银杏叶及其提取物对肉鸡生长性能、抗氧化及血清生化指标的影响

任小杰 李祥明 杨在宾 丁 晓 姜淑贞

(山东省动物生物工程与疾病防治重点实验室；山东农业大学动物科技学院1，泰安 271018)(山东省饲料质量检验所2，济南 250022)

长期以来，抗生素对于降低畜禽死亡、促进生长起到了积极作用，但其药物残留及食品安全问题逐渐显现，使得多国立法禁止使用抗生素[1]。天然植物及其相应提取物因具有纯天然、无毒副作用和无抗药性等优点，日益成为抗生素替代品的研究热点。银杏叶又名白果叶，是中国特有的植物，具有较高的应用价值，被用作药物已有500多年的历史，现已广泛应用于医疗、食品等领域[2]。银杏叶提取物(Ginkgobilobaextract, EGB)是用乙醇提取法从银杏叶中提取的一种物质，含有黄酮、萜内酯和酚类等多种生物活性成分，具有抗血小板活化因子、提高机体免疫功能及清除自由基等多种功效。杆菌肽锌作为一种畜禽专用抗生素饲料添加剂应用广泛，它能抑制肠道内有害微生物的繁殖，减少与宿主争夺养分，增进食欲，提高采食量，进而提高肉鸡的生长性能[3]。以往的研究中有关于银杏叶及其提取物在畜禽应用上的报道，主要用于提高生长性能[4-5]、改善胴体品质[6]、增强机体免疫[7-8]及抗氧化能力[9-10]。但是，关于银杏叶及其提取物的作用效果的对比鲜有研究。本课题组在前期的研究中发现，爱拔益加(AA)肉鸡饲粮中添加20、40、60 g/kg的银杏叶及0.4、0.8、1.2 g/kg的EGB，60 g/kg的银杏叶和0.8 g/kg的EGB添加组肉鸡营养物质利用率效果最好。本实验通过在饲粮中添加60 g/kg银杏叶和0.8 g/kg EGB，研究其对肉鸡生长性能、抗氧化和血清生化指标的影响，旨在为银杏叶及其提取物EGB在肉鸡生产上的推广提供参考。

1 材料与方法

1.1 实验材料

肉仔鸡(爱拔益加，Arbor Acres)购自山东省泰安市宁阳西岭家庭农场。银杏叶：临沂瑞康盛生物有限公司，粉碎过50目筛。采用waters alliance 2695高效液相色谱仪测定银杏叶及其提取物中总黄酮醇苷和萜内酯含量。采用外标法计算，总黄酮质量分数为0.54%，萜内酯质量分数为0.18%。银杏叶提取物(Ginkgobilobaextract, EGB)：临沂瑞康盛生物有限公司，采用乙醇提取法从银杏叶中提取的一种提取物。总黄酮质量分数为30.96%，萜内酯质量分数为8.91%。杆菌肽锌(Bacitracin Zinc, Bacitracin)：15%的杆菌肽锌预混剂：由福建省蒲城县绿康生化股份有限公司。

1.2 实验动物与分组

选取健康的1日龄爱拔益加(AA)混合雏鸡640只，随机分为4个处理，每个处理8个重复，每个重复20只鸡。实验采用单因素完全随机实验设计，对照组饲喂基础饲粮，实验组在基础饲粮的基础上分别添加60 g/kg的银杏叶、0.8 g/kg的EGB和0.02 g/kg的杆菌肽锌，用银杏叶等量替代基础饲粮中的麸皮。基础饲粮营养水平参照NRC(1994)肉仔鸡标准配制，其组成及营养水平见表1。实验期为42 d，分2个阶段饲养：前期1～21 d和后期22～42 d。

表1 基础饲粮组成及营养水平(风干基础)/%

注：1)预混料为每千克饲粮提供：VA 8 050 IU，VD33 000 IU，VE 30 mg，VK35 mg，VB12.58 mg，VB212.5 mg，VB64.5 mg，VB120.018 mg，氯化胆碱800 mg，泛酸钙13 mg，烟酸45 mg，生物素0.20 mg，叶酸1.20 mg，Mn 100 mg，Fe 80 mg，Zn 58 mg，Cu 8.8 mg，I 0.374 mg，Se 0.28 mg。2)代谢能为计算值，其余为实测值。

1.3 饲养管理

实验鸡采用舍内笼养，自由采食和饮水，持续光照，第一周温度保持在32 ℃，随后每周降低3 ℃，直至26 ℃为止。按照肉鸡正常免疫程序进行免疫。

1.4 测定指标及方法

1.4.1 生产性能指标

实验鸡每天以重复为单位记录采食量， 0、21、42 d，空腹称重。计算平均日增重(ADG)、平均日采食量(ADFI)及料重比(F/G)。

1.4.2 抗氧化指标

肉鸡21 d和42 d，每个重复选取1只体重接近平均体重的健康鸡，空腹12 h，翅静脉采血，分离血清，-20 ℃保存，用以测定血清抗氧化指标。随后折颈处死，分离肝脏，-20 ℃保存，测定肝脏抗氧化指标。

