左侧精索静脉曲张对成年大鼠附睾精子结合抗原11C和精子结合抗原11T表达的影响*

丁上书 霍涌玮 张晓田 路 明周劲松 邢俊平 王丽蓉 张秋养 田 宏**

1.西安交通大学第一附属医院泌尿外科（西安 710061）；2.西安交通大学基础医学院人体解剖与组织胚胎学系；3.西安交通大学基础医学院生殖医学研究中心；4.美国杜兰大学医学院结构与细胞生物学系，美国 新奥尔良 70112-2699

精索静脉曲张（varicocele，VC）被认为是导致男性不育或生育力低下的最常见的且可手术矫正的病因[1]。据调查显示35%～44%的原发性男性不育和45%～81%的继发性男性不育皆可发现左侧精索静脉曲张病变[2,3]。在精索静脉曲张导致男性不育或生育力低下的病理改变中，附睾的结构功能紊乱扮演着重要的角色[4]。附睾黏膜所分泌的蛋白，如cathelicidins抗菌肽、防御素、胱蛋白[5]和精子结合蛋白11家族（sperm associated antigen SPAG 11）等，皆参与了精子在附睾中成熟的过程[6]，一旦附睾出现病理性变化，势必造成精液质量和精子相关功能的下降，从而影响男性生育力[7]。

奈斯的自我实现原则指出，生态系统的复杂性和共生能够增加生物多样性，而生物多样性又能够增加人类自我实现的潜能，[4]3保护野生动物从根本上讲是为了保护人类自身的健康生活和生存环境。

精索静脉曲张的病理机制研究发现，精索静脉曲张可致附睾质量下降、附睾管腔直径变窄、附睾上皮主细胞凋亡增多[8]和α-葡萄糖苷酶活力下降[9]，电镜下发现附睾上皮主细胞中溶酶体变大增多、细胞器功能紊乱[10]，由其产生的附睾分泌蛋白在精索静脉曲张时亦发生变化[11]，这将导致精子成熟微环境的改变，可能成为精索静脉曲张致男性不育的原因。本研究试图通过建立实验性左侧精索静脉曲张（experimental left varicocele, ELV） 大鼠模型，明确精索静脉曲张是否引起精子结合抗原11C（SPAG11C ）和精子结合抗原11T（SPAG11T）的表达发生变化，为探究精索静脉曲张导致男性不育的机制提供资料。

材料与方法

一、材料

（一）动物分组及饲养

48只8周龄的健康雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠（购于西安交通大学医学部实验动物中心，经学校动物实验伦理委员会批准），饲养于相对湿度25%、温度23～25℃的无菌环境中，使用双蒸水和动物中心提供的大鼠饲料喂养，随机平均分笼并标记分为4组。A组：假手术2周组；B组：假手术4周组；C组：ELV造模2周组；D组：ELV造模4周组；每组均为12只大鼠。

三峡职院机制专业自实行“因材施教、分层培养、工学交替、强化技能”人才培养模式以来，学生就业率保持在95%以上，学生技能水平和创新能力得到较快提升，先后获得湖北省大学生机械创新设计大赛一等奖二次、二等奖一次，获得国家专利三项，参与企业技术开发多项。

ELV造模2周时，取模型鼠和假手术鼠双侧附睾，称量记录后分别置于Bouin's液和TRIzol液处理过的EP管中，完成附睾组织固定和低温冷冻保存。

（一）Real-time PCR

1.引物设计合成：GenBank上查询大鼠的SPAG11C（AY600145）、SPAG11T（AY600144）和β-肌动蛋白（NM031144）mRNA序列，利用Primer Premier 5.0软件设计引物序列，委托AuGCT基因公司合成。SPAG11C的上游引物5′-CCACAGCCATGAAACAGAGA -3′，上游引物5′-GAAGGGATGTAAGCAGCAGG -3′；SPAG11T的上游引物5′-TTTGTCAACCTCCTCCTTGC-3′，上游引物5′- CATGTGGGCTCCATATTTCC-3′；内参β-肌动蛋白的上游引物5′-GAGGGAAATCGTGCGTGAC-3′，上游引物5′- CTGGAAGGTGGACAGTGAG -3′。

