5]林慧彬, 安 芸, 路俊仙，等.黄芩的研究进展[J].亚太传统医药,2008, 4 (10):136-138.

[6]罗桂香, 尹抗抗, 谭达全.半夏泻心汤及其有效组分黄芩苷对幽门螺杆菌相关性胃炎胃黏膜保护作用和对TNF-α影响的研究[J].中国中医药现代远程教育,2009, 7(1): 19-20.

[7]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部) [ S].北京:化学工业出版社, 2015:301-302.

[8]鄢长华, 陈俊林, 赵海涛.HPLC法对不同栽培年限及不同产地的黄芩中黄芩苷的含量测定分析研究[J].内蒙古医学杂志,2006, 38 (6):515-517.

[9]张晓东.半夏泻心汤不同煎法对黄芩苷的影响[J].中医药临床杂志,2007, 19(5): 495-496.

[10]吕士杰, 李妍, 芦晓晶, 等.HPLC测定芩丹颗粒中黄芩苷、栀子苷和丹皮酚[J].中国实验方剂学杂志,2010, 16(6):81-84.