Vasohibin- 1、PD- 1、SDF- 1在结直肠癌患者中的表达及其与临床特征的关系

陈艳昕，刘庆滨，周颖，黄江梅，肖芳

秦皇岛市第一医院1病理科，2普外科，河北 秦皇岛066000

结直肠癌的发病率居各种恶性肿瘤的第3位，在中国居恶性肿瘤的第4位[1]。研究发现，恶性肿瘤相关生物学因子的改变能够影响肿瘤细胞的浸润、分化及新生血管的形成，从而促进恶性肿瘤发生及病情进展[2]。研究表明，基质细胞衍生因子-1（stromal cell-derived factor-1，SDF-1）的高表达能够促进肿瘤细胞增殖和基因转录，提高肿瘤细胞的增殖速度[3]。程序性死亡受体1（programmed cell death 1，PDCD1，也称PD-1）的低表达能够抑制肿瘤细胞凋亡，促进肿瘤细胞持续性增殖，进而参与恶性肿瘤的发生[4]。Vasohibin-1是一种新型血管内皮细胞调控因子，能够调控新生血管形成，增加局部肿瘤组织的血流灌注，促进肿瘤组织的生长[5]。本研究探讨了Vasohibin-1、PD-1、SDF-1在结直肠癌患者中的表达情况及其与临床特征的关系，现报道如下。

1 对象与方法

1.1 研究对象

选取2015年5月至2016年8月于秦皇岛市第一医院接受治疗的200例结直肠癌患者为结直肠癌组。纳入标准：①年龄≥50岁；②经病理检查确诊为原发性结直肠癌；③无其他系统严重疾病；排除标准：①临床资料不全者；②合并其他部位肿瘤者；③拒绝参与本研究者。200例结直肠癌患者中，直肠癌75例，左、右半结肠及乙状结肠癌125例；男120例，女80例；年龄51～76岁，平均（65.24±6.31）岁；有淋巴结转移55例，无淋巴结转移145例；组织学分型：管状腺癌160例，黏液腺癌40例；TNM分期：Ⅰ～Ⅱ期90例，Ⅲ～Ⅳ期110例；肿瘤直径＜5 cm 135例，≥5 cm 65例。另选取200例结直肠息肉患者为结直肠息肉组，其中男110例，女90例；年龄52～75岁，平均（65.28±5.01）岁。两组患者的性别、年龄比较，差异均无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。所有患者均对本研究知情并签署知情同意书。

1.2 检测方法

采用石蜡切片脱蜡入水，去离子水反复洗涤，加入牛奶液体封闭，封闭时间为5 min，加入Vasohibin-1、PD-1、SDF-1蛋白抗体（鼠来源，购自Abcam公司），37℃孵育2 h，采用磷酸盐缓冲溶液洗涤3次，加入二抗抗体（购自Abcam公司），37℃孵育30 min，加入磷酸盐缓冲溶液洗涤3次，采用南京凯基生物科技发展有限公司生产的DAB显色剂进行显色，封片，镜下观察。

1.3 评价指标

观察两组患者Vasohibin-1、PD-1、SDF-1的表达情况，比较不同临床特征结直肠癌患者Vasohibin-1、PD-1、SDF-1的表达情况。

1.4 统计学方法

采用SPSS 11.5软件对-数据进行统计分析。计量资料以均数±标准差（±s）表示，组间比较采用t检验；计数资料以率（%）表示，组间比较采用χ2检验；多因素分析采用Logistic回归分析法。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组患者Vasohibin- 1、PD- 1、SDF- 1表达情况的比较

结直肠癌组患者的Vasohibin-1、PD-1、SDF-1阳性表达率分别为80.00%、42.50%、45.00%，均明显高于结直肠息肉组的12.50%、5.00%、11.00%，差异均有统计学意义（P＜0.01）。（表1）

表1 两组患者Vasohibin- 1、PD- 1、SDF- 1表达情况的比较[ n（%）]

