大鼠脑梗死范围与神经功能损伤程度的相关性

王金成 姜立刚 李海平 王军民

(吉林医药学院附属医院神经内科，吉林 吉林 132013)

脑梗死患者均存在不同程度的神经功能缺损，但神经功能缺损的影响因素目前尚未完全阐明〔1〕。线栓法建立大鼠脑中动脉闭塞模型为模拟人类脑梗死研究提供了新方向。研究表明脑梗死的范围及部位可能是影响神经功能缺损程度的因素，但并未得到证实〔2〕。本文就线栓法建立脑梗死大鼠模型，对脑梗死范围与神经功能损伤程度的相关性进行分析。

1 材料与方法

1.1材料及仪器 选择100只清洁级SD雄性大鼠由吉林大学动物实验中心提供，适应性喂养1 w，温度24℃左右，湿度70%左右。实验材料包括1.2号单尼龙鱼线，氯化三苯基四氮唑(TTC)；科奥达光电技术有限公司产外科手术显微镜、阔海医疗公司产切片机。

1.2试验方法

1.2.1模型制备 大鼠实验前12 h禁食，腹腔注射10%水合氯醛麻醉，仰卧位固定，颈正中位切开皮肤，分离皮下组织，暴露颈前肌群，沿肌肉行走分离，显微镜下暴露并分离右侧颈总动脉，仔细分离迷走神经及周围血管，在分离时避免过度牵拉损伤神经，沿颈总动脉将颈内、外动脉分离，分别结扎，沿颈内动脉向颅底方向继续分离，达到鼓泡膨大处可见翼额动脉，在距离颈动脉交叉点5 mm处结扎，剪断颈外动脉并将单尼龙鱼线插入，在断端结扎。夹闭翼额动脉，将尼龙线退出并向颈内动脉方向插入，插入深度20 mm左右，有阻力感后停止插入，松开动脉夹，剪去尼龙线尾端并缝合。术后大鼠保持侧卧位，维持肛温37℃左右，保持呼吸通畅。

1.2.2神经功能缺损评价及脑组织切片制作 神经功能缺损评分标准，0分：无神经功能缺损表现，大鼠活动正常；1分：大鼠前肢不能完全伸展；2分：大鼠活动时向左侧追尾转圈；3分：爬行时明显向左倾斜身体；4分：不能自主爬行。分别在术后6、12、24、48 h测定大鼠神经功能缺损评分，并在测定评分后断头处死，取脑组织置于玻璃器皿中，-20℃速冻20 min，切片机切片，共5片，每片间隔2 mm。

1.2.3梗死范围测定 将脑组织切片置于2% TTC溶液，锡纸覆盖后置入恒温水浴箱，保持37℃避光放置30 min，过程中轻微翻动脑片，确保脑片各部位均能接触到染色液，采用Image-pro 5.2图像分析软件测量梗死范围。

1.3统计学方法 应用SPSS20.0软件，计量资料采用方差分析，相关性采用偏相关分析。

2 结 果

2.1神经功能缺损评分及脑梗死范围比较 见表1。术后6、12、24、48 h组神经功能缺损评分差异有统计学意义(P<0.05)，随着缺血时间延长神经功能缺损程度逐渐增加，在术后12 h时达到高峰，之后逐渐减轻。随缺血时间延长梗死范围逐渐增大，术后48 h时大鼠的梗死范围最大，各组间差异有统计学意义(P<0.05)。

表1 大鼠神经功能缺损评分及脑梗死范围比较

2.2病理染色 大鼠梗死部位多位于基底节区的尾状核、苍白球，皮质主要包括顶区、颞区及部分的枕区和额区。见图1。

2.3相关性分析 大鼠脑梗死范围大小与神经功能缺损程度无显著相关(r=-0.196，P>0.05)。

图1 脑梗死模型大鼠术后6、12、24、48 h TTC染色脑组织切片(×40)

3 讨 论

神经功能缺损是影响脑梗死患者预后的一个重要原因，而目前影响神经功能缺损的因素尚未完全阐明。Nelson等〔3〕研究发现永久性脑缺血大鼠在术后2～24 h内缺血脑组织范围逐渐增大，但在24 h相对稳定，与本次研究有所差异，考虑原因可能是与总体观察时间长短及模型制作方法不同有关。但总体结果提示在制作脑梗死模型后，大鼠的脑血流阻断表现为渐进性过程，考虑原因为血栓形成后血流阻断及侧枝循环破坏所致〔4〕。

从TTC染色切片结果来看，不着色说明该区域脑细胞已经进入了不可逆的膜衰竭阶段，而半暗带的神经细胞则未处于膜衰竭期〔5〕，本次术后6 h染色中4只大鼠未见白色梗死灶，可能与术后早期栓线周围仍有血流通过有关〔6〕。本研究结果说明随着脑组织后循环代偿，大鼠的运动功能逐渐恢复，但这与梗死范围的扩大并无明显相关，主要是脑功能的重塑所致。Thanoon等〔7〕采用线栓法建立脑梗死大鼠模型，并实施了综合康复治疗，结果显示综合康复能够有效改善脑梗死大鼠的运动功能，但之后的脑组织切片却发现脑组织缺血面积并未明显减少。

综上所述，脑梗死模型大鼠的神经功能缺损程度先上升后下降，但脑梗死范围随时间延长持续扩大，神经功能缺损程度与脑梗死范围并无明显相关性。

1Koltsova EK，Garcia Z，Chodaczek G，etal.Dynamic T cell-APC interactions sustain chronic inflammation in atherosclerosis〔J〕.J Clin Invest，2012；12122(9)：3114-26.

2Heiss WD，Graf R，Grond M，etal.Quantitative neuroimaging for the evaluation of the effect of stroke treatment〔J〕.Cerebrovasc Dis，1998;28(2)：23-9.

3Nelson PT，Kondziolka D，Villemagne VL，etal.Clonal human neuron grafts for stroke therapy：neuropathology in a patient 27 months after implantation〔J〕.Am J Pathol，2002;170(4)：1201-6.

4Von Arbin M，Britton M，Faire U，etal.A stroke unit in a medical department Organization and the first 100 patients〔J〕.Acta Med Scand，2014;235(1)：231-5.

5Sakurai T.The role of orexin in motivated behaviours〔J〕.Nat Rev Neurosci，2014;15(11)：719-31.

6Tsuneki H，Sasaoka T.Hypothalamic orexin system regulates energy and glucose metabolism〔J〕.Nihon Yakurigaku Zasshi，2013;142(6)：316-7.

7Thanoon IA，Abdul-Jabbar HA，Taha DA.Oxidative stress and C-reactive protein in patients with cerebrovascular accident：the role of Ginkgo biloba extract〔J〕.Sultan Qaboos Univ Med J，2012;12(2)：197-205.