2.总RNA的提取及逆转录cDNA：从-80℃中取出TRIzol-EP管，将附睾标本置于研磨器中，按照1mL Trizol:100mg 组织的比例加入TRIzol研磨成组织匀浆后，4℃，12 000×g，离心10min，将上清液移至DEPC（焦碳酸二乙酯，Sigma，美国）处理的EP管中，依次加入400μL氯仿、1mL 异丙醇后，取上清液， 4℃，12 000×g，离心10min后75%乙醇，洗涤2次。使用NanoDrop 2000型（Thermo， 美国）分光光度计测定RNA浓度及260/280nm比值。使用逆转录试剂盒（Thermo，美国）按步骤获取cDNA。

（二）动物模型建立方法[12]

二、方法

使用乙醚吸入麻醉，左侧中腹部1.0～1.5cm切口入腹腔，逐层暴露进入腹膜后隙寻找到左肾静脉，使用4-0无菌手术线联合直径0.5 mm细铁丝进行结扎，结扎完成后，抽出铁丝，关腹缝合。在ELV术后2周和4周时，将大鼠麻醉后剖腹观察，以左精索静脉直径较术前扩大2倍以上且双肾质量相似为标准成功建立ELV模型鼠。假手术只需分离暴露左肾静脉，不行结扎术。

（三） 动物器官取材及处理

大荔县土地总面积1776.4km2，分为北部黄土台塬区、中部洛灌区、东部黄河滩区和南部沙苑区，除沙苑区外，其他各区均适宜核桃生长，我们充分利用此类土地大力发展核桃产业，促进农村产业结构调整，带动群众增收致富。

新鲜制备Bouin's 固定液，并标记组别+左（右）侧备用。取用40支灭菌灭酶EP管，分别标记组别+左（右）侧，滴加300μL TRIzol液（Invitrogen，美国）备用。

3.PCR扩增：将假手术组的右侧附睾样本作为扩增对照组，建立25μL反应体系，模板cDNA 2μL（阴性对照不加模版，使用灭菌DEPC水），上下游引物各1μL， 2×SYBR Real-time PCR pre-mixture（百泰克，中国）12.5μL，灭菌DEPC水8.5μL。置于Real-time PCR仪TL988（Tianlong，中国）中，设置反应条件：95℃预变性5min，40个循环中95℃变性15 s，57℃（SPAG11C）/58℃（SPAG11T）/56℃（β-肌动蛋白）20 s。收集CT值，使用2-△△CT计算基因相对表达量。

突然，几枝步枪啪啪地响起。不用说，是国军的一支侦察小分队，他们与这拨鬼子遭遇上了。枪声一响，受了惊的大洋马便嘶鸣着四散开去，不一会儿，有马撞了地雷，轰轰作响。一匹马朝陈大勇方向撞来，眼看要踩上了，陈大勇猛地站了起来，照着马上的鬼子猛扣扳机。

（二）免疫组织化学染色

石蜡包埋各组别附睾组织，5μm切片，脱蜡至水，3% H2O2浸泡15min，1% Triton X-100（北京化学试剂厂，中国）穿透15min，5% 正常山羊血清封闭30min，滴加兔抗小鼠SPAG11C和SPAG11T一抗（1:1200，美国北卡罗莱纳大学Susan教授惠赠），4℃孵育过夜。次日恢复室温40min，滴加生物素化山羊抗兔二抗37℃孵育60min，滴加辣根酶标记的链霉卵白素37℃孵育25min，滴加DAB显色液3～5min，终止反应。使用苏木精染液复染细胞核1～3min，浸入自来水中返蓝15min，脱水透明后，中性树胶封片。以正常兔血清代替一抗作阴性对照。使用Olympus BX-1型数码显微镜观察镜下并采集图像。免疫组化图像结果使用图像分析软件（Image Pro Plus5.1，美国）测量比较。每组至少选取5张不同个体来源的切片，每张切片随机选择5个视野区（×400）获得阳性细胞的累积面积，并将计算所得的平均积分光密度（Integrated optical density, IOD）作为指标，数值与免疫强度成正比。

