丙型肝炎病毒RNA检测质量控制因素分析

张文茂

[摘要] 目的 对丙型肝炎病毒RNA检测的质量控制因素进行分析，以保证丙型肝炎病毒RNA检测结果的准确性，防止漏检、误检，为丙型肝炎的防控提供准确的检测依据。 方法 选取2018年1—4月共50例丙型肝炎患者的血液标本，分别根据血清标本存放时间、检测人员综合能力、丙型肝炎病毒RNA检测所用耗材是否经过高压灭菌分为对照组与观察组，总结和分析保证丙型肝炎病毒RNA检测结果准确的因素。 结果 检测人员综合能力，丙型肝炎检测所用耗材是否经高压灭菌两个因素的对照组与观察组相比较在检出率上，差异有统计学意义（χ2=9.543，6.250，P<0.05）；第一个血清标本存放时间因素，对照组和观赛组检出率差异无统计学意义（χ2=0.102，P>0.05）。 结论 为了保证丙型肝炎RNA检测的准确结果，检测人员及检测所用耗材需要严格选择。-20℃保存标本在1周时间内，血清HCV-RNA检测结果影响不大。

[关键词] 丙型肝炎；RNA检测；质量控制

[中图分类号] R446.5 [文献标识码] A [文章编号] 1672-5654（2018）10（a）-0174-03

Analysis of Quality Control Factors of Hepatitis C Virus RNA Test

ZHANG Wen-mao

Department of Hereditary Eugenics， Yueyang Maternal and Infant Healthcare Hospital， Yueyang， Hunan Province， 414000 China

[Abstract] Objective To analyze the quality control factors of hepatitis C virus RNA test to ensure the accuracy of test results and prevent the missed diagnosis and misdiagnosis thus providing accurate test basis for the prevention and control of hepatitis C virus. Methods The blood specimens of 50 cases of patients with hepatitis C virus from January 2018 to April 2018 were selected， and divided into two groups according to the serum specimens storage time， comprehensive ability of test staff， and whether the consumables used by the hepatitis C virus RNA test underwent the autoclaving or not， and the factors of ensuring the accuracy of hepatitis C virus RNA test results were summarize and analyzed. Results The differences in the comprehensive ability of test staff， and whether the consumables used by the hepatitis C virus RNA test underwent the autoclaving or not between the two groups the differences were statistically significant（χ2=9.543， 6.250，P<0.05），and the difference in the serum specimens storage time between the two groups was not statistically significant（χ2=0.102，P>0.05）. Conclusion In order to ensure the accuracy results of hepatitis C virus RNA test， the test staff should strictly select the consumables， and the effect of serum HCV-RNA test results is not big when the specimen is stored within 1 week under -20℃.

[Key words] Hepatitis C； RNA test； Quality control

丙型肝炎病毒（hepatitis c virus， HCV）屬黄病毒科，HCV呈球形颗粒，核心含有单链正股RNA，长约9500个核苷酸。目前发现的全球HCV感染率约为3%，感染HCV的患者逐年上升，每年新发病例在300万例左右[1-3]。HCV-RNA的检测是判断HCV感染的直接证据，提高HCV-RNA检测的准确性，对丙型肝炎的及时诊断与治疗十分重要[4]。RNA比DNA稳定性差，检测易出现假阴性。国内针对丙肝RNA检测质量控制的文章极少，因此，该文选取2018年1—4月50例患者就HCV-RNA检测细节入手，首次针对血清标本存放时间、检测人员综合能力、丙肝RNA检测所用耗材是否经高压灭菌这3个容易被忽视的因素进行了分析以提高丙肝RNA检测的准确性。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取共50例丙型肝炎患者的血液标本，根据标本存放时间、检测人员综合能力、丙型肝炎病毒检测所用耗材是否高压灭菌分为对照组与观察组分别进行检测，对照组与观察组所用设备同一型号，实验操作参照标准流程一致。

1.2 方法

分别对分组后的血液样本进行HCV-RNA检测，如下实验。

1.2.1 血清标本存放时间影响 观察组：抽取丙肝患者血液3 mL，于含有惰性分离胶的黄色促凝管内，室温1 600rpm离心5 min分离出血清，取200 μL标本立即进行标本提取。

对照组：血液标本按上述方法离心后，取200 μL血清-20℃放置7 d后进行标本提取。由同一名经过专业培训的检测人员按照HCV-RNA检测的标准操作规范进行操作，HCV-RNA检测所用设备与观察组都是同一型号，实验所用耗材均经过高压灭菌，实验室安全等级均为二级生物安全。

