MYD88基因多态性与缺血性中风风痰瘀阻证患者MRI表现的相关性研究▲

韦宝平 古 联

(广西中医药大学第一附属医院，南宁市 530000)

缺血性脑卒中(ischemic stroke，IS)，属中医“中风”范畴，认为其基本的病机为人体阴阳失调，继而气血逆乱，上犯于脑，脉络不通而发病，主要临床表现为语言不利、口角涡斜、半身不遂，甚则卒然昏仆、不省人事的一种疾病[1-2]。研究表明[3-4]，在缺血性中风风痰瘀阻证中，MYD88 基因rs7744多态性与LDL水平显著相关，LDL代谢水平影响动脉粥样硬化的发生，与人体内动脉粥样硬化的发生相关。本研究选择MYD88基因的一个多态性位点rs7744，探讨MYD88基因遗传多态性与缺血性脑卒中患者的头颅MRI影像表现的关联性。现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2013年10月至2016年6月期间在广西中医药大学第一附属医院脑病科住院的患者，均为经临床及影像学检查确诊为缺血性中风风痰瘀阻证，共纳入631例，其中女266例，年龄38～100岁，平均69.5岁；男365例，年龄31～79岁，平均63.0岁。本研究方案经广西中医药大学第一附属医院伦理委员会审核并批准。所有研究对象均在知情同意原则下，签署知情同意书。

1.2 纳入标准 ①符合脑血管病学第四届全国学术会议(1995年在王永炎院士指导下)订正的《各类脑血管病诊断要点》的西医诊断标准；②符合1996年全国脑病急症科研协作组制订的《中风病诊断疗效评定标准(试行)》中风中医诊断标准以及相关证候的分型辨证标准；③研究对象在急性起病期行头颅CT检查排除出血性脑血管病，并于发病3 d内做头颅MRI检查包括常规序列和弥散加权成像序列(DWI)，成像显示有与神经系统定位诊断相对应的急性脑梗死病灶；④均有符合缺血性脑卒中临床表现为：言语不利、肢体麻木、半身偏瘫、口角歪斜等表现中的2个及2个以上；⑤均经2名经统一培训合格的主治医师职称或以上的中医医师(若2名中医医师对中医辨证不一致，则交由3名副主任医师及以上职称的专家小组讨论)诊断为缺血性中风风痰瘀阻证。

1.3 排除标准 ①由其他原因如脑外伤、肿瘤、感染、心源性栓塞、脑血管畸形等引起的缺血性脑中风；②合并其他疾病如自身免疫性疾病或严重感染性疾病或存在严重心、肝、肾功能障碍者；③既往有过重大传染病如梅毒、艾滋病等以及严重的精神性疾病者；④其他原因致MRI弥散加权成像序列等影像学资料不完整或不能完成既定血液样本指标检测者；⑤研究期间不配合者。

1.4 影像学资料收集 主要采集病灶大小、病变部位、病灶数目及对周围组织的影响。病变部位分为额叶、颞叶、顶叶、岛叶、枕叶、放射冠区、胼胝体、基底节区、丘脑、脑干、小脑。病灶大小：参照Adams分型将病灶成像中的最大径小于1.5 cm以下的定义为腔隙性梗死，病灶直径在1.6～3.0 cm之间的为小梗死，病灶直径在3.1～5.0 cm之间的为中梗死，病灶直径大于5.0 cm的为大梗死。病灶数目分为单发以及多发(1个梗死灶以上)。病灶对周围组织的影响主要依据病变是否出现中线移位和/或压迫脑室。

1.5 DNA提取 所有研究对象均在上午空腹抽取外周静脉血3 mL，抗凝并放置于-4℃恒温环境保存，7 d内检测其基因组DNA。应用北京天根科技有限公司生产的TIANamp Blood DNA Kit(离心柱形)血液基因组DNA 提取试剂提取血液基因组DNA，后分装为3管，放置于-80℃保存备用。

1.6 基因分型 采用基因组富集法从微列阵数据筛选出影响缺血性中风风痰瘀阻证的MYD88基因为候选基因，选取MYD88基因的1个位点rs7744的引物设计和合成以及基因型检测工作交予北京博淼生物科技有限公司完成。SNPs基因分型应用时间飞行质谱技术(MassARRAY)(Sequenom公司，美国)完成。引物应用Sequenom Assay Designer 3.1软件(美国Sequenom，San Diego，CA) 设计。

1.7 统计及分析 采用四种遗传模型分析基因多态性位点的关联性，其中，次要等位基因型(minor allele)较低频率用A1来表示，主要等位基因型(major allele)较高频率用A2来表示，见下表：

加性模型(Additivemodel)A1A1/A1A2/A2A2显性模型(Dominantmodel)A1A1+A1A2/A2A2隐性模型(Recessivemodel)A1A1/A1A2+A2A2等位基因模型(Allelicmodel)A1/A2