串联PHEV通常称为增程式混合动力汽车。串联PHEV结构原理如图4所示。其结构特点为：纯电动＋增程器，汽车车轮仅由电动机独立驱动，增程器可以是发动机—发电机组，发动机—发电机组发电直接供给电动机驱动汽车，同时发出的多余电量给蓄电池包充电，增程器还可以是燃料电池等。

三、统计学分析

结果输入SPSS19.0软件，各组别实验所得数据均以±s表示，使用单因素方差分析，P＜0.05认定为组间存在显著性差异。

结 果

一、Real-time PCR

本研究采用目的基因的相对扩增量作为指标，分别比较ELV造模2周组和4周组左侧附睾SPAG11C和SPAG11T mRNA 表达量与同期假手术对照组和右侧附睾的变化以及ELV造模2周和4周组间其mRNA表达的差异。ELV造模2周时，造模鼠左侧附睾的SPAG11C相对扩增量较假手术组显著性降低（P＜0.05，图1A），且左侧附睾低于右侧附睾（P＜0.05，图1A）。ELV造模4周，造模组左侧附睾SPAG11C相对扩增量较假手术组明显降低（P＜0.05，图1A），左侧附睾亦低于右侧附睾（P＜0.05，图1A）。 ELV造模4周组左侧附睾SPAG11C mRNA较ELV造模2周组同侧附睾显著性减低（P＜0.05，图1A）。ELV造模组SPAG11T mRNA的变化与SPAG11C相同（图1B）。

二、免疫组化

SPAG11C和T免疫组化阳性反应呈棕褐色，且两蛋白在附睾组织中的表达均呈现细胞特异性和区段特异性。SPAG11C和T均集中表达在附睾上皮的主细胞胞质中（图2A和图2B），晕细胞、基细胞和亮细胞表达呈阴性。SPAG11C沿附睾体部近端表达逐渐减弱甚至消失（图2A），而SPAG11T则在附睾头部远端、体部近端和尾部表达较强（图2B），在附睾头部始段未见两蛋白的表达。将积分光密度作为免疫强度的指标，ELV造模2周组和4周组左侧附睾SPAG11C和SPAG11T的表达与假手术组和同期右侧组相比，均显著降低（P＜0.05）；ELV造模4周组左侧附睾两蛋白的表达均较ELV造模2周组明显减少（P＜0.05），余未发现显著性差异（表1和表2）。

图1 SPAG11C和SPAG11T的mRNA在ELV造模2周组和4周组大鼠附睾组织中相对扩增量的分析

图2 ELV造模2周和4周时SPAG11C和SPAG11T在造模组和假手术组大鼠附睾组织中的表达

表1 ELV大鼠附睾组织中SPAG11C免疫组化积分光密度值测定结果（±s）

表1 ELV大鼠附睾组织中SPAG11C免疫组化积分光密度值测定结果（±s）

与同期假手术组比较，*：P＜0.05；与同期右侧附睾组比较，#：P＜0.05；与2周造模组同侧附睾组相比较，△：P＜0.05

组别 N SPAG11C ELV造模2周组左侧附睾 6 102.34±1.79*#右侧附睾 6 111.35±1.23假手术组 12 114.78±3.17 ELV造模4周组左侧附睾 6 92.81±1.30*#△右侧附睾 6 108.98±1.27假手术组 12 109.50±2.18