2.2 不同临床特征结直肠癌患者Vasohibin- 1、PD- 1、SDF- 1表达情况的比较

有淋巴结转移、组织学分型为黏液腺癌、Ⅲ～Ⅳ期、肿瘤直径≥5 cm结直肠癌患者的Vasohibin-1、PD-1、SDF-1阳性表达率明显高于无淋巴结转移、组织学分型为管状腺癌、Ⅰ～Ⅱ期、肿瘤直径＜5 cm的患者，差异均有统计学意义（P＜0.01）。不同年龄、性别、肿瘤部位结直肠癌患者的Vasohibin-1、PD-1、SDF-1阳性表达率比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）。（表2）

2.3 结直肠癌患者Vasohibin- 1、PD- 1、SDF- 1阳性表达的影响因素分析

将单因素分析有意义的因素作为自变量（淋巴转移：有=1，无=0；TNM分期：Ⅲ～Ⅳ期=1，Ⅰ～Ⅱ期=0），将结直肠癌患者Vasohibin-1、PD-1、SDF-1阳性表达作为因变量，进行Logistic回归分析。结果显示，淋巴结转移和TNM分期是影响结直肠癌患者Vasohibin-1、PD-1、SDF-1阳性表达的独立因素（P＜0.05）。（表3～表5）

3 讨论

目前，临床上结直肠癌治疗的总有效率不足70%，手术联合放化疗等综合治疗措施的临床缓解率较低[5-6]。同时，对于结直肠癌的早期发病过程缺乏有效的筛查指标，虽然癌胚抗原及糖链蛋白125等上皮肿瘤糖蛋白成分能够在一定程度上提高结直肠癌的诊断率，但其筛查的灵敏度及特异度较低，具有较为明显的局限性。

结直肠癌的发病机制较为复杂，遗传因素、基因突变等均可能增加肿瘤的发生风险。近年来，分子生物学水平的异常被认为是影响恶性肿瘤发生的核心因素，相关蛋白表达异常会增加肿瘤细胞扩散的风险，导致肿瘤细胞正常分化或促凋亡过程明显失常[7-8]。SDF-1是细胞间质成分修饰因子，对于肿瘤细胞DNA末端具有修饰作用，能够提高染色体DNA的错配风险，并抑制错配修复因子cyc的活性[9]。Vasohibin-1能够促进新生血管形成，促进血管内皮细胞的生成及迁移，提高肿瘤病灶组织的血流灌注速度，增加血流灌注量，从而为肿瘤的复发或转移提供条件[10]。PD-1作为程序性凋亡抑制因子，不仅能够影响肿瘤细胞的分化及凋亡，还能够调控肿瘤细胞的细胞周期[11]。部分研究探讨了PD-1的表达与结直肠癌患者临床特征的关系，认为高表达的PD-1是促进患者临床分期、细胞分化等病理进程恶化的重要因素[11]，但对于Vasohibin-1、SDF-1的探讨不足。

