通络玉液汤对糖尿病大鼠大动脉管壁保护作用的机制

于春涛 胡 庆 杨丽军 张山起

(沧州医学高等专科学校，河北 沧州 061001)

糖尿病是引起动脉粥样硬化的主要原因之一，据文献报道，在40岁以上人群中病程5年以上的2型糖尿病患者并发血管病变达90.8%，并发血管病的发病率是非糖尿病患者的20倍〔1〕。糖尿病血管病变，即在糖尿病状态下的血管重构，是糖尿病心脑血管并发症的主要病理学基础，其发病机制尚未完全明了，临床治疗也没有有效的方法，本研究探讨通络玉液汤对糖尿病大鼠大动脉管壁保护作用的机制。

1 材料和方法

1.1临床材料 清洁级健康SD大鼠72只，体重170～190 g〔(购自天津军事医学科学院，编号：SCXX-(军)2009-003)〕。随机分为正常对照4、8 w组；糖尿病4、8 w组；通络玉液汤4、8 w组，每组12只。

1.2药物与试剂 通络玉液汤：生晒参8 g，生黄芪30 g，生山药20 g，麦冬15 g，知母10 g，花粉10 g，葛根10 g，五味子9 g，鸡内金6 g，丹参15 g，当归尾15 g，地龙8 g。以上中药均购自沧州同仁堂药店。将所购中药饮片浸泡，水煎煮30 min，过滤；再加水煎煮30 min，过滤，两次滤液合并，并浓缩成100%的液体(每毫升含原方生药1.7 g)，4℃冰箱保存备用。

1.3动物模型建立 大鼠适应性饲养1 w后，随机选取正常大鼠24只，其中12只为正常对照4 w组，另12只作为对照8 w组，普通饲料喂养；其余48只作为造模组给予高糖高脂饲料(20%蔗糖、10%猪油、2.5%胆固醇和67.5%基础饲料)分笼喂养4 w。第5周造模组大鼠禁食12 h，给予一次性腹腔注射链脲佐菌素(STZ，购自Sigma公司)30 mg/kg(将STZ溶于0.1 mol/L，pH4.4的柠檬酸缓冲液中，终浓度为2%，在冰水中进行，现配现用，5 min内用完)。注射72 h后采集尾尖血(禁食12 h)，检测血糖，浓度>16.7 mmol/L确定为2型糖尿病模型；正常对照组仅给予等量柠檬酸钠缓冲液(pH4.4)腹腔注射。将符合2型糖尿病标准的大鼠，分笼继续原饲料喂养，自由饮水。6 w后即成糖尿病血管病变模型，模型大鼠均以原饲料再继续喂养4 w和8 w。

1.4药物干预 将血管病变模型大鼠分组后分别开始给予药物干预：通络玉液汤组灌服通络玉液汤，剂量为17 g·kg-1·d-1；正常对照组和糖尿病组每日灌服相应剂量的生理盐水，每周根据大鼠体重及饲料消耗来调整药物剂量。

1.5血管内皮生长因子(VEGF)、肿瘤坏死因子(TNF)-α、血糖、血脂检测 禁食12 h后，给予10%水合氯醛0.3 ml/100 g腹腔注射麻醉，于颈总动脉取血，其中4 ml静置、分离血清，双抗夹心酶联免疫吸附法(ELISA)定量测血清VEGF、TNF-α(ELISA试剂盒购自上海建宁生物科技公司)，实验严格按照试剂盒说明书操作。其余血液用强生快速血糖仪检测血糖(GLU)，奥林巴斯AU400全自动生化分析仪测血脂〔三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)〕。

1.6数据处理 应用SPSS13.0软件进行t检验。

2 结 果

2.1各组血液指标变化 糖尿病4、8 w组GLU、TG、LDL-C、TC水平明显高于正常对照组，HDL-C水平明显低于正常对照组(P<0.01)；糖尿病8 w组GLU、TC水平明显高于糖尿病4 w组，TG、HDL-C水平明显低于糖尿病4 w组(P<0.01)；通络玉液汤4、8 w组GLU、TG、LDL-C、TC水平明显低于同时间糖尿病组(P<0.01,P<0.05)，HDL-C水平明显高于同时间糖尿病组(P<0.01)。见表1。