采用752型紫外可见光分光光度计(上海舜宇恒平科学仪器有限公司)测定血清总超氧化物歧化酶(T-SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)及组织蛋白质。测定均采用南京建成生物工程研究所的试剂盒并按说明书要求进行。

1.4.3 血清生化指标

采用日立HITACHI7600～020全自动生化分析仪测定总蛋白(TP)、白蛋白(Albumin)、甘油三酯(TG)及总胆固醇(TCHO)。TP含量采用双缩脲法测定；白蛋白含量采用溴甲酚绿法测定；TG水平采用甘油磷酸氧化酶法测定；TCHO水平采用氧化酶法测定。均采用日本和光纯药工业株式会社的试剂盒测定。

1.5 数据处理

数据采用SAS8.2软件进行统计分析，方差分析使用单因素方差分析(One-way ANOVA)，用Duncan氏法进行多重比较，P<0.05为差异显著。

2 结果与分析

2.1 生长性能

在整个实验过程中，肉鸡生长健康，无死亡情况。饲粮中添加银杏叶和EGB对肉鸡生长性能的影响见表2。相比于对照组，饲粮中添加银杏叶、EGB和杆菌肽锌均能显著提高21 d体重(P<0.05)，但是，各组之间42 d 体重、1～21 d 及1～42 d ADG、22～42 d ADFI和F/G差异不显著(P>0.05)。同时，与对照组和银杏叶组相比，EGB和杆菌肽锌显著提高1～21 d和1～42 d ADFI(P<0.05)、降低1～21 d和1～42 d F/G(P<0.05)。

表2 银杏叶及其提取物对肉鸡生长性能的影响

注：同行数据肩标不同小写字母表示差异显著(P<0.05)，余同。

2.2 血清抗氧化能力

银杏叶及EGB对血清抗氧化能力的影响见表3，相比于对照组及杆菌肽锌组，肉鸡饲粮中添加银杏叶和EGB能显著提高(P<0.05)21 d血清T-SOD，而银杏叶和EGB添加组42 d血清T-SOD较杆菌肽锌组显著提高(P<0.05)。同时，相比于对照组，饲粮中添加银杏叶、EGB和杆菌肽锌能显著提高21、42 d血清GSH-Px活性(P<0.05)，且以EGB添加组效果最为明显。各组间21、42 d血清MDA含量无显著差异(P>0.05)。

表3 银杏叶及其提取物对肉鸡血清抗氧化性能的影响

2.3 肝脏抗氧化能力

饲粮中添加银杏叶和EGB对肉鸡肝脏抗氧化能力的影响见表4，与对照组相比，饲粮中添加银杏叶、EGB和杆菌肽锌对肉鸡21 d肝脏T-SOD无显著影响(P>0.05)，而21 d肝脏T-SOD、GSH-Px活性以及42 d肝脏GSH-Px活性显著提高(P<0.05)。与对照组相比，EGB添加组21 d肝脏MDA含量显著降低(P<0.05)，银杏叶、EGB和杆菌肽锌添加组42 d MDA含量降低(P<0.05)。

表4 银杏叶及其提取物对肉鸡肝脏抗氧化性能的影响

2.4 血清生化

与对照组和杆菌肽锌组相比，饲粮中添加银杏叶和EGB能显著提高肉鸡21 d血清TP水平(P<0.05)，而降低21 d血清TG和TCHO水平(P<0.05)，见表5。EGB和杆菌肽锌添加组42 d血清TP和白蛋白含量增加，而EGB添加组42 d血清TP水平较银杏叶组显著提高(P<0.05)。同时，与对照组和杆菌肽锌组相比，银杏叶和EGB添加组42 d血清TG及TCHO水平显著降低(P<0.05)。

表5 银杏叶及其提取物对肉鸡血清生化指标的影响

3 讨论

3.1 银杏叶及其提取物对肉鸡生长性能的影响

本实验研究结果表明，银杏叶及EGB对肉鸡生长具有促进作用，曹福亮等[11]在1日龄黄羽肉鸡饲料中添加5～15 g/kg银杏叶生物饲料添加剂，到42日龄时，能显著提高肉鸡的ADG，其中以10 g/kg为最佳。杨小燕等[4]研究发现，饲粮中添加8 g/kg EGB显著提高肉鸡后期增重和饲料转化率，显著降低肉鸡腹脂率。臧素敏等[12]研究表明，添加0.3～1.2 g/kg EGB对肉鸡有一定的促生长作用，尤其以0.6 g/kg促生长明显，添加4.8 g/kg明显降低肉鸡的腹脂率。本研究结果显示，饲粮中添加60 g/kg银杏叶和0.8 g/kg EGB能够提高肉鸡21 d体重和1～42 d ADFI，降低肉鸡1～42 d F/G，这与杨小燕等[4]、臧素敏等[12]研究结果一致，这可能与银杏叶与EGB能保护肠道黏膜，提高营养物质利用率，促进动物生长有关[5,12]。陈强等[13]研究表明，饲粮中添加EGB能降低肉鸡的平均日采食量和料重比。EGB中含有的萜内酯是天然强活性的PAF拮抗剂，可抑制PAF诱导的肠道黏膜损害，因此EGB能很好的保护胃黏膜，增加肉雏鸡对营养物质的吸收量，改善肉鸡的生长性能[14-15]。同时，银杏叶及EGB中含有黄酮和萜内酯等多种活性物质，黄酮可作用于动物的下丘脑-垂体-靶器官生长轴，促进动物的生长[16-17]，这可能是银杏叶和EGB改善肉鸡生长性能的另一原因。另外，不同实验条件下，银杏叶及EGB在肉鸡饲粮中具有不同的添加剂量，可能是由于其有效成分含量不同及不同的提取工艺所致，同时，不同的饲养环境以及管理制度也会造成添加量的差异，因而有待进一步研究。

