羧基张力蛋白素在膀胱尿路上皮癌中的表达及其临床意义

郭 超，张祥生

膀胱癌是泌尿系统中最常见的恶性肿瘤之一，每年以数以万计的速度在增加［1-3］。膀胱癌患者中，发病率最高的地区为欧洲、北美，最低的地区为中非，且男性明显多于女性［4］。 羧基张力蛋白素（CTEN）是张力蛋白（TENSIN）家族成员之一［5］。 近年来的研究发现，CTEN与多种肿瘤的侵袭性和预后有明显的相关性，在肿瘤进展中起到关键作用，是一个重要的预后因素［6，7］。

该文采用免疫组织化学SP法分别对82例膀胱尿路上皮癌 （bluddar urothelial carcinoma，BUC）组织和膀胱正常组织中CTEN的表达程度进行检测，研究CTEN的表达与BUC的病理分级、临床分期的联系，为进一步探讨CTEN在膀胱癌发生、发展过程中的作用及临床意义提供依据。

1 资料与方法

1．1 一般资料 收集2015年—2016年解放军150中心医院泌尿外科手术切除膀胱癌组织82例，所有标本均由笔者所在医院病理科医师复核分级并有完整的临床资料，其中男49例，女33例；年龄32～84岁，平均54．5岁。膀胱癌组织病理分级（按WHO 2004标准）：低级别乳头状尿路上皮癌55例；高级别乳头状尿路上皮癌27例。临床分期根据UICC 的 TNM 法进行分类：Ta～T1期 50 例，T2～T4期32例。全部病例术前均未行放、化疗。72例行经膀胱尿路肿瘤电切术，10例行膀胱部分切除术。对照组15例均为正常膀胱组织。

1．2 主要试剂 兔抗人CTEN单克隆抗体购自美国Abcam公司，DAB显色试剂盒购自上海生物技术有限公司，柠檬酸盐缓冲液 （0．01 mol/L，PH为6．0）购自中杉金桥公司。

1．3 实验方法

1．3．1 实验步骤 免疫组化采用SP法。所有组织均经多聚甲醛固定，常规脱水，石蜡包埋，切片5 μm，脱蜡和水化后，PBS洗涤，柠檬酸盐抗原修复液中进行抗原修复，3%过氧化氢溶液处理，PBS洗涤，正常羊血清封闭（室温 20～30 min）；PBS 冲洗，滴加1/400稀释的一抗（兔抗人CTEN单克隆抗体），4℃过夜；PBS冲洗，滴加二抗 （生物素标记的羊抗兔lgG），室温孵育 20 min；PBS 冲洗，DAB 显色，苏木素复染，1%盐酸乙醇浸洗2 s，流水冲洗2 min，脱水，封片。显微镜下观察。

1.3.2 判断标准 阳性染色为细胞核或细胞质存在不均质棕色颗粒。使用半定量积分法分析实验结果，随机观察切片中的5个高倍视野（400倍），每个视野下计算着色细胞总数并观察染色质的染色深度。以染色强度和阳性细胞数这两方面进行评估。染色强度：不着色或显示不清者记为0分、浅黄色记为1分、棕黄色记为2分、深褐色记为3分。阳性细胞数：无阳性细胞为0分，＜25%记1分，25%～50%记 2分，＞50%记 3分。两者相乘 0分为（-），1～3分为（+），4～5 分为（++），≥6 分为（+++）。弱阳性为（+），中度阳性为（++），强阳性为（+++）。

1.4 统计学分析 采用SPSS 19．0统计软件处理，两组间计数资料分析采用χ2检验。检验水准α=0．05。

2 结果

CTEN在正常膀胱组织、膀胱癌组织中均有表达，其中，正常膀胱组织中大部分为阴性表达，少部分为阳性表达，阳性表达率为 26．27%（4/15），主要位于细胞质中。而在BUC组中，CTEN阳性表达率为 63．41%（52/82）。其中，低级别膀胱癌阳性表达率为 54．54%（30/55），高级别膀胱癌阳性表达率为81．48%（22/27），主要位于细胞质中（图 1）。

图1 免疫组化检测CTEN在正常膀胱组织中及膀胱尿路上皮癌不同病理分级中的表达情况（×400）

膀胱癌组织中CTEN的表达阳性率均较正常膀胱黏膜组织高（P＜0．05），见表 1。 并且随着肿瘤临床分期和病理分级的升高，CTEN的表达也升高，且免疫组化结果中染色强度变深，差异有统计学意义（P＜0．05）。CTEN的表达在不同性别和年龄间的差别无统计学意义（P＞0．05），见表 2。

表1 正常膀胱组织与BUC中CTEN表达的比较（例）

表2 BUC组织中CTEN的表达与临床病理特征的关系（例）

3 讨论

膀胱癌中超过90%是BUC，可分为非肌层浸润性和肌层浸润性。临床病理研究表明，大多数非肌层浸润性膀胱癌患者（70%～80%）普遍易复发但很少进展，而肌层浸润性膀胱癌患者则侵袭性大，5年生存率约30%～60%［8-11］。膀胱癌的发生机制还未完全明确，因此迫切需要从根本上找出参与膀胱癌发生、发展及预后的基因或肿瘤标志物，制定准确有效的诊断和治疗方法，对指导膀胱癌的临床预后评估、治疗方式的选择有重大意义，从而进一步减少膀胱癌的发生和死亡率。

CTEN是张力蛋白（tensin）家族中继tensin-1、tensin-2、tensin-3的第四个成员，由于其缺乏N-末端蛋白结合域，所以其较短。CTEN在人体中主要位于前列腺和胎盘组织，而在其他组织中表达低。有研究表明CTEN蛋白在很多恶性肿瘤，如：胸腺瘤、结肠癌、胃癌、肺癌等组织中都高表达［7，12-20］，被认为是一种致癌基因。另外有细胞学实验研究表明，CTEN蛋白能够增加细胞的运动和侵袭能力，这个是肿瘤增殖和转移的前提条件。

为明确CTEN在膀胱癌组织中是否存在表达异常且发挥抑癌基因作用，该研究采用免疫组织化学方法检测CTEN在膀胱癌组织及正常膀胱组织中的表达。结果显示在膀胱癌组织中CTEN的表达与正常膀胱组织相比明显升高，差异有统计学意义。目前也有研究结果表明，CTEN在肿瘤进展及预后方面起关键作用，其表达缺失一般提示肿瘤具有高侵袭性，预示患者预后不良、生存率下降。本研究结果显示在病理分级及临床分期更高的膀胱癌组织中CTEN的表达同样增高，差异有统计学意义。由此可推测可能对膀胱癌的诊断和治疗提供辅助参考价值，可能成为预测肿瘤预后的分子标志物和潜在治疗靶点。

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