肿瘤转移抑制基因TIP3在膀胱尿路上皮癌组织中的表达及临床意义

应亚君 韩子华 柯 莽

1.浙江省台州市肿瘤医院病理科，浙江临海 317500；2.浙江省台州恩泽医疗中心（集团）恩泽医院泌尿科，浙江台州 318050

肿瘤的侵袭和转移是衡量其恶性程度的主要因素，是引起患者死亡的主要原因之一，其受多基因与多因素的影响与调控，尤其与多种肿瘤抑制基因的表达失调密切相关[1,2]。TIP30是一种近年来新发现的肿瘤转移抑制基因，位于人类第11号染色体短臂端11P15.1上，其主要作用是抑制肿瘤的转移和生长，在多种肿瘤细胞中表达降失或表达相对较弱，但国内有关TIP30在膀胱癌中的表达报道较少[3-7]。本文旨在探讨肿瘤转移抑制基因TIP3在膀胱尿路上皮癌组织中的表达及临床意义，探讨其在膀胱尿路上皮癌发生发展中的作用。现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2011年1月～2017年6月我院病理科存档的膀胱尿路上皮癌蜡块共50例。纳入病例均有完整临床资料，且经术后病理证实。其中男38例，女12例；年龄 37～84 岁，平均（67.4±5.9）岁；浸润性 16 例，非浸润性34例；初发32例；复发18例。另选取膀胱尿路上皮癌的癌旁组织（距肿瘤缘3～5 cm）30例作为对照组，其中男23例，女7例；年龄38～80岁，平均（66.7±5.4）岁。两组性别、年龄比较差异无统计学意义（P>0.05）。

1.2 免疫组化检测

采用En Vision二步法免疫组化检测，将石蜡包埋的标本连续4 μm切片，5%羊血清37℃封闭2 h减少非特异性背景，采用柠檬酸盐缓冲液高温高压抗原修复，滴加TIP30单克隆一抗工作液4℃孵育过夜，PBS冲洗后加入二抗En Vision试剂室温下孵育1 h，PBS冲洗，滴加新鲜配置DAB显色，Mayer苏木素复染细胞核衬染，水洗、烤干、中性树封片和镜检。试剂公司提供的阳性切片作阳性对照，以PBS代替一抗作阴性对照。TIP30单克隆抗体、En Vision二步法免疫组化试剂盒（通用型）购买自北京中杉生物公司。

1.3 观察指标

观察膀胱尿路上皮癌与癌旁组织中TIP30表达的差异，并分析膀胱尿路上皮癌组织中TIP30表达与病理特征关系。

1.3.1 免疫组化结果判断 以胞膜或胞质出现棕黄色颗粒为TIP30阳性细胞，阴性对照组除细胞核染成蓝色外应无棕黄色反应物。按照高倍镜视野下细胞染色强度与阳性细胞比例综合评分，其中阳性细胞根据染色强度：无色、浅黄色、棕黄色和棕褐色分别为0、1、2和3分；显色细胞比例：阴性、比例≤10%、比例11%～30%、比例31%～60%和比例≥61%分别为0、1、2和3分。上述两项分值的乘积≥2分判定TIP30表达（+），否则 TIP30 表达（-）[8]。

1.3.2 TIP30表达与病理特征关系 包括性别、年龄、肿瘤是否复发、浸润深度和病理分级等。

1.4 统计学方法

应用SPSS 17.0软件包，计数资料以[n（%）]表示，采用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 膀胱尿路上皮癌及癌旁组织中TIP30基因表达比较

50例膀胱尿路上皮癌中TIP30表达阳性17例（34.00%），大部分为浅黄色颗粒，少部分为棕黄色颗粒。30例癌旁组织TIP30表达阳性28例（93.33%），大部分为棕褐色和棕黄色颗粒，少部分为浅黄色颗粒。膀胱尿路上皮癌标本中TIP30的阳性率低于癌旁组织（χ2=26.82，P<0.01）。

2.2 膀胱尿路上皮癌中TIP30基因表达与病理特征关系

膀胱尿路上皮癌组织中TIP30基因表达与性别、年龄与肿瘤是否复发等病理特征无关（P>0.05），与浸润深度和病理分级等密切相关（P<0.05）。见表1。

表1 膀胱尿路上皮癌组织中TIP30基因表达与病理特征关系

3 讨论

TIP30基因是2007年由国外学者首先报道的一种与肿瘤转移抑制相关的基因，其蛋白编码产物是一种分子量为30 kDa的TIP30蛋白[8-10]。大量的报道显示，TIP30基因主要通过促进细胞凋亡和抑制血管新生来抑制肿瘤细胞转移，一方面，TIP30基因是一种转录辅助因子，具有丝/苏氨酸激酶活性，可以和 RNA聚合酶Ⅱ最大亚基结合并磷酸化其C末端的七肽重复基序，在特定生理病理环境下调节细胞凋亡和血管生成相关基因的表达，从而促进细胞凋亡和抑制肿瘤转移[11-14]；另一方面，TIP30基因能够以 RanG TP非依赖形式直接与Import in β家族成员及核孔蛋白相结合，抑制核转运蛋白的功能，通过抑制核物质输入促进细胞凋亡来发挥抑癌作用[15-17]。TIP30基因在胃癌、肠癌、黑色素瘤、成神经细胞瘤、恶性胶质细胞瘤、乳腺癌等癌中的表达较弱或无明显表达，明显低于正常的人体组织中的表达，提示TIP30基因参与了大多数肿瘤的发生、发展、浸润及转移的过程[18]。

膀胱癌是我国尿路系统常见的恶性肿瘤，其中90%以上为膀胱尿路上皮癌，其发生、发展是一个多基因、多步骤的过程，近年来TIP30基因在膀胱癌中的表达及作用越来越受到临床的重视。李文华等[19]研究发现膀胱移行细胞癌组织中TIP30基因表达明显下降，且与发生、发展、转移和浸润等密切相关。陕光等[20]研究发现抑癌基因TIP30基因在膀胱尿路上皮癌中呈低表达，而在癌旁组织中呈高表达，与其肿瘤浸润深度、分化程度和临床分期密切相关。我们通过采用免疫组织化学的方法检测了膀胱尿路上皮癌及癌旁组织中TIP30表达的差异，研究发现膀胱尿路上皮癌标本中TIP30的阳性率明显低于癌旁组织。提示膀胱尿路上皮癌中TIP30基因表达存在明显下调趋势，其表达下调或失表达极有可能促进膀胱尿路上皮癌的发生和发展。同时研究发现膀胱尿路上皮癌组织中TIP30基因表达与浸润深度和病理分级等病理特征明显相关。提示膀胱尿路上皮癌中TIP30基因的表达与其恶性程度与浸润深度呈负相关，可能参与其病情的转移和浸润的过程。临床上需进一步研究TIP30基因与膀胱尿路上皮癌其它生物学指标的关系及其相互作用机制，有助于了解膀胱尿路上皮癌发病的分子生物学机制，进而指导临床治疗，以期为膀胱癌的基因靶向治疗提供理论依据[21]。

总之，膀胱尿路上皮癌中TIP30基因的表达存在明显下调趋势，其表达下调或失表达极有可能促进膀胱尿路上皮癌的发生和发展，并与其恶性程度与浸润深度呈负相关，参与其病情的转移和浸润的过程，有望成为膀胱尿路上皮癌基因诊断及靶向治疗的新靶点。但本研究的样本量偏少，且未对TIP30基因的RNA进行检测，实验内容可能存在一定的偏差。

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