表2 大鼠附睾组织中SPAG11T免疫组化积分光密度值测定结果（±s）

表2 大鼠附睾组织中SPAG11T免疫组化积分光密度值测定结果（±s）

与同期假手术组比较，*：P＜0.05；与同期右侧附睾组比较，#：P＜0.05；与2周造模组同侧附睾组相比较，△：P＜0.05

组别 NSPAG11T ELV造模2周组左侧附睾 6 100.39±1.37*#右侧附睾 6 109.92±1.65假手术组 12 110.07±1.67 ELV造模4周组左侧附睾 6 90.46±2.92*#△右侧附睾 6 110.20±2.30假手术组 12 112.43±1.91

讨 论

SPAG11基因家族编码的产物，根据种属分类，又命名为Bin-1b（大鼠），附睾蛋白-2（灵长类），human epididymis-2（人类），承担免疫和生殖的功能[13,14]。由于不同启动子和选择性剪接机制至少生成了9个不同的剪切转录本，hSPAG11A- hSPAG11I在人类和黑猩猩中发现，恒河猴则出现了13个（m SPAG11B,C，E and m SPAG11J-S）[15-18]。SPAG11的蛋白同分体是由氨基末端的46个氨基酸耦合不同外显子组合编码的羧基末端组成。SPAG11C 是由外显子1,2（不完全）和3组成，SPAG11T则是由外显子1和2组成[19]。SPAG11是附睾上皮的分泌蛋白，证明与精子成熟密切相关。蛋白结构中有6个似防御素的半胱氨酸的模序，与固有免疫相关，SPAG11C 在附睾、睾丸、大脑、肾脏、前列腺和卵巢都有表达，并在多系统产生抗菌作用。众多研究表明，人类、恒河猴、牛、大鼠和小鼠的SPAG11蛋白和多肽主要通过穿透细胞膜和抑制大分子合成等机制，起到广谱的抗菌作用[14,20,21]。SPAG11C蛋白的羧基末端的多肽并没有抗菌作用，但可促进对完全蛋白的正确折叠。大鼠SPAG11C蛋白的氨基末端起到重要的抗菌作用。在人类，SPAG11蛋白家族同分体包括一个类似弗林蛋白的前蛋白转换酶模序（furin-like proprotein convertase motif RVKR）[22,23]。由于在RVKR裂隙形成的SPAG11多肽在附睾液中和体外精液及精子中存在[22]，且大鼠的SPAG11C 和SPAG11T有完全相同的RVKR结构，由附睾上皮产生，释放到管腔内，所有释放的SPAG11同分体在RVSK部位断裂，并确定哪种同分体可以获得有效的杀菌浓度[19]。SPAG11可以通过干扰细菌基本的代谢途径，包括细菌的相关DNA、RNA和蛋白的合成起到杀菌作用[14]。在体内外的实验模型中β-防御素和SPAG11基因表达可以由脂多糖刺激产生，同时受到TLR-介导的核因子κB（NF-κB） 活化和组蛋白甲基化、组蛋白乙酰化和DNA的甲基化的表观遗传规则的调节[24,25]。SPAG11基因变异显然是与男性生育表现密切相关的[26]。牛的SPAG11 基因变异对繁殖至关重要，已发现SPAG11C， E 和U的mRNA主要存在于成年雄牛的生殖管道[26]。SPAG11在精子成熟过程中起核心作用，特别是对精子的活动力有重要的提升作用[27]。大鼠SPAG11C在30d左右开始表达，这发生在33～50d雄激素快速增长之前，表明SPAG11C可能辅助刺激青春前期的启动。SPAG11T在性成熟期雄性大鼠的附睾头部密集表达，在60～90d的老年大鼠中，只表达在附睾的尾部，推知其与精子成熟密切相关[13]。而大鼠防御素BIN1B的研究[27]表明具有似防御素结构的SPAG11同分体参与启动精子成熟，关于DEFB126的研究[28]则可解释其在精子获能中的相关作用。总之，作为附睾上皮分泌蛋白之一的SPAG11各蛋白同分体参与精子成熟和生殖道的抗感染作用。

