强力枇杷露中齐墩果酸和熊果酸含量测定研究

袁海英　叶利明

摘要：建立强力枇杷露中齐墩果酸和熊果酸含量测定方法。采用HPLC法，色谱柱为sepax Aumthyst C18-H（4.6mm×250mm，5μm）；流动相为乙腈一甲醇-0.5%乙酸铵溶液（体积比67：12：21）；流量为1.0mL/min；柱温为30℃；检测波长为210nm。齐墩果酸的进样量在0.05～1.59μg呈良好的线性关系（r=-1.0000），精密度RSD=1.23%，平均加样回收率为93.7%，RSD=1.40%；熊果酸的进样量在0.19～6.20μg呈良好的线性关系（r=1.0000），精密度RSD=0.20%，平均加样回收率为98.6%，RSD=1.96%。该方法简便、准确、重复性好，可用于强力枇杷露中齐墩果酸和熊果酸的含量测定。

关键词：强力枇杷露；齐墩果酸；熊果酸；高效液相色谱法

文献标志码：A 文章编号：1674-5124（2018）05-0063-04

0引言

强力枇杷露具有养阴敛肺，镇咳祛痰的功效。临床用于久咳劳嗽，支气管炎等。其质量标准收载于《卫生部药品标准中药成方制剂第二册》第272页，该处方由枇杷叶、罂粟壳、百部、白前、桑白皮、桔梗、薄荷脑组成。标准中仅有两项颜色反应鉴别项，既无薄层鉴别也无含量测定项。目前已有较多文献对强力枇杷露中罂粟壳的有效成分含量测定进行了研究，但对于处方中的君药枇杷叶中的有效成分含量测定研究几乎没有；故本实验采用HPLC法测定了强力枇杷露中齐墩果酸和熊果酸的含量，结果表明本方法结果准确、可靠、重复性好，可用于强力枇杷露中齐墩果酸和熊果酸的含量控制。

1实验部分

1.1仪器与试药

Agilent 1260型高效液相色谱仪（美国Agilent）；电子天平（梅特勒，XA205）；电子天平（YP402N）；UPT-1-40L优普超纯水器。乙腈、甲醇为色谱纯；其余试剂为分析纯；水为超纯水。齐墩果酸对照品，中国食品药品检定研究院，批号：110709-201206，纯度94.9%：熊果酸对照品，中国食品药品检定研究院，批号：110742-201421，纯度93.8%。强力枇杷露，由华润三九（雅安）药业有限公司生产，批号分别为160825、160850、160852、160854、160901、160904、160905、160906、160913、160915。

1.2实验方法与结果

1.2.1色谱条件与系统适应性试验

采用Sepax Aurethyst C18-H色谱柱（4.6 BBX250mm，5 μm），流动相为乙腈-甲醇-0.5%7，酸铵溶液（体积比67：12：21），流量1.0mL/min，检测波长210nm，柱温30℃，进样量20μL，取对照品、阴性样品和供试品溶液分别进样，齐墩果酸和熊果酸的保留时间分别为20.5min和21.6min，主峰与杂质峰的分离良好，无阴性干扰，拖尾因子分别为1.01和1.14，分离度分别为16.7和1.9，理论板数以熊果酸峰计算大于5000（见图1）。

1.2.2溶液的制备

精密称取齐墩果酸对照品13.17 mg于10 mL容量瓶中，加乙醇定容制成对照储备液。另精密称取熊果酸对照品10.65 mg于50mL容量瓶中，再精密吸取齐墩果酸对照储备液2 mL置该量瓶中，加乙醇溶解并定容，摇匀得齐墩果酸质量浓度为49.99 μg/mL、熊果酸质量浓度为199.8 μg/mL的混合对照溶液。精密量取强力枇杷露样品25mL，用正丁醇一甲醇（体积比10：1，水饱和）混合溶液振摇提取4次（25，25，25，20mL），合并正丁醇一甲醇（10：1，水饱和）溶液，用正丁醇饱和的水20mL洗涤，弃去水液，分取正丁醇液，水浴蒸干，残渣加甲醇使溶解并转移至5 mL容量瓶中，用甲醇稀释至亥0度，摇匀，过滤，取续滤液，即得供试品溶液。取处方比例的各药材，按工艺制备方法制备缺枇杷叶的阴性样品，照供试品处理方法制备阴性样品溶液。

