黄芩黄酮提取影响因素及与黄连配伍后对黄酮溶出的动态影响*

周 静 李 敏 金伟锋 李晓红 韩 进 张宇燕

（浙江中医药大学，浙江 杭州 310053）

黄芩为唇形科黄芩Scutellaria baicalensis Georgi的干燥根，具有清热燥湿、泻火解毒、止血、安胎等功效［1］，临床主要用于湿温、暑湿，胸闷呕恶，湿热痞满，泻痢，黄疸，肺热咳嗽，高热烦渴，血热吐衄，痈肿疮毒，胎动不安，在医药、农业等领域应用十分广泛。黄芩主要含黄酮类、酚酸类、氨基酸、多糖、微量元素等［2-4］，其中黄酮及其苷类是其最主要的药效物质基础，已鉴定出结构的超过40余种，主要为黄芩苷、黄芩素、汉黄芩苷、汉黄芩素等。近来大量研究显示，黄芩及其黄酮类化合物具有抗菌抗病毒、抗氧化、清除氧自由基、抗炎、抗肿瘤、解热、镇痛、保护心脑血管及神经元、保肝等多种药理作用［5-6］。如黄芩总黄酮苷元对肝脏、肺具有明显的保护作用［7-10］；黄芩素可明显抑制模型小鼠耳廓的肿胀，具有体内抗炎作用［11］；黄芩素静脉注射可降低氧化应激反应和心肌的炎症反应，改善内毒素休克大鼠心肌的收缩能力［12］；黄芩苷可通过调节Foxp3的表达，促进Treg细胞功能，还可以通过脂质调节及免疫调节来改善动脉粥样硬化的病变进展［13］；黄芩苷因能减少Fas蛋白和FasL蛋白表达，而对新生缺氧缺血性脑损伤（HIBD）小鼠的神经元具有一定保护作用［14］；黄芩苷具有抗抑郁的作用，上调AMPA受体的表达，抑制抑郁模型大鼠神经元凋亡［15］。黄芩苷对CoCl2诱导的SHSY-5y细胞损伤具有明显的保护作用，可能因黄芩苷具有抗氧化作用，从而减少了细胞的损伤［16］。

配伍组方是中医用药特色，黄芩、黄连在临床常配伍使用，取得较好的临床疗效，实验研究也证明，两者配伍表现相须相使作用［17-19］。本实验主要开展影响黄芩黄酮提取的因素分析，可为黄芩的制剂工艺、资源开发等提供参考，并在此基础上，以黄酮类为代表成分，观察黄芩黄连不同比例配伍后对黄酮溶出的影响，从化学成分的角度探讨黄芩与黄连的中医药配伍规律。

1 材 料

黄芩、黄连药材购于胡庆余堂，均符合2015年版《中华人民共和国药典（一部）》［1］黄芩、黄连项下的要求。芦丁标准品（100080-200306），中国药品生物制品检定所。其余均为分析纯。DGG-9140电热恒温鼓风干燥箱，上海森信实验仪器有限公司；ARA520电子天平，美国奥豪斯Ohaus；TM-1900双光束紫外可见分光光度计，北京普析通用仪器有限责任公司。

2 方法与结果

2.1 对照品溶液的制备

精密称取芦丁对照品4.8 mg，用75%的乙醇溶解，摇匀，定容到25 mL的容量瓶中，即得质量浓度为0.192 mg/mL的对照品溶液。

2.2 供试品溶液的制备

精密吸取各试验的样品液1mL置于25 mL容量瓶中，加75%乙醇稀释至刻度，再吸取1 mL置于10 mL容量瓶加75%乙醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

2.3 最大吸收波长的选择

精密吸取芦丁对照品溶液2 mL，置25 mL容量瓶中，加5%NaNO2溶液1.0 mL，摇匀，放置6 min，加10%Al（NO3）3溶液 1.0 mL，摇匀，放置 6 min，加 4%NaOH溶液10.0 mL，摇匀，用75%乙醇定容至25 mL，摇匀，放置 15 min，以相应的试剂为空白，于 200～700 nm波长处扫描，结果在507 nm处有最大吸收。

2.4 标准曲线的制作

精密吸取对照品溶液 1、2、3、4、5、6、7 mL，置 25 mL量瓶中，5%NaNO2溶液 1.0 mL，摇匀，放置 6 min，加10%Al（NO3）3溶液 1.0 mL，摇匀，放置 6 min，加入 4%NaOH溶液10.0 mL，然后加75%乙醇溶液至刻度，在测定波长处测定吸收度。分别以吸收度为纵坐标，质量浓度为横坐标，绘制得到标准曲线y=0.0139x+0.0651（R2=0.9993），表明芦丁在 7.68～53.76 μg/mL 范围内与吸光度呈良好的线性关系。