某抽水蓄能电站总装机4×320 MW，其最高净水头502.7 m，输水系统水平总长度2 449 m，其中中平洞衬砌后直径为9.2 m，衬砌厚60 cm，静水头约300 m。中平洞存在长约40 m的V类围岩洞段，该洞段发育有f24、f20和f80三条较大断层。断层均为全风化构造角砾岩，围岩见高岭土化，地下水多呈渗滴～线流状，最大渗水量约5 L/min～6 L/min。断层外围岩裂隙发育，裂隙走向总体与断层垂直。该洞段地质平面展布图见图1。

在附睾中SPAG11C和SPAG11T的转录是通过去势和雄激素替代实验的证明，SPAG11C和SPAG11T的转录是雄激素依赖的[19]。大鼠SPAG11基因的-779到+17的上游区域包含着可以与雄激素受体、NF-κB、核因子-1（NF-1）、EST和活化蛋白2结合的位点[6]。在脂多糖刺激时，雄激素受体和NF-κB位点是最重要的调节位点[6]。欧洲泌尿协会关于男性不育的指南指出，在患有精索静脉曲张的大龄不育患者出现血清雄激素的显著降低[29]。精索静脉高位结扎术后，可以抑制雄激素的加速降低，或也许暂时提高，对雄激素基线较低的患者，恢复明显[30]。研究表明，青春期ELV模型大鼠在手术后6～18周出现血清和睾丸内的雄激素水平降低[31-33]，在成年大鼠手术模型2周后即出现睾丸内雄激素降低，血清水平不变[34]，但手术造成了StAR mRNA的表达水平降低，干扰雄激素的合成，导致睾丸内的雄激素水平降低[35]，同时促进睾丸间质细胞的凋亡，损伤大鼠睾丸间质细胞的内分泌功能[35]，导致雄激素的分泌降低。而在手术矫正后，雄激素水平得到有效提高[36]。另外，精索静脉曲张可以导致雄激素受体的表达降低，雄激素受体的mRNA未见变化，主要与转录后修饰有关，诸如mRNA的稳定性，蛋白翻译，翻译后修饰（磷酸化，泛素/蛋白酶体系统），蛋白稳定性[37]，精索静脉曲张可以通过蛋白激酶C的一种锚定蛋白RACK1的表达增加，导致雄激素受体的磷酸化[38-40]。

本研究采用qPCR和免疫组织化学技术，明确SPAG11C和SPAG11T在附睾组织中的表达定位，说明它们在附睾组织中的表达具有细胞特异性和区段特异性，参与构成精子成熟的附睾微环境。由于实验性左侧精索静脉曲张病理模型的成功建立，在转录和翻译水平上证明患侧附睾组织中SPAG11C和SPAG11T的表达均发生变化。在ELV术后2周和4周时，左侧附睾中两蛋白的表达均较假手术组和同期右侧组呈显著性的降低，且ELV造模4周组较2周组表达下降更显著。而ELV后右侧及假手术组附睾两蛋白的表达未发生明显变化，保持正常水平。这样的结果表明，精索静脉曲张导致SPAG11C和SPAG11T表达的降低，其可能通过较早地持续地影响SPAG11蛋白的表达而改变病侧附睾微环境，继而导致男性不育或生育力降低。我们前期实验[41]也已证明精索静脉曲张时干扰患侧附睾雄激素受体表达下降，所以可以推测精索静脉曲张可能通过下调雄激素受体的表达导致SPAG11C和SPAG11T表达降低，从而影响到生殖道的抗感染能力、精子成熟和精子活动力，从而导致生育力降低，而雄激素受体和SPAG11家族蛋白的功能相关路径需要进一步研究，以证明精索静脉曲张致男性生育力降低的具体机制。

致谢：本试验研究中SPAG11C/T多克隆抗体（兔抗鼠）由美国北卡罗莱纳大学生物研究所的Susan H.Hall 副教授无私提供，特此表示衷心感谢。

参考文献

1 Damsgaard J, Joensen UN, Carlsen E,et al.Varicocele Is Associated with Impaired Semen Quality and Reproductive Hormone Levels: A Study of 7035 Healthy Young Men from Six European Countries.Eur Urol2016 70(6): 1019-1029

