成都地区妇女宫颈人乳头状瘤病毒HPV52/58感染状况调查

张俊英,杨叔哲，邓 耀，贺苇军

(四川省成都市妇女儿童中心医院检验科 610031)

高危型人乳头状瘤病毒(HPV)感染可能造成女性高风险的宫颈癌病变。调查研究发现，HPV16、18是世界范围内主要感染的基因亚型,可导致70%宫颈癌病例，排名3～8位的基因型分别是HPV33、45、31、58、52、35，而亚洲地区 HPV52/58为常见感染的基因亚型[1-2]。CHAN等[3]统计全世界 HPV52/58所致的宫颈病变Meta分析指出亚洲 HPV52/58 所致宫颈病变高于其他地区(美洲、欧洲、非洲、大洋洲)，东亚HPV52/58感染显著高于亚洲其他地区(东南亚、南亚、西亚)。本文回顾分析2012年7月至2016年6月成都地区女性HPV宫颈癌筛查生殖道标本共58 650例，旨在对宫颈癌的筛查和相关疫苗的开发起到一定的作用,现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 收集2012年7月至2016年6月来本院做孕前检查或常规体检女性58 650例，年龄13～78岁，平均年龄32.56岁， 以20～29岁居多占39.60%。

1.2仪器与试剂 仪器包括Hema9600梯度基因扩增仪、YN-H16恒温杂交仪，采用亚能生物公司人乳头瘤病毒基因分型(23型)检测试剂盒(PCR反向点杂交法)。

1.3方法

1.3.1标本采集 采用亚能公司提供的专用HPV取样器深入宫颈口内2～3 cm采集女性宫颈脱落细胞，顺时针旋转 3～5周，停留10 s后慢慢取出取样器放入装有保存液的标本管中，旋紧管盖，送检。

1.3.2检测目的 HPV基因分型采用基因芯片检测技术检测23种HPV基因型，包括18种高危型(16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、82、83型)和5种低危型(6、11、42、43、81型)。

1.3.3试验步骤与结果判断 严格按试剂盒的操作规程进行，首先提取标本中的 HPV-DNA，再进行PCR体外扩增，随后将扩增产物与固定在膜上的23种HPV亚型探针进杂交，再通过洗膜,然后显色,最后结果判断。通过肉眼判断杂交信号的有无确定是否存在HPV感染，阳性点为蓝色，每一条膜条上都有PCR反应质控点和杂交显色点各一个,质控点不显色提示试剂失效或操作有误，需重新试验,出现多个阳性点判为多重感染。

1.4统计学处理 采用Excel2007统计处理数据，组间标本率的比较采用χ2检验分析数据，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.158 650例宫颈脱落细胞HPV52/58检出结果 共12 399例受检者感染HPV，总感染率21.14%，18种高危型感染率排例前5位的依次是HPV52(4.91%)、HPV16(2.92%)、HPV58(2.46%)、HPV53(1.96%)、HPV51(1.84%)，HPV52和HPV58顺序分别为第1位和第3位。

2.2HPV52/58随年龄分布情况

2.2.1不同年龄HPV52/58检出结果 在<20岁、20～<30岁、30～<40岁、40～49岁、50～<60岁、≥60岁年龄段女性HPV52感染率分别为7.86%、5.38%、4.57%、4.36%、4.89%、8.13%，HPV58感染率分别为6.29%、2.53%、2.21%、2.47%、2.82%、6.16%，<20岁和≥60岁年龄组的HPV52/58感染率高于其他年龄组(均P<0.05)，HPV52/58感染率随年龄曲线呈U型分布，具有两个感染高峰年龄段是<20岁和≥60岁。

2.2.2不同年龄组HPV52/58单一感染及与高危型和低位型混合感染情况 HPV52单一感染中，在 30～<50岁一重感染率最高(均P<0.05)，30～<40岁和40～<50岁与其他年龄比较(均P>0.05)，<20岁和≥60岁年龄组感染率最低(均P<0.05)；HPV58一重感染随年龄先低后升高最后降低(<20岁最低，在30～<40岁最高，在≥60岁降到最低点)，HPV58一重感染在30～<60岁(HPV58在30～<40岁、40～<50岁、50～<60岁比较，均P>0.05)感染率高于其他年龄(均P<0.05)，<20岁和≥60岁感染率最低(均P<0.05)。HPV52/58与高危型和低位型混合感染中，HPV52高危型混合感染在≥60岁感染率最高(均P<0.01)，HPV52低危型混合感染率随年龄分布曲线差异无统计学意义(P>0.05)，HPV58高危型混合感染率随年龄曲线差异无统计学意义(P>0.05)，HPV58低危型混合感染在<20岁感染率高于其他年龄(均P<0.05)，见表1。

表1 HPV52/58不同年龄组不同感染模式的感染率[n(%)]