表1 各组生化指标

与正常对照组比较：1)P<0.01；与糖尿病4 w组比较：2)P<0.01；与糖尿病4、8 w组比较：3)P<0.05；4)P<0.01

2.2各组血清VEGF、TNF-α比较 糖尿病4、8 w组血清VEGF、TNF-α水平均明显高于正常对照组(P<0.01)，且与时间无关；通络玉液汤4 w、8 w组血清VEGF、TNF-α水平均明显低于糖尿病组(P<0.01)，与正常对照组差异无统计学意义(P>0.05)，且与用药时间无关，见表2。

表2 各组血清VEGF、TNF-α比较

与正常对照组比较:1)P<0.01；与糖尿病组比较:2)P<0.01

3 讨 论

本实验所用通络玉液汤是在玉液汤和生脉散的基础上加减化裁而来，玉液汤记载于《医学衷中参西录》，由清代著名医家张锡纯创立，具益气滋阴、固肾止渴之功。现代广泛应用于糖尿病、高血压等疾病。但对糖尿病血管病变的疗效未见报道。生脉散出自《医学启源》，是治疗气阴两虚证的常用方，近年来常用于治疗心血管病变等属于气阴两虚者。针对糖尿病血管病变气阴两虚，瘀血阻络的病机，本实验利用通络玉液汤，行益气养阴、活血通络之功，达到了治疗糖尿病血管损伤的作用。

VEGF在生理条件下，VEGF表达量很低，以维持机体内正常的血管生长、保持血管密度的生理稳定。可特异性地促进血管内皮细胞的有丝分裂，促进血管内皮细胞的生长、迁移。通过与细胞表面相应受体结合，激活胞内的信号转导途径，活化血管平滑肌细胞，并能促进炎性细胞在血管壁的黏附；增强血管通透性，引起血浆蛋白渗漏、血管壁水肿、炎症细胞的浸润，进而加重动脉粥样硬化〔2〕，其水平升高是平滑肌增生、内皮细胞损伤及功能紊乱的重要标志物〔3〕。

TNF-α在炎症和动脉粥样硬化过程中起重要作用〔4〕。①TNF-α对血管内皮细胞具有直接的细胞毒作用〔5〕；②大量的TNF-α会损伤机体，除损伤血管内皮细胞外，更重要的是可以放大炎性反应，刺激C反应蛋白等合成，加重炎性反应。TNF-α可加重局部缺血，促进血栓的形成，还通过上调黏附分子、一氧化氮和氧自由基引起组织损伤。TNF-α通过细胞间黏附分子1及E-选择素等黏附因子向内皮细胞表面聚集、黏附及渗出，加重炎性反应〔6〕；③TNF-α促进特异性细胞损伤蛋白的表达，例如醛糖还原酶、蛋白激酶C、有丝分裂激活蛋白激酶、诱导性一氧化氮合酶等〔7〕；④TNF-α是炎性介质连锁反应中最早的启动因子，浓度升高则可促进IL-6等炎性因子的合成和分泌，扩大级联反应，加速了糖尿病的发生发展〔8〕；⑤TNF-α可能参与内皮细胞自噬进而诱导炎症反应，还可以直接促进血管平滑肌细胞的分裂增殖〔9〕。长期的高血糖、血脂可直接抑制血管内皮细胞DNA合成和有丝分裂，增加细胞凋亡，延缓内皮细胞增殖，导致血管内皮损伤〔10〕。通络玉液汤可通过降低血糖、血脂、VEGF、TNF-α对血管壁内皮细胞、平滑肌发挥保护作用，同时也延缓了动脉硬化的发生和发展。

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