表2 不同临床特征结直肠癌患者Vasohibin- 1、PD- 1、SDF- 1表达情况的比较

表3 结直肠癌患者Vasohibin- 1阳性表达影响因素的多因素分析

表4 结直肠癌患者PD- 1阳性表达影响因素的多因素分析

表5 结直肠癌患者SDF- 1阳性表达影响因素的多因素分析

本研究发现，结直肠癌组患者的Vasohibin-1、PD-1、SDF-1阳性表达率均明显高于结直肠息肉组，差异均有统计学意义（P＜0.01）。提示Vasohibin-1、PD-1、SDF-1均参与了结直肠癌的发生和发展，具体机制可能如下[12]：①Vasohibin-1高表达能够导致肿瘤细胞增殖过程中毛细血管形成速度的变化，增加血管数量并导致局部血流动力学紊乱；②PD-1高表达能够促进下游凋亡抑制因子（如Cox-2）的表达水平升高，抑制肿瘤细胞凋亡；③SDF-1高表达对于肿瘤细胞间质成分的分解作用，能够为肿瘤细胞的增殖及扩散提供条件，并为肿瘤细胞的黏附及浸润过程提供黏附分子。吴佳茗等[13]分析了小样本量的结肠癌患者的免疫组化资料，结果发现，PD-1的阳性表达率平均可上升25%以上，结肠癌的临床分期越晚、患者的生存预后越差，治疗后的复发率越高，PD-1的阳性表达率越高。本研究发现，有淋巴结转移、组织学分型为黏液腺癌、Ⅲ～Ⅳ期、肿瘤直径≥5 cm结直肠癌患者的Vasohibin-1、PD-1、SDF-1阳性表达率明显高于无淋巴结转移、组织学分型为管状腺癌、Ⅰ～Ⅱ期、肿瘤直径＜5 cm的患者，差异均有统计学意义（P＜0.01）。提示Vasohibin-1、PD-1、SDF-1表达情况与结直肠癌患者的临床特征密切相关，可能是因为这些指标均能影响肿瘤组织对邻近正常肠道黏膜上皮组织的浸润，同时可以影响肿瘤早期的细胞浸润过程，尤其是Vasohibin-1还能够导致血管内皮细胞的氧化应激损伤，影响肿瘤细胞的微环境，并维持肿瘤干细胞的活性[14]。但本研究并未发现Vasohibin-1、PD-1、SDF-1表达情况与结直肠癌患者肿瘤部位的关系，提示左侧和右侧结肠癌不存在明显的分子生物学差异。本研究还发现，淋巴结转移和TNM分期是影响结直肠癌患者Vasohibin-1、PD-1、SDF-1阳性表达的独立因素（P＜0.05）。本研究的创新性在于探讨了Vasohibin-1、SDF-1与结直肠癌患者临床特征的关系。结直肠癌患者的Vasohibin-1、PD-1、SDF-1阳性表达率较高，且与淋巴结转移和TNM分期密切相关。

[1]孙朝文,周崇民,张皓,等.晚期结肠癌患者生物治疗临床 应用的研究进展[J].重庆医学,2017,46(8):1123-1125.

[2]艾克热木·玉苏甫,帕尔哈提·沙依木,艾孜买提·热合木吐拉,等.40岁以下及70岁以上结直肠癌患者临床病理特点及预后对比[J].中国老年学杂志,2014,34(17):4807-4810.

[3]蔡骏.SDF-1及其受体CXCR4对结肠癌肝转移潜能的影响研究[J].中国现代普通外科进展,2017,20(1):10-12;17.

[4]汤佳琳,黄镜.PD-1/PD-L1免疫检查点抑制剂在晚期结直肠癌的药物治疗进展[J].癌症进展,2017,15(8):872-875.

[5]Du F,Shi SS,Sun YK,et al.Clinicopathological characteristics and prognosis of colorectal cancer in Chinese adolescent patients[J].Chin Med J(Engl),2015,128(23):3149-3152.

[6]Miyoshi N,Ohue M,Shingai T,et al.Clinicopathological characteristics and prognosis of stageⅠV colorectal cancer[J].Mol Clin Oncol,2015,3(5):1093-1098.

[7]陈森林,陈涵,吴星刚,等.多原结直肠癌的临床病理特征及手术治疗对术后生活质量的影响[J].实用癌症杂志,2014,29(10):1223-1225.

[8]陶凯雄,高金波,王国斌.老年结直肠癌患者的临床病理学特点[J].中华胃肠外科杂志,2016,19(5):495-498.

[9]朱涤潮,张涛,张明辉,等.MMR/MSⅠ在结直肠癌抗PD-1/PD-L1免疫检查点治疗中的作用[J].肿瘤学杂志,2017,23(10):904-909.

[10]史建红,王冰,周金飒,等.Vasohibin蛋白质家族与肿瘤血管新生[J].生命的化学,2014,34(4):512-516.

[11]肖植涛,张荣欣,赵阳,等.散发性结直肠癌患者错配修复蛋白表达与临床病理特征的关系[J].中华医学杂志,2017,97(16):1248-1251.

[12]Ⅰnagaki Y,Gao J,Song P,et al.Clinicopathological utility of sialoglycoconjugates in diagnosing and treating colorectal cancer[J].World J Gastroenterol,2014,20(20):6123-6132.

[13]吴佳茗,陈卫昌,张海玲,等.结直肠癌患者外周血PD-1的表达及其临床意义[J].胃肠病学,2016,21(5):274-277.

[14]刘启志,楼征,高显华,等.直肠癌患者术后生存与复发的临床病理因素探讨[J].中华普通外科杂志,2017,32(1):5-8.