MS-222麻醉秦岭细鳞鲑效果的研究

杨 希，李 平*，袁永峰，薛 梅，王 丰,2

(1.陕西省水产研究所，陕西西安 710086；2.中国水产科学院黄河水产研究所，陕西西安 710086)

秦岭细鳞鲑(Brachymystaxlenoktsinlingensis)属鲑形目、鲑科、细鳞鱼属,别名梅花鱼、花鱼，国内分布仅见于陕西、甘肃渭河的部分山区支流和北侧支流的上游中，属国家二级水生野生保护动物[1]，多栖息山涧溪流中，肉食性，主要摄食水生昆虫和蚊蝇，活动敏捷，应激性强，在人工繁育和增殖放流中容易引起应激反应，导致鱼体掉鳞、充血、受伤，继发感染，引起死亡[2]。

麻醉剂能够降低鱼体应激反应，方便人工操作和运输，降低对鱼体的伤害，提高成活率[3]。现在鱼用麻醉剂很多，包括丁香酚、CO2、喹哪啶、美托味酯等近30种。目前，对秦岭细鳞鲑繁殖、标记、运输等过程中麻醉使用和剂量问题尚处于探索阶段。间氨基苯甲酸乙酯甲磺酸盐(C10H15NO5S,tricaine methane sulfonate，MS-222)是一种性能优良的鱼用镇静剂，它具有使用浓度低、作用时间长、见效快、复苏快、无副作用等优点，被广泛用于鱼类的活体运输、亲鱼采卵采精、标志放流、外科手术及免疫注射等领域[4]，是唯一被美国FDA批准能用于食鱼的麻醉剂[5]。被动式整合雷达(PIT)标记是近年来比较流行的电子生物标记技术，被标记的鱼类通过专用设备进行扫描便可识别。该技术准确率高，可以让每个被标记动物个体有一个唯一的身份识别码，有助于回捕并对放流鱼类进行跟踪监测[6]。本试验结合生产实际，探讨了不同浓度MS-222对秦岭细鳞鲑苗种和成鱼在人工繁育、标记放流及运输环节中使用剂量和麻醉效果，以期为MS-222在秦岭细鳞鲑的麻醉研究方面提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料

秦岭细鳞鲑成鱼为人工驯化培育的野生个体，体重为160 g±52 g，苗种为全人工繁育所得，规格为9.8 g±5.2 g，试验用鱼均健康无伤病。试验在养殖场进行，麻醉前停食1 d，试验用水为自然河道水，pH 7.8～8.5，溶解氧≥7.5 mg/L，水温10.5℃。MS-222购自北京绿源伯德生物科技有限公司。

1.2 方法

1.2.1 成鱼麻醉试验 一般来说，MS-222的剂量与水产品的种类和大小有关[7]。参照文献[5]，将MS-222溶于水配成15、25、30、35、40、45、50 mg/L的麻醉液。考虑到秦岭细鳞鲑为珍稀水生动物，综合试验对象及实际要求，没有设置致死浓度。将成鱼从暂养池中移入麻醉容器中，每组放30尾，雌雄比为1∶2，观察鱼的活动情况，用秒表记录鱼体进入不同麻醉阶段的时间。随后，转入相同水温的清水中复苏，记录鱼体完全复苏的时间。麻醉和复苏时间为最后1尾试验鱼进入到相应状态所用的时间。

在MS-222的作用下，秦岭细鳞鲑在麻醉和复苏阶段表现出一系列不同的行为变化，不同的学者对麻醉和复苏过程的分期标准不尽相同，参考王利娟等[4]，魏锁成[8]，刘长琳等[9]分期标准，结合秦岭细鳞鲑的实际情况，将秦岭细鳞鲑的麻醉过程分为5个时期，复苏过程分为5个时期(表1)。

1.2.2 PIT标记麻醉试验 一般采用PIT人工标记放流技术。标记前，为减少操作过程中的物理伤害，一般会对鱼苗进行麻醉。选择合理的麻醉浓度，有利于操作。结合人工繁育试验的试验效果中MS-222对各种鱼的使用浓度和作用时间，设置麻醉浓度为25、30、35、40、45、50 mg/L的浓度梯度，按照人工繁育的操作步骤，参考表1和表2，记录鱼苗麻醉时间和复苏时间。

表1 麻醉程度分期及鱼类行为特征

根据放流秦岭细鳞鲑的大小选择规格为1.35 mm×0.7 mm的芯片。采用背鳍基部植入芯片的方式，操作时离背鳍基部3 mm～5 mm，沿着头的一边向尾部方向30度角插针植入。植入芯片后，在伤口处涂抹红霉素软膏，并将标记鱼苗放入室内暂养池进行分组饲养，每日观察伤口愈合情况、有无感染及芯片脱落情况发生，并及时进行应对处理。

1.2.3 苗种麻醉运输试验 暂养观察1周后，无死亡和芯片掉落现象发生的鱼苗采用人工增氧运输至放流地点。考虑到运输过程中活鱼不能进入全麻状态，参考魏锁成等MS-222对各种鱼的使用浓度和作用时间，设置0、10、15、20、25、30 mg/L 5个浓度梯度，每个氧气袋装50尾鱼苗，在保证相同运输条件的情况下，测定其成活率。

表2 复苏过程分期及鱼类行为特征

1.2.4 数据处理分析 用SPSS18.0和Excel软件对结果分析进行处理，P<0.01表示差异极显著，P<0.05表示差异显著，P>0.05表示差异不显著。