2 Gorelick JI, Goldstein M.Loss of fertility in men with varicocele.Fertil Steril1993; 59(3): 613-616

3 Nielsen ME, Zderic S, Freedland SJ,et al.Insight on pathogenesis of varicoceles: relationship of varicocele and body mass index.Urology2006; 68(2): 392-396

4 Zhang K, Wang Z, Wang H,et al.Hypoxia-induced apoptosis and mechanism of epididymal dysfunction in rats with left-side varicocele.Andrologia2016; 48(3):318-324

5 薛侠, 马思敏, 邱曙东, 等.实验性精索静脉曲张对青春期大鼠睾丸、附睾中CRES蛋白表达的影响.中华男科学杂志 2006; 12(11): 974-978

6 Biswas B, Yenugu S.Transcriptional regulation of the rat sperm-associated antigen 11e (Spag 11e) gene during endotoxin challenge.Mol Genet Genomics2014; 289(5):837-845

7 Wang YJ, Zhang RQ, Lin YJ,et al.Relationship between varicocele and sperm DNA damage and the effect of varicocele repair: a meta-analysis.Reprod Biomed Online2012; 25(3): 307-314

8 Ozturk U, Kefeli M, Asci R,et al.The effects of experimental left varicocele on the epididymis.Syst Biol Reprod Med2008; 54(4-5): 177-184

9 Lehtihet M, Arver S, Kalin B,et al.Left-sided grade 3 varicocele may affect the biological function of the epididymis.Scand J Urol2014; 48(3): 284-289

10 Zhang QY, Qiu SD, Ma XN,et al.Effect of experimental varicocele on structure and function of epididymis in adolescent rats.Asian J Androl2003; 5(2): 108-112

11 Agarwal A, Hamada A, Esteves SC.Insight into oxidative stress in varicocele-associated male infertility: part 1.Nat Rev Urol2012; 9(12): 678-690

12 Zhang QY, Qiu SD, Ma XN,et al.Effect of experimental varicocele on structure and function of epididymis in adolescent rats.Asian J Androl2003; 5(2): 108-112

13 Li P, Chan HC, He B,et al.An antimicrobial peptide gene found in the male reproductive system of rats.Science 2001; 291(5509): 1783-1785

14 Yenugu S, Hamil KG, French FS,et al.Antimicrobial actions of human and macaque sperm associated antigen(SPAG) 11 isoforms: influence of the N-terminal peptide.Mol Cell Biochem2006; 284(1-2): 25-37

15 Hamil KG, Sivashanmugam P, Richardson RT, et al.HE2beta and HE2gamma, new members of an epididymis-specific family of androgen-regulated proteins in the human.Endocrinology2000; 141(3): 1245-1253

16 Fröhlich O, Ibrahim NM, Young LG.EP2 splicing variants in rhesus monkey (Macaca mulatta) epididymis.Biol Reprod2003; 69(1): 294-300

17 Fröhlich O, Po C, Murphy T,et al.Multiple promoter and splicing mRNA variants of the epididymis-specific gene EP2.J Androl2000; 21(3): 421-430

18 Avellar MC, Honda L, Hamil KG,et al.Differential expression and antibacterial activity of epididymis protein 2 isoforms in the male reproductive tract of human and rhesus monkey (Macaca mulatta).Biol Reprod2004;71(5): 1453-1460

19 Yenugu S, Hamil KG, Grossman G,et al.Identification,cloning and functional characterization of novel sperm associated antigen 11 (SPAG11) isoforms in the rat.Reprod Biol Endocrinol2006; 4:23

20 Yenugu S, Hamil KG, Birse CE,et al.Antibacterial properties of the sperm-binding proteins and peptides of human epididymis 2 (HE2) family; salt sensitivity,structural dependence and their interaction with outer and cytoplasmic membranes of Escherichia coli.Biochem J2003; 372(Pt 2): 473-483