1.2.3线性关系考察

配制齐墩果酸为79.344，39.672，19.826，9.918，4.959，2.480 I～g/mL，熊果酸为310.016，155.008，77.504，38.752，19.376，9.688μg/mL的齐墩果酸和熊果酸混合对照品溶液，分别精密吸取上述不同浓度的混合对照品溶液各20μL注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定其峰面积，并以峰面积为纵坐标y，进样量为横坐标x（μg），进行线性回归。齐墩果酸的回归方程为：y=485.4903x-1.0791，r=1.0000，结果表明齐墩果酸在0.05-1.59μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。熊果酸的回归方程为：7=437.8244x+2.115 1，r=1.0000，结果表明熊果酸在0.19-6.20μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。结果如图2所示。

1.2.4仪器精密度试验

精密吸取上述对照品溶液10μL，连续进样6次，测得齐墩果酸峰面积RSD=1.23%（n=6），熊果酸峰面积RSD=0.20%（n=6），结果见表1。表明仪器的精密度良好。

1.2.5重复性试验

取同一批号的强力枇杷露样品，按1.2.2项方法平行制备6份供试品溶液，分别进样，计算得齐墩果酸平均含量为1.95 μg/mL，RSD=1.56%（n=6），熊果酸平均含量为9.82μg/mL，RSD=0.49%（n=6），结果见表2。表明本方法的重复性良好。

1.2.6稳定性试验

取同一供试品溶液，分别于室温下放置0，2，4，8，12，24h后进样10μL，计算得24h内齐墩果酸峰面积RSD=0.47%，熊果酸峰面积RSD=0.40%，结果见表3。表明齐墩果酸和熊果酸在24h内稳定。

1.2.7加样回收率试验

精密量取25 mL已知含量的强力枇杷露样品共9份，分别精密加入低、中、高浓度的对照品溶液，混匀后按1.2.2项下方法制备供试品溶液，并按1.2.1项下方法进样，记录峰面积，计算得齐墩果酸和熊果酸的平均回收率分别为93.7%（RSD=1.40%）、98.6%（RSD=1.96%），结果见表4。表明本方法回收率良好。

1.2.8样品测定

取10个批号的强力枇杷露样品，按1.2.2项方法制备供试品溶液，并按1.2.1项色谱条件进样，每批样品采用双样双针测定，以外标法计算10批样品中齐墩果酸和熊果酸的含量，结果见表5。10批强力枇杷露中齐墩果酸和熊果酸的总含量在7.3～12.0μg/mL之间，批间精密度RSD约16%，表明成品含量批间波动较大。

2结束语

在筛选色谱柱时曾对不同厂家的c18柱进行了考察，最终选择了1.2.1项下的色谱柱，该色谱柱能使样品中齐墩果酸和熊果酸的对称因子和分离度较好。此外在供試品萃取时曾考虑使用水饱和的正丁醇进行萃取，但乳化现象较严重，故在正丁醇中加入一定量的甲醇并用水饱和后，萃取时乳化现象可得到明显改善。

现代药物化学研究表明：枇杷叶中的主要有效成分即为三萜酸类化合物，其中主要是乌索酸（uA，即熊果酸）、齐墩果酸（OA）和委陵菜酸（TA）等母体的衍生物，具有抗炎止咳、降血糖、抗病毒、抗氧化、抗肿瘤等药理作用。通过10批样品的含量测定结果表明：强力枇杷露中齐墩果酸和熊果酸的总含量在10μg/mL左右，而枇杷叶原料中齐墩果酸和熊果酸的总量约为7～12mg/g，其转移率仅2%左右，提示需对强力枇杷露的提取工艺进行优化以提高齐墩果酸和熊果酸的转移率，另外也表明了枇杷叶中可能还有其他水溶性成分具有抗炎止咳的功效。

（编辑：莫婕）