1.2.2 检测人员综合能力影响 观察组：负责HCV-RNA检测的操作人员必须具备2年以上关于病源微生物及病毒检测的工作经验，接受过正规的省级PCR技术人员上岗培训，并获得培训证书。工作中每隔一定的时间进行与工作相关的微生物检测知识的培训与学习，同时具有较好的综合能力，特别是心理素质必须良好，严格遵守实验室标准操作程序和制度进行。

对照组：负责HCV-RNA检测的技术人员为一般的检验人员，未经过专业的PCR技术人员上岗培训，操作过程严格按照HCV-RNA检测的标准操作程序进行。比较二者对于HCV 阳性的复检率。HCV-RNA检测所用设备与观察组均为同一型号，实验所用耗材均经过高压灭菌，实验室安全等级均为二级生物安全，保证对HCV-RNA检测的样品预处理相同。

1.2.3 丙型肝炎病毒RNA检测所用耗材是否高压灭菌 观察组：丙型肝炎病毒RNA检测所用耗材（1.5 mL离心管，0.2 mL PCR反应管，10 μL、200 μL、1000 μL Tip头）均经过高压灭菌（121℃，30 min）。

对照组：丙型肝炎病毒RNA检测所用耗材未经高压灭菌，HCV-RNA检测所用设备与观察组均为同一型号，实验室安全等级均为二级生物安全，保证对HCV-RNA检测的样品预处理相同，由同一名获得PCR技术人员上岗证的专业检验人员进行操作。

1.3 统计方法

分析采用SPSS 20.0统计学软件处理数据，计数资料用（%）表示，进行χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

对观察组和对照组进行HCV-RNA检测进行实验：检测人员综合能力、丙型肝炎病毒检测所用耗材是否高压灭菌这两个因素的对照组与观察组相比较，差异有统计学意义（P<0.05），血清存放时间的对照组与观察组比较，差异无统计学意义（P>0.05），见表1。

3 讨论

血中HCV含量仅为HBV的千分之一，荧光定量PCR技术可以在极低的病毒载量检测到HCV-RNA的存在，是临床诊断的有力工具，对HCV-RNA检测进行质量控制是保证结果准确的关键[5-6]。该研究主要针对HCV-RNA检测中的3个方面，即血清标本存放时间影响、检测人员综合能力影响、丙型肝炎病毒检测所用耗材是否高压灭菌。实验结果显示“血清存放时间”的对照组检出率为88%， 与观察组相比，差异无统计学意义（χ2=0.102，P>0.05），说明血清-20℃保存一周对检测结果影响不大，所以丙肝RNA检测所用血清如果暂时不检测需立马放到-20℃冰箱进行保存，尽量在一周之内进行检测。检测人员综合能力对照组检出率为64%，与观察组相比，差异有统计学意义（χ2=9.543，P<0.05），说明检测人员综合能力影响检出率，检测人员必须要经过严格培训并具有良好心理素质。检测所用耗材是否经高压灭菌对照组检出率为70%，与观察组相比， 差异有统计学意义（χ2=6.250，P<0.05），说明所用耗材是否进行高压灭菌影响检出率，所以RNA检测所用耗材必须要经过高压灭菌。HCV-RNA荧光定量检测不仅需要保证PCR实验室安全卫生等级、实验仪器的校准及试剂盒的筛选，与此同时也需要保证检测人员队伍极高的综合能力和耗材必须高压灭菌，才能够保证HCV-RNA检测质量，从而减少检测的误差率，提高HCV-RNA诊断率。

[参考文献]

[1] 黄琳，彭杰，何锦文.化学发光检测方法学在丙型肝炎病毒的临床诊断价值[J].中国卫生产业，2013（21）：1-2.

[2] 饒慧瑛.中国慢性丙型肝炎患者无需苦等DAA[J].肝博士，2016（1）：23-25.

[3] 王杰，鲁凤民，庄辉.我国2002-2011年病毒性肝炎的流行趋势[J].中华肝脏病杂志，2013，21（8）：561-564.

[4] 宋丽.HCV-RNA检测的质量控制分析[J].国际检验医学杂志，2014（17）：2420-2421.

[5] 张正.PCR方法的临床应用及测定结果的临床意义[J].中华微生物学和免疫学杂志，2001（s1）.

[6] 尹秀华.丙型肝炎检测方法的研究进展[J].医学理论与实践，2013，6（2）：171-173.

（收稿日期：2018-00-00）