正交实验法优选赶黄草乙醇提取工艺

黄福荣 陈珍 马春霓

[摘 要]目的：通过正交实验设计，对赶黄草乙醇提取工艺进行研究，以获得最佳提取条件。方法采用正交设计试验，以总黄酮提取率为指标，优化乙醇提取工艺。结果：其最佳组合为A1B2C3，即最佳提取条件为60%乙醇于70℃水浴提取3h，所得黄酮类物质的浸出率最高。结论：经过试验研究获得乙醇最佳提取条件，为生产赶黄草制剂提供了一定的实验依据。

[关键词]赶黄草；总黄酮；芦丁

[中图分类号]TQ611 [文献标识码]A

赶黄草（Penthorum chinense Pursh），在民间又名水泽兰、水杨柳等，学名扯根菜，是虎耳草科（Saxifragaceae）扯根菜属（Penthorum Gronvexl）植物扯根菜的干燥地上部分。赶黄草为苗族传统药物，民间以其全草入药。其全草性温、味甘、无毒，具清热、利尿消尿、解毒、活血、平肝、健脾、祛黄疸等功效。主治黄疸、水肿、经闭、血崩、带下、跌打损伤，以及各型肝炎、胆囊炎、脂肪肝等。近年来，对赶黄草的化学成分进行了较深入的研究。例如：冯浩等用蒸馏水加热回流提取赶黄草后上大孔吸附树脂柱，用蒸馏水洗至无糖，然后用80%乙醇洗脱，醇洗部分通过减压硅胶柱色谱，以氯仿、氯仿甲醇洗脱，得乔松素7OβD葡萄糖苷、2，4，6三羟基苯甲酸和槲皮素。汪洪武等采用超声浸提和水浴浸提两种方法从赶黄草叶中提取黄酮类化合物，并对不同部位的黄酮含量进行了比较，其中根中黄酮含量为35%、茎中为37%、叶中为41%，由此可见赶黄草叶中黄酮类物质含量最高。

1 仪器、试剂及材料

岛津紫外分光光度计UV – 2401；SE602FZH电子天平（奥豪斯仪器有限公司）；DZKW-3型电子恒温水浴锅。 芦丁（北京化学试剂公司 ，生化试剂），其他试剂均为分析纯。 赶黄草采自四川泸州地区，经云南省中医学院鉴定，干燥后粉碎为粗粉备用。

2 黄酮含量测定及计算

2.1 芦丁标准液配制

精确称量芦丁（120℃干燥至恒重）18.8 mg ，于 100 mL 烧杯中，以 60% EtOH 溶解，定容于 100mL 量瓶中，浓度为 0.188 g·L-1 。

2.2 标准曲线的测定

精密称取芦丁15.0mg，加甲醇溶解并定容至100ml，配制成15 0μg/ml 的芦丁標准溶液，作为对照品溶液。分别精密吸取芦丁标准液0.00、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00ml 相当于含芦丁0、150、300、450、600、750μg，置于12.5ml比色管中，加30%的乙醇补至5ml，各加入5% 亚硝酸钠溶液0.30ml，摇匀后放置5min，加入10%硝酸铝溶液0.3ml摇匀后放置6min，加1.0mol/LNaOH 溶液2.00ml，用30% 乙醇定容至刻度，摇匀，放置15min，以零管为空白。摇匀后用1cm 的比色杯，在510nm 处波长处测定吸光度，测3 次取平均值。 测得结果如下：当浓度为0.009 4，0.018 8，0.037 6，0.056 4，0.075 2 g·L -1 时，吸光度 A 分别为 0.122 2，0.239 4，0.480 2，0.690 7，0.961 9。 以吸光度 A为纵坐标，浓度 c 为横坐标，绘制标准吸收曲线。用最小二乘法经线性回归，得芦丁浓度（c）与吸光度（A）的关系曲线的回归方程式：A =12.611 c+0.000 8，r=0.999 5。

3 实验步骤

通过预实验， 按正交表9 （3 4 ）安排三因素三水平正交实验：乙醇浓度（A，60%，70%，80%，依次为水平 1，2，3，下同）、温度（B，40，60，80℃）、浸渍时间（C，1，2，3 h）进行试验； 取浸提液 0.1 mL 于 10mL 量瓶中，按“2”项测定吸光度并计算黄酮含量。

4 结果与讨论

根据正交实验与数据处理可知，水浴法测定的总黄酮浓度总为：1 554.7μg·mL -1 。

方差A：3220.4，B：8969.3，C：2969.0，D：1508.7，E：40794.1，F ：10281.7。 显著性检测发现，F 值为，A：1.05，B：3.02，C：1；D：1，E：27.04，F ：6.81。水浴法：水浴温度是显著性因素，从数据的直观分析和方差分析以及显著性检验可知，三种因素对提取结果影响大小依次为 B>A >C，其最佳组合为 A 1 B 2 C 3 ，即最佳提取条件为 60%乙醇于70℃水浴提取 3 h，所得黄酮类物质的浸出率最高。

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