应用PLINK软件对缺血性脑卒中患者的MRI(头核磁共振)表现与基因型进行关联分析(http://pngu.mgh.harvard.edu/～purcell/plink/)。疾病与暴露的危险度的相关性采用比值比(OR)以及其95%可信区间(95%CI)表示。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 rs7744与梗死部位的关联分析 MYD88基因多态性位点rs7744与缺血性中风风痰瘀阻证梗死病灶发生在额叶、顶叶、颞叶、枕叶、岛叶、放射冠区、丘脑、小脑不存在统计学关联 (P均>0.05)；与梗死病灶发生在基底节区、脑干存在统计学关联 (P均<0.05)。见表1。

表1 MYD88基因多态性位点rs7744与梗死部位的关联分析

2.2 rs7744与梗死病灶大小的关联分析 MYD88基因多态性位点rs7744与缺血性中风风痰瘀阻证大、小梗死及腔隙性梗死不存在统计学关联(P均>0.05)；与中梗死存在统计学关联(加性模型、显性模型、等位模型P<0.05)。见表2。

表2 MYD88基因多态性位点rs7744与梗死病灶大小的关联分析

2.3 rs7744与梗死病灶数目及病灶对周围组织影响的关联分析 MYD88基因多态性位点rs7744与缺血性中风风痰瘀阻证病灶数目以及病灶对周围组织影响不存在统计学关联 (P均>0.05)。见表3。

表3 MYD88基因多态性位点rs7744与梗死病灶数目及病灶对周围组织影响的关联分析

3 讨 论

越来越多的证据提示缺血性中风是由环境与遗传因素的相互影响而引发的。近年来，相当多的研究关注遗传风险变异对缺血性中风的影响，且有研究[5]证实缺血性中风与多基因遗传相关。

髓样分化因子88(MYD 88)是TLRs信号转导途径中关键的转接分子, 是负责向下游转导信号的关键因子[6]。在TLR信号路径被激活后，MYD88作为其中一种关键的接头蛋白，首先被招募，然后介导下游的信号传导，最终致先天性免疫反应激活[7]。Wei等[8]发现在高脂饲养条件下的MYD88基因敲除小鼠的动脉粥样硬化病变速度明显减慢。刘洋等[9]通过实验研究发现MYD88蛋白依赖性信号通路介导了脑缺血损伤后产生的下游炎性反应。Vartanian等[10]研究发现缺血性中风后，脑组织死亡会出现TLR4/MYD88信号通路表达异常，引发下游的瀑式连级反应，可致脑组织损伤发生以及发展。综合上述，MYD88基因影响动脉粥样硬化形成，可能对缺血性脑卒中的起病发生作用，通过将祖国医学与基因遗传关联研究紧密接轨，可推动个性化医疗向精准医学的发展。

缺血性脑卒中早期起病隐匿，如何实现对IS的早期诊断和救治一直是临床医师关注的重点。MRI弥散加权成像(DWI)可在起病数分钟内敏感地检测体内水分子的布朗运动状况， DWI是发病早期精确地检测病灶的部位以及范围大小最为有效的方法[11]。另外，通过使用对比剂来成像的PWI (灌注加权成像) 也可以用来准确评价缺血组织当下的灌注状态。目前，在对缺血半暗带的研究中，DWI/PWI不匹配可以用来判定缺血半暗带，指导临床进行快速的溶栓治疗[12-13]。

辨证论治是中医在防治中风中的特点和精髓。陈永芊[14]发现缺血性脑卒中经络患者的辨证分型与MRI影像成像表现具有一定的规律特点，在发病部位上风痰阻络证、气虚血瘀证梗死的病灶部位分别多见于基底节区、放射冠区，痰热腑实证常见大片状梗死灶，缺血性中风患者的梗死部位、面积、数量在的MRI 影像表现与中医辨证分型的有一定的关联性。李宝然[15]研究亦显示脑 MRI-DWI(磁共振弥散加权成像)与缺血性脑卒中辨证分型存在相关性。以上研究提示，MRI可作为中医望诊的延伸，为中医辨证的客观化研究提供了更多的参考依据。杜亚强等[16]研究发现MTHFR基因多态性与脑缺血病变的影像表现呈明显统计学相关。还有研究[17]发现急性缺血性脑卒中患者在携带Apo E(携带载脂蛋白 E)基因ε4 等位基因时患者脑梗死灶体积比非携带者有明显的增长率，在同样的缺血程度下，也更容易发生脑梗塞，并且在颈动脉供血区发生梗死率更高。以上研究表明，基因多态性可能对急性缺血性中风的影像学特点存在影响，并且对缺血性脑卒中的病情发展和临床预后有影响。

综上所述，目前尚未有关于MYD88基因遗传多态性与缺血性中风风痰瘀阻证MRI表现的关联研究。本研究显示MYD88基因可能与缺血性中风的发生相关，其位点rs7744多态性与缺血性中风风痰瘀阻证患者在MRI成像显示病灶发生在基底节区、脑干有统计学关联，与发生中梗死有统计学关联。

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