高效液相色谱法测定决明退障口服液中沙苑子苷、芍药苷的含量Δ

陈玲玲，金 璇，赵 颖(南京市中医院药学部，江苏 南京 210001)

决明退障口服液为南京市中医院的医院制剂，主要由何首乌(制)、决明子(炒)、白芍(麸炒)、潼蒺藜及沙苑子等9味药组成，功效为平肝养血、益肾滋阴，用于治疗各种内眼病，以明目护眼。根据《江苏省医疗机构制剂标准提高工作方案》的通知，结合南京市中医院制剂的实际情况，需对医院制剂的质量控制标准进行完善[1]。而医院制剂普遍存在工艺简便、质量控制标准不完善的问题，不利于全面掌握制剂的质量。本研究参考相关文献[2-6]，建立高效液相色谱法测定决明退障口服液中沙苑子苷、芍药苷的含量。

1 材料

1.1 仪器

Agilent 1290 Infinity超高压液相色谱仪(安捷伦科技有限公司)；VWD紫外检测器(安捷伦科技有限公司)；AL104电子天平[梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司]；KQ-500E型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；烧杯，容量瓶(10、25和50 ml)，移液管，锥形瓶等。Aglient ZORBAX Eclipse Plus C18柱(济南赛畅科学仪器有限公司)；Diamonsil C18(2)柱(迪马公司，柱号：225-1125)。

1.2 药品与试剂

决明退障口服液(批准文号：苏药制字Z04000796；批号：150730、150827及151119)；芍药苷对照品(批号：110736—201438)、沙苑子苷对照品(批号：111803—201403)，均购自中国食品药品检定研究院；甲醇、乙醇、乙腈及磷酸等试剂均购自南京化学试剂有限公司。沙苑子(批号：150402)、炒白芍(批号：150301)由亳州永刚中药饮片厂提供。

2 方法与结果

2.1 沙苑子药材中沙苑子苷的含量测定

2.1.1 溶液的制备：(1)对照品溶液。取沙苑子苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 ml含20 μg的溶液。(2)供试品溶液。取沙苑子药材粉末(过3号筛， 50目)约0.5 g，精密称定，置于具塞锥形瓶中，精密加入60%乙醇25 ml，称定锥形瓶的总质量，水浴加热回流1 h，取出放冷，再称定锥形瓶质量，缺失的质量用60%乙醇补足，摇匀，滤过，取续滤液，即得[7]。

2.1.2 色谱条件：色谱柱为Aglient ZORBAX Eclipse Plus C18柱(2.1 mm×50 mm，1.8 μm)，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.1%磷酸溶液(V∶V=21 ∶79)为流动相；检测波长为266 nm。理论板数按沙苑子苷峰计算应≥4 000。

2.1.3 含量测定：精密吸取沙苑子的对照品溶液、供试品溶液各10 μl，按“2.1.2”项下条件进样测定，平行进样2次，以外标两点法计算样品中的沙苑子苷的含量。结果显示，沙苑子药材中沙苑子苷的含量为0.070 6%，高于《中华人民共和国药典》(2015版)沙苑子药材项下“含沙苑子苷不低于0.06%”的要求，见表1。

表1 沙苑子药材中沙苑子苷的含量测定结果Tab 1 Determination of complanatuside in Milkvetch herb

2.2 决明退障口服液中沙苑子苷的含量测定

2.2.1 溶液的制备：(1)对照品溶液。取沙苑子苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 ml含20 μg的溶液。(2)供试品溶液。用移液管精密量取样品10 ml，加稀乙醇定容至50 ml容量瓶中，超声(频率40 kHz，功率500 W)处理20 min，放冷，滤过，取续滤液，即得。

2.2.2 色谱条件：与“2.1.2”项下条件相同。

2.2.3 线性关系考察：精密量取对照品溶液，加甲醇制得质量浓度分别为0.01、0.02、0.04、0.08、0.16及0.32 mg/ml的溶液。分别吸取上述溶液各10 μl，按“2.2.2”项下条件进样测定峰面积，以平均峰面积(Y)为纵坐标，进样质量浓度(X)为横坐标。得线性回归方程Y=21 338X-29.63，r=0.999 6(n=6)。结果表明，沙苑子苷进样量在1～32 μg范围内线性关系良好，见图1。

图1 沙苑子苷的标准曲线图Fig 1 Standard curve of complanatoside

2.2.4 含量测定：分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液各10 μl注入高效液相色谱仪中，平行进样2次，取平均值，再以外标两点法计算样品中沙苑子苷的含量，见表2。