3.2 银杏叶及其提取物对肉鸡抗氧化性能的影响

机体的抗氧化性能是影响机体健康的重要因素。GSH-Px和SOD是机体内重要的抗氧化酶，GSH-Px可以清除在细胞呼吸代谢过程中产生的过氧化物和羟自由基，SOD可以清除超氧阴离子自由基，有保护细胞膜结构和功能完整的作用[18-19]。MDA的含量，反映体内自由基的数量[20]，自由基性质活泼，有极强的氧化反应能力，对机体有很大的危害性[21]。吴沁等[22]研究发现，银杏叶片能明显提高血浆SOD的活力，减少血浆中MDA的含量，表现出抗氧化作用。Zhao等[23]在肠胃内注射银杏叶针剂的小鼠中发现，其体内的GSH-Px、SOD和CAT含量明显升高，表明银杏叶通过提高机体内抗氧化酶的活性减少氧化损伤。Zhou等[19]研究发现，EGB能够显著改善机体的组织损伤，提高SOD活性，降低MDA含量。EGB能够阻碍活性氧发挥作用，清除超氧阴离子自由基、羟基自由基、过羟基以及含氮氧化物[24]。陈强等[13]研究报道，EGB可通过提高血清SOD活性、降低MDA含量等作用对四氯化碳致兔氧化损伤起到保护作用。本实验结果表明，银杏叶及其提取物对肉仔鸡血清MDA含量无显著影响，但不同程度的提高了血清和肝脏T-SOD和GSH-Px活性，降低肝脏中MDA含量。前人研究结果与本实验所得结果类似，银杏叶及EGB提高肉鸡抗氧化性能的作用与其所含的有效成分密切相关。银杏叶黄酮具有多酚羟基结构，能够提供活泼的氢质子，与油脂氧化产生的自由基结合成较稳定的产物，从而阻止油脂的自动氧化过程[10,25]。同时，机体抗氧化性能的提高，影响机体健康，从而促进肉鸡生长性能的提高。

3.3银杏叶及其提取物对肉鸡血清生化指标的影响

血清中TP和白蛋白的含量反映了机体蛋白质的吸收和代谢状况[26]。血清中TCHO和TG是反映机体脂类代谢水平的重要指标，TG是机体内存在最多的脂类，其含量升高与动脉粥样硬化性心血管疾病密切相关，TCHO是血液中所有脂蛋白所含胆固醇之和[18]，可以说明体内胆固醇的清除情况[27]。本实验研究发现，银杏叶及EGB能够降低血清TCHO和TG、提高血清TP，并且作用效果好于杆菌肽锌组。何玉琴等[28]研究发现，在蛋鸡饲粮中添加银杏叶超细粉，血清中TCHO含量明显减少，TG含量呈下降趋势。孙继辉等[25]研究发现，在肉鸡饲粮中添加2、2.5 g/kg的EGB使血清TP升高、TCHO和TG降低，并且作用效果好于抗生素组。陈梅霞等[28]实验发现，5 g/kg EGB和0.1 g/kg银杏黄酮均能降低小鼠血清TCHO和TG含量，说明EGB和银杏黄酮有调节血脂、脂蛋白-胆固醇代谢的作用。这些研究结果与本实验所得结果一致。大量资料表明：银杏叶含有黄酮类、萜内酯类、长链酚类等化学成分，其制剂或提取物的有效成分有降低血清胆固醇、改善血黏度的作用[9]。银杏叶改善肉鸡血清生化指标的作用效果没有EGB明显[29]，这可能是因为EGB的有效成分被分离出来，纯度更高，作用更明显。银杏叶及EGB能够降低胆固醇，调节血脂，增强肉鸡机体健康，与对肉鸡生长性能的影响相互呼应。

4 结论

4.1 饲粮中添加银杏叶及EGB可以不同程度的改善肉鸡的生长性能，提高肉鸡21 d体重、降低料重比。

4.2 银杏叶及EGB可以不同程度的改善肉鸡的抗氧化性能，使血清和肝脏中T-SOD和GSH-Px含量提高，MDA含量降低。

4.3 银杏叶及EGB可以降低肉鸡血清TG和TCHO含量，具有调节血脂作用。另外，银杏叶及EGB作为一种新型植物性生长促进剂，在一定条件下可以替代杆菌肽锌。

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