M型磷脂酶A2受体和I型血小板反应蛋白7 A域在特发性膜性肾病中表达研究

鲜 丽，李贵森，汪 伟

(1.西南医科大学附属医院肾内科，四川 泸州 646000；2.四川省人民医院·四川省医学科学院肾病内科，四川 成都 610072)

膜性肾病(membranous nephropathy，MN) 是成人肾病综合征最常见病理类型之一[1]，近年来其发病率逐步上升，已成为继IgA肾病之后的第二大原发性肾小球疾病[3]。MN按病因可分为特发性膜性肾病(idiopathic membranous nephropathy，IMN)和继发性膜性肾病(secondary membranous nephropathy，SMN)。IMN指未发现明确继发因素的膜性肾病，是一种自身免疫性疾病，目前认为其致病机制为循环中的抗体识别并结合足细胞组织抗原导致免疫复合物沉积在基底膜上皮下，从而导致肾病综合征的发生。近年来M型磷脂酶A2受体(M-type phospholipase A2 receptor，PLA2R)和I型血小板反应蛋白7 A域(thrombospondin- type 1 domain containing 7A，THSD7A)先后被确定为IMN特异性抗原[4]。针对这两个抗原及其相应抗体的研究主要集中于西方人群，而对于中国，尤其是西南地区膜性肾病患者这些抗体的特点还不清楚。本研究探讨我国西南地区IMN患者PLA2R和THSD7A的表达情况及其与IMN患者临床指标的相关性，现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料2016年1～12月四川省人民医院肾内科经肾活检确诊53例IMN患者(IMN组)，10例SMN患者(SMN组)，均未使用激素及免疫抑制剂治疗。本研究经本院伦理委员会批准，所有参试者均签署知情同意书。

1.2方法收集研究对象相关资料：①一般资料：性别、年龄、血压；②实验室资料：血肌酐(SCr)、血尿素氮(BUN)、血尿酸(BUA)、估算肾小球滤过滤(eGFR)、24小时尿蛋白(UPRO)、补体C3(Cc3)、C4(Cc4)、免疫球蛋白(IgG)；血清白蛋白(Alb)；血红蛋白(Hb)，甘油三酯(TC)、胆固醇(TG)。③肾穿刺三天内空腹静脉血5 ml，离心取血清，通过酶联免疫吸附法(ELISA)进行PLA2R抗体检测(试剂购自美国Sigma公司)。按说明书进行操作。结果判定：按照试剂盒提供标准：浓度<14 RU/ml为抗体阴性，≥20 RU/ml为抗体阳性，14～20 RU/ml为可疑阳性。B超引导下肾穿刺活检，肾组织经包埋固定后切片4 μm，脱蜡、脱水后进行THSD7A免疫组化(IHC)检测(1抗购自美国Sigma公司)，结果判定：沿肾小球基底膜呈暗棕色颗粒样沉积为阳性。

1.3统计学方法采用SPSS 17.0统计软件进行数据分析。计量资料以均数±标准差表示，正态分布数据比较采用t检验，非正态分布数据比较采用秩和检验；计数资料比较采用卡方检验。P< 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1基本临床资料两组年龄、性别、血BUN差异有统计学意义(P< 0.05)，其他项目差异无统计学意义(P> 0.05)，见表1。

表1 两组基本临床资料比较

2.2血清PLA2R表达情况IMN组Anti-PLA2R阳性率高于SMN组(χ2=5.521，P< 0.05)，见表2。Anti-PLA2R阳性组和Anti-PLA2R阴性组临床资料比较，差异均无统计学意义(P> 0.05)，见表3。

表2 两组血清Anti-PLA2R比较 [n(%)]

2.3THSD7A在肾脏病理组织中的表达情况本研究对53例IMN患者肾脏组织TSHD7A进行免疫组化染色，所有患者均为阴性。

3 讨论

近年来IMN发病率逐渐上升，对于IMN的发病机制研究成为研究热点，目前认为IMN致病机制为循环中的抗体结合足细胞上致病性抗原，从而形成原免疫复合物形成沉积，激活补体系统，导致基底膜结构改变，出现功能异常[1]。随着PLA2R、THSD7A的相继的发现，两者被认为是IMN的致病抗原[4]。并且国内外多篇文献报道两者在IMN均有表达。其中PLA2R在IMN和SMN中均有表达，其中在IMN中的阳性率70%～80%，而在SMN中因继发病种的不同而不同，但总的阳性率10%～20%[8]。并且大量的研究表明PLA2R是IMN的特异性抗原，在IMN的诊断、疾病活动度的监测及预后判断中具有重要作用[10]。因而血清PLA2R检测和肾活检组织PLA2R免疫组化染色，视为膜性肾病分类重要依据[8]。而THSD7A在IMN中的阳性率2.5%～5%，并且主要表达在PLA2R阴性的患者中，因此认为对于PLA2R阴性MN患者可以通过对THSD7A检测进一步明确分型。

表3 Anti-PLA2R阳性组和阴性组临床资料比较

本研究结果表明，IMN患者血清PLA2R阳性率约60.3%，低于之前的研究报道，但明显高于SMN组阳性率[8]。因此临床PLA2R检测对于我国西南地区的MN分型仍然具有重要的参考意义，尤其部分不能行肾穿刺活检的患者。另外本研究对比了PLA2R阳性的IMN患者-PLA2R阴性的患者的临床特点，试图通过患者临床表现来搜集IMN的临床诊断的证据，但两组并没有差异，表明PLA2R阳性患者和PLA2R阴性患者在临床表现是没有区别的，因为无法通过患者的临床表现进行区别。

本研究也对患者的肾脏病理组织进行THSD7A免疫组化染色，但并没有发现阳性患者。THSD7A阳性率在IMN中的阳性率为2.5%～5%，因此我们推测可能是样本量较小所致[15]。另外目前国内外对THSD7A的研究较少，尤其是对其致病机制，以及其与临床预后，疾病缓解复发之间的相关性。因此我们需要在后续的课题研究中，扩大样本量，对于THSD7A阳性患者加强随访调查，以便对THSD7A获得更深入的研究，以更好的指导临床。

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