21 Yenugu S, Hamil KG, French FS,et al.Antimicrobial actions of the human epididymis 2 (HE2) protein isoforms, HE2alpha, HE2beta1 and HE2beta2.Reprod Biol Endocrinol2004; 2:61

22 von Horsten HH, Schafer B, Kirchhoff C.SPAG11/isoform HE2C, an atypical anionic beta-defensin-like peptide.Peptides2004; 25(8): 1223-1233

23 von Horsten HH, Derr P, Kirchhoff C.Novel antimicrobial peptide of human epididymal duct origin.Biol Reprod2002; 67(3): 804-813

24 Biswas B, Yenugu S.Antimicrobial responses in the male reproductive tract of lipopolysaccharide challenged rats.Am J Reprod Immunol2011; 65(6): 557-568

25 Biswas B, Yenugu S.Lipopolysaccharide induces epididymal and testicular antimicrobial gene expression in vitro: insights into the epigenetic regulation of spermassociated antigen 11e gene.Immunogenetics2013;65(4): 239-253

26 Liu X, Ju Z, Wang L,et al.Six novel single-nucleotide polymorphisms in SPAG11 gene and their association with sperm quality traits in Chinese Holstein bulls.Anim Reprod Sci2011; 129(1-2): 14-21

27 Zhou CX, Zhang YL, Xiao L,et al.An epididymisspecific beta-defensin is important for the initiation of sperm maturation.Nat Cell Biol2004; 6(5): 458-464

28 Yudin AI, Tollner TL, Li MW,et al.ESP13.2, a member of the beta-defensin family, is a macaque sperm surfacecoating protein involved in the capacitation process.Biol Reprod2003; 69(4): 1118-1128

29 Dohle GR, Colpi GM, Hargreave TB,et al.EAU guidelines on male infertility.Eur Urol2005; 48(5): 703-711

30 Hsiao W, Rosoff JS, Pale JR,et al.Varicocelectomy is associated with increases in serum testosterone independent of clinical grade.Urology2013; 81(6): 1213-1217

31 刘建军,董强,杨宇如.实验性精索静脉曲张大鼠血清及睾内睾酮的变化.中华男科学杂志 2007;13(4):335-337

32 Zheng Y, Zhang X, Zhou J,et al.Effects on the ipsilateral testis during progression of experimental varicocele in rat.Med Sci Monit2008; 14(6): BR122-BR126

33 Zheng YQ, Zhang XB, Zhou JQ,et al.The effects of artery-ligating and artery-preserving varicocelectomy on the ipsilateral testes in rats.Urology2008; 72(5): 1179-1184

34 Rajfer J, Turner TT, Rivera F,et al.Inhibition of testicular testosterone biosynthesis following experimental varicocele in rats.Biol Reprod1987; 36(4): 933-937

35 Luo DY, Yang G, Liu JJ,et al.Effects of varicocele on testosterone, apoptosis and expression of StAR mRNA in rat Leydig cells.Asian J Androl2011; 13(2): 287-291

36 Tanrikut C, Goldstein M, Rosoff JS,et al.Varicocele as a risk factor for androgen deficiency and effect of repair.BJU Int2011; 108(9): 1480-1484

37 Soares TS, Fernandes SA, Lima ML,et al.Experimental varicocoele in rats affects mechanisms that control expression and function of the androgen receptor.Andrology2013; 1(5): 670-681

38 Jaworski T.Degradation and beyond: control of androgen receptor activity by the proteasome system.Cell Mol Biol Lett2006; 11(1): 109-131

39 Anbalagan M, Huderson B, Murphy L,et al.Posttranslational modifications of nuclear receptors and human disease.Nucl Recept Signal 2012; 10:e001

40 Lee JH, Lee MJ.Emerging roles of the ubiquitinproteasome system in the steroid receptor signaling.Arch Pharm Res2012; 35(3): 397-407

41 杨洁, 张秋养, 葛玲, 等.青春期大鼠实验性精索静脉曲张对附睾雄激素受体的影响.西安交通大学学报•医学版 2005; 26(1): 22-25