2.5 精密度试验

精密吸取对照品溶液1 mL，按“2.4”项下标准曲线的制作操作测定6次，计算芦丁吸光度RSD=0.18%。表明其精密度良好。

2.6 稳定性试验

精密吸取同一供试品溶液，6 h内每隔1 h测定1次，计算=0.45%。显示其稳定性良好。

2.7 重复性试验

精密称取同批样品6份，按“2.2”项下供试品溶液及“2.4”项下“标准曲线制备”的方法操作测定，计算黄酮含量，结果RSD=1.52%。

2.8 回收率试验

取已知含量的黄芩，精密加入芦丁对照品适量，按“2.2”项下供试品溶液的制备和“2.4”项下标准曲线的制作操作测定吸收度，计算黄酮的平均回收率为98.52%，RSD=0.55%。

2.9 不同提取因素对黄芩黄酮含量的影响

2.9.1 不同加水量对黄酮提取的影响 取黄芩5g，分别加 6、8、10、12、14、16 倍体积的水煎煮 60 min 后，过滤，滤液定容至25 mL。按照“标准曲线制备”方法测定总黄酮含量。结果见图1，随溶剂体积增大，黄酮的质量浓度即溶出逐渐增加，当10倍体积时提取质量浓度最高，随后逐渐降低。

图1 不同加水量对黄酮质量浓度的影响

2.9.2 不同颗粒大小对黄酮提取的影响 取5 g黄芩最粗粉、粗粉、中粉、细粉，分别加10倍体积的水煎煮60 min后，过滤，滤液定容至25 mL。按照“标准曲线制备”方法测定总黄酮含量。结果见图2，随着粒度减小，黄酮溶出逐渐增加，其中细粉黄酮溶出质量浓度最高。

图2 不同颗粒大小对黄酮质量浓度的影响

2.9.3 不同提取时间对黄酮提取的影响 取5 g黄芩，加 10 倍体积的水，分别煎煮 5、10、15、30、45、60、75、90、105、120 min 后过滤，滤液定容至 25 mL。 按照“标准曲线制备”方法测定总黄酮含量。结果见图3，随着提取时间，黄酮逐渐溶出，当45～60 min到达最高，而后基本不再大量增加。

图3 不同提取时间对黄酮质量浓度的影响

2.9.4 不同提取次数对黄酮提取的影响 取5 g黄芩，每次加10倍体积的水，分别煎煮1次、2次、3次、4次、5次后过滤，滤液定容至25 mL。按照标准曲线制备方法测定总黄酮含量。结果见图4，当提取2次时所测的黄酮含量最高，随着提取次数的增多，黄酮质量浓度并没有增加，反而降低了。

图4 不同的提取次数对黄酮质量浓度的影响

2.10 黄芩与黄连不同比例配伍后对黄酮溶出的动态影响

取黄芩与黄连以 1∶1（黄芩 5 g、黄连 5 g）、1∶2（黄芩 5 g、黄连 10 g）、1∶3（黄芩 5 g、黄连 15 g）、2∶1（黄芩10 g、黄连 5 g）、3∶1（黄芩 15 g、黄连 5 g）等不同的比例配伍，分别加 10 倍体积的水，在煎煮 15、30、45、60、75、90 min等不同时间点，按照“标准曲线制备”方法测定总黄酮含量。结果见表1及图5，黄芩与黄连不同比例配伍后，黄酮溶出的速率受到明显的影响，溶出规律也不尽相同：当1∶1（黄芩与黄连）配伍时，分别在30、80 min有最大溶出，2∶1配伍时，在30 min有较大溶出，3∶1配伍时，在30 min开始有较大溶出，随后均保持一定水平，1∶2配伍时，在 30 min有较大溶出，1∶3配伍时，黄酮溶出均比较高，且在90 min达到较高的浓度 24.022 μg/mL。

表1 黄芩与黄连不同比例配伍后对黄酮溶出的动态影响

图5 黄芩与黄连不同比例配伍后对黄酮溶出的动态影响

3 讨 论

本实验通过对加水量、颗粒大小、提取时间、提取次数等因素的考察，结果表明这4个因素对黄芩的主要有效成分黄酮类化合物的溶出均具有明显的影响，在此基础上，选出各自最佳条件为：加水量为10倍体积，颗粒大小为细粉，提取时间为60 min，提取2次。实验结果表明在含黄芩的制剂工艺、资源开发等方面应充分考虑这些因素。

黄酮是黄芩的主要有效成分之一，具有较强的药理作用，本实验在研究影响黄芩黄酮提取因素的基础上，观察了与不同比例的黄芪配伍后对总黄酮溶出的影响，以黄酮类成分为考察指标，探讨中医药配伍对成分的影响。实验结果显示，黄芩与黄连不同比例配伍后对黄酮溶出的动态影响比较明显，且当黄芩与黄连3∶1配伍时，黄酮溶出最高，表明中药不同比例配伍对成分的溶出具有明显的影响，从而在临床表现出不同的治疗效果。

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