2 结果

2.1 不同浓度MS-222对秦岭细鳞鲑亲鱼麻醉效果

由表3可知，随着MS-222浓度的增加，秦岭细鳞鲑亲鱼进入同一麻醉期的时间缩短，而完全复苏的时间增加。在15 mg/L和20 mg/L的浓度下，鱼体保持在深度镇静期。随着浓度加深，麻醉程度随之加深，复苏所用时间越来越长。在所设置的浓度梯度内，24 h后的存活率可以达到100%。该试验是为了找到合适的可用于人工繁育的麻醉浓度，出于实际情况考虑，并未设置过高浓度，避免亲鱼受损。

单因素方差分析发现，MS-222浓度为35 mg/L和40 mg/L时，麻醉效果差异不显著(P>0.05)，其余各麻醉浓度为差异极显著(P<0.01)。

2.2 不同浓度MS-222对秦岭细鳞鲑苗种麻醉效果

由表4可知，随着MS-222浓度的增加，秦岭细鳞鲑苗种进入同一麻醉时期所用的时间越来越短，复苏时间越来越长。在25 mg/L的浓度下，鱼苗保持在深度镇静期。在30 mg/L、35 mg/L的浓度下，鱼苗保持在平衡失调期。在40 mg/L、45 mg/L的浓度下，鱼苗保持在深度镇静期。单因素方差分析发现，MS-222浓度为35、40、45mg/L时，麻醉效果差异不显著(P>0.05)，其余各麻醉浓度差异极显著(P<0.01)。

表3 不同浓度MS-222对秦岭细鳞鲑成鱼麻醉效果

注:同列平均值间上标字母不同者差异显著(P<0.05) 。

Note: Means with different superscript letters in the same column were significantly different(P<0.05) ．

表4 不同浓度MS-222对秦岭细鳞鲑苗种麻醉效果

注:同列平均值间上标字母不同者差异显著(P<0.05) 。

Note: Means with different superscript letters in the same column were significantly different(P<0.05) ．

2.3 不同浓度MS-222对秦岭细鳞鲑苗种运输麻醉效果

由表5可知，伴随着MS-222浓度的增大，麻醉反应越来越强烈，苗种运输过程中的成活率略微有所下降。单因素方差分析发现，MS-222浓度为10mg/L和15mg/L时，麻醉效果差异不显著(P>0.05)，其余各麻醉浓度均存在极显著差异(P<0.01)。

表5 不同浓度MS-222对秦岭细鳞鲑苗种运输麻醉效果

注:同列平均值间上标字母不同者差异显著(P<0.05) 。

Note: Means with different superscript letters in the same column were significantly different(P<0.05) ．

3 讨论

3.1 关于最佳麻醉状态

使用麻醉剂后，麻醉剂被鳃丝吸收，进入血液循环系统，然后在大脑中累积，随着时间的延长，最终在血液中达到平衡，此时，鱼体能够达到一个稳定的、行为特征明显的最佳麻醉状态[10]。处于深度镇静期状态下的鱼体对外界刺激几乎没有反应能力，代谢率下降，但依然能够保持平衡，相比于轻度镇静期鱼体显得更为安定，有利于运输。若麻醉程度过深，鱼体会因肌肉张力丧失，失去平衡，无法游动，最终聚集引起缺氧窒息，或者与运输装置撞击发生机械损伤[11]，因此，活鱼运输的最佳麻醉状态是深度镇静期。

3.2 关于MS-222对秦岭细鳞鲑的麻醉效果

MS-222的处理浓度一般为0.2 g/L～5.0 g/L，依据动物的体重大小及种类而有不同。国内学者研究表明，MS-222 麻醉鲈鱼(Pescepersico)[4]保活适宜浓度为80 mg/L，刀鲚(Coiliaectenes)麻醉适宜浓度为150 mg/L[12]，中华鲟(Acipensersinensis)和施氏鲟(Acipenserschrenckii)较好麻醉效果浓度为30 mg/L～40 mg/L[13]，斑马鱼 (Daniorerio)深度麻醉浓度为75 mg/L～90 mg/L[14]，半滑舌鳎(Cynoglossussemilaevis)适宜麻醉效果浓度为60 mg/L[15]，国外学者对真鲷(Pagrusmajor)[16]、庸鲽(Hippoglossus)[17]等鱼种进行了研究。目前,MS-222对秦岭细鳞鲑的麻醉剂量研究却鲜有报道。结合试验结果，认为当MS-222的浓度达到45 mg/L，对秦岭细鳞鲑亲鱼麻醉效果最佳。为保证后期成活率，当MS-222达到40 mg/L，对秦岭细鳞鲑苗种麻醉效果最佳。当MS-222的浓度为10 mg/L时，秦岭细鳞鲑苗种运输效果最佳。

3.3 关于不同水温和鱼的规格下麻醉效果

MS-222在不同水温、不同规格下麻醉效果存在差异性。廖国璋等[18]研究结果表明，水温越低，入麻时间越短，麻醉效果随温度降低而增加，较低水温对鱼体本身就有一定的麻醉效果。陈细华等[13]研究发现，同种鱼，规格越小，对MS-222的反应更敏感；相同麻醉浓度，规格越大，进入深度麻醉状态所需时间越长。

秦岭细鳞鲑为冷水性鱼类，在设置试验浓度梯度时，相比较于其他种类，MS-222试验最高浓度和最低浓度都进行了相应调整。面对不同规格大小的秦岭细鳞鲑，MS-222试验浓度也做出了相应调整，从而使得试验效果更加科学。

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