表2 决明退障口服液中沙苑子苷的含量测定结果Tab 2 Determination of complanatuside in juemingtuizhang oral liquid

2.3 沙苑子苷转移率的测定

沙苑子苷的转移率=决明退障口服液中沙苑子苷的含量/沙苑子药材中沙苑子苷的含量×100%。由上述结果和公式计算得出，决明退障口服液中沙苑子苷的转移率为80.31%。

2.4 炒白芍药材中芍药苷的含量测定

2.4.1 溶液的制备：(1)对照品溶液。精密称定芍药苷对照品适量，加甲醇制成每1 ml含60 μg的溶液。(2)炒白芍药材溶液。取炒白芍药材中粉约0.1 g，精密称定，置于50 ml容量瓶中，加50%乙醇35 ml，超声处理(频率45 kHz,功率250 W)30 min，放冷，加稀乙醇定容至刻度，摇匀，滤过，取续滤液即得炒白芍药材溶液[8]。

2.4.2 色谱条件：色谱柱为Diamonsil C18(2)柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.1%磷酸溶液(V∶V=14 ∶86)为流动相；检测波长为230 nm。理论板数按芍药苷峰计算应≥2 000。

2.4.3 含量测定：精密吸取对照品溶液、供试品溶液10 μl，分别注入高效液相色谱仪，平行进样2次，以外标两点法计算样品中的芍药苷的含量。结果显示，炒白芍药材中芍药苷的含量为3.2%，高于《中华人民共和国药典》(2015版)炒白芍药材项下“含芍药苷不低于1.2%”的要求，见表3。

表3 炒白芍药材中芍药苷的含量测定Tab 3 Determination of paeoniflorin in parched white peony root herbs

2.5 决明退障口服液中芍药苷的含量测定

2.5.1 溶液的制备：(1)对照品溶液。精密称定芍药苷对照品适量，加甲醇制成每1 ml含60 μg的溶液。(2)供试品溶液。用移液管精密量取样品10 ml，加50%乙醇定容至50 ml容量瓶中，超声(频率40 kHz,功率500 W)20 min后取出，待冷却后滤过，取续滤液即得。

2.5.2 色谱条件。与“2.4.2”项下条件相同。

2.5.3 线性关系考察：精密量取对照品溶液，加甲醇制成质量浓度分别为0.01、0.03、0.06、0.12、0.24及0.48 mg/ml的溶液。分别吸取上述溶液各10 μl，按“2.5.2”项下条件进样测定峰面积。以平均峰面积(Y)为纵坐标，进样质量浓度(X)为横坐标，得到线性回归方程为Y=12 467X-41.99，r=0.999 9(n=6)。表明芍药苷进样量在1～48 μg范围内线性关系良好，见图2。

图2 芍药苷的标准曲线图Fig 2 Standard curve of paeoniflorin

2.5.4 含量测定：精密吸取对照品溶液、供试品溶液各10 μl注入液相色谱仪，平行进样2次，用外标两点法计算样品中的芍药苷的含量，见表4。

表4 决明退障口服液中芍药苷的含量测定结果Tab 4 Determination of paeoniflorin in juemingtuizhang oral liquid

2.6 芍药苷的转移率的测定

芍药苷的转移率=决明退障口服液中芍药苷的含量/炒白芍药材中芍药苷的含量×100%[9]。由上述结果和公式计算得出，决明退障口服液中芍药苷的转移率为64.69%。

3 讨论

参照《中华人民共和国药典》(2015版)，本研究选择黄酮类成分中含量较高的沙苑子苷作为沙苑子含量测定的标准。结果显示，沙苑子中沙苑子苷含量的RSD为2.28%，而决明退障口服液中沙苑子苷含量的RSD为0.75%，重复性良好。但配制溶液过程中，3份供试品与3份对照品溶液仍然存在一定的误差，所以在各环节中，需增强操作熟练程度，减少误差。决明退障口服液中芍药苷的转移率为64.69%，低于沙苑子苷的80.31%。查阅相关文献[10-14]发现，加热、蒸馏或超声时间过长均可破坏芍药苷成分。芍药苷本身结构中含有苯甲酸酯键，所以在含水溶液中会因受热而变得极不稳定、易分解并且受其他成分的干扰，而医院制剂大多为水提制备，故芍药苷的含量及转移率均有不同程度的降低。

综上所述，决明退障口服液中芍药苷的转移率为64.69%，沙苑子苷的转移率为80.31%，均>50%。本研究可为决明退障口服液的质量控制标准提供参考数据。

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