2.3HPV52/58的感染模式 HPV52感染2 878例，最多十重感染，没有九重感染病例，具体为：一重1 708例(59.35%)，二重737例(25.61%)，三重279例(9.69%)，四重96例(3.34%)，五重32例(1.11%)，六重13例(0.45%)，七重7例(0.24%)，八重2例(0.07%)，十重4例(0.14%)。 HPV58感染1 444例，最多九重感染，没有八重感染病例，具体为：一重737例(51.04%)，二重555例(38.43%)，三重95例(6.58%)，四重32例(2.22%)，五重13例(0.90%)，六重7例(0.48%)，七重1例(0.07%)，九重4例(0.28%)。HPV52和HPV58皆以一重感染为主，HPV52和HPV58多重感染中以二重感染为主分别为62.99%(737/1 170)和78.50%(279/707)，多重感染率随合并感染的型别数增加逐渐下降。HPV52多重感染处在前5位基因型依次为16、58、81、53、51，每个基因型分别为215、191、182、153、149例；HPV58多重感染处在前5位的是52、16、81、53、51，每个基因型分别为191、105、91、78、64例。

3 讨 论

本研究18种高危型感染基因型与来自3个省大样本数据都证明了HPV52/58是我国女性宫颈分泌物HPV感染中排在前3位的位置，HPV52感染率高于HPV58感染率[4-6]。中国地域宽广，受到地理位置和民族生活习惯影响，HPV基因型的流行型别会有差异，本研究HPV52感染率为4.91%与重庆[4]4.55%、无锡[5]3.09%和山东[6]4.22%基本一致；本研究HPV58感染率为2.46%，与重庆[4]3.13%、山东[6]3.86%和无锡[5]1.92%相比,与重庆基本一致而比无锡稍高一些，说明成都HPV52/58感染率与重庆比较接近，可能与地理位置相近有关。中国的HPV52/58感染率比GUAN等[7]所报道的东亚稍低一些,东亚HPV52感染率为6.1%，2倍于其他地区(东南亚、南亚、西亚)；HPV58感染率为10.2%，4～12倍于其他地区(东南亚、南亚、西亚)。

HPV感染已被公认是宫颈癌发生的确切病因[8],HPV感染宿主细胞，病毒DNA以不同程度整合到宿主细胞，关于HPV52/58整合状态与宫颈病变的关系。袁艳[9]指出HPV52/58整合状态与宫颈病变之间无显著性关系；HPV52/58所致的宫颈癌中的E6、E7常常发生碱基的突变，这种基因突变可能在宫颈鳞状上皮病变和浸润癌的进展中发挥重要功能，正是因为HPV的E6、E7通过使宿主抑癌基因p53与和Rb失去活性，被认为是重要的致癌因子。

HPV52/58与宫颈病变的关系，冯余宽等[10]分析来自成都地区1 226例宫颈病变患者的基因型，在高危型病毒感染中，HPV58是造成宫颈炎和宫颈湿疣主要的基因型，HPV52同样也是造成宫颈炎主要的基因型，HPV52/58同HPV16一起是造成宫颈癌前病变的最主要的3个基因型，特别在CINⅡ和CINⅢ，HPV58和HPV16的感染更为突出。CHAN等[3]分析了HPV52/58在全世界女性ICC病变中感染率，HPV52和HPV58亚洲感染率分别为4.9%和7.9%，明显高于其他地区(美洲、欧洲、非洲、大洋洲)，并且HPV52/58感染率从CINⅡ到ICC病变的过程中东亚显著高于亚洲其他地区(东南亚、南亚、西亚)，东亚HPV52在CINⅡ、CINⅢ、ICC感染率分别为17.8%、15.2%、4.6%，东亚HPV58在CINⅡ、CINⅢ、ICC感染率分别为18.1%、18.0%、7.9%。为何亚洲女性HPV52/58感染高于其他地区，一方面因为遗传因素，亚洲女性存在HPV52和HPV58的遗传易感性[11]，另一方面亚洲女性存在HPV52和HPV58基因变种。CHAN等[12]指出在含E7基因突变患者中有HPV58感染的妇女发生宫颈癌的可能性约为无HPV58感染妇女的27倍，HPV58携带E720i/g63s基因突变的妇女比不携带该突变的妇女增加6.9倍的患癌率。

面对HPV52/58如此高的感染率，预防性疫苗是降低宫颈癌的最重要的途径，我国处在东亚的地理位置更应该重视HPV52/58对女性的感染，2017年1月首次在我国大陆进行HPV16和HPV18疫苗预防宫颈癌，对其他基因型感染仅只是有限交叉保护，对HPV52/58交叉保护更小[13]。因此我国疫苗的覆盖类型有必要考虑到HPV52/58，可能覆盖HPV52/58的九价疫苗比较符合我国的国情。

HPV52/58感染率随年龄不同,总体来说<20岁和≥60岁是感染的两个高峰期；这与重庆[6]研究结果一致，<20岁感染率高，可能跟此年龄段性行为活跃、免疫系统未被致敏有关。中老年人较高的感染率认为与机体免疫力下降有关。本研究中HPV52/58皆以一重感染为主，分析一重感染在不同年龄段的感染率，HPV52在30～<50岁一重感染率最高，但在≥60岁HPV52与高危型发生混合感染最高。HPV58在30～<60岁一重感染率最高，在<20岁HPV58与低位型发生混合感染率最高。我国首次获批准的疫苗是9～25岁，如果在没有感染HPV的女性中放宽年龄，充分考虑到高危年龄段那部分女性获得免疫疫苗的使用，也许更能有效降低宫颈癌的发生率，同时根据年龄段HPV感染特征加强高危年龄段女性预防HPV知识的培训和宫颈癌筛查，也能有效降低HPV感染率。

本研究HPV52/58多重感染中以二重感染为主，多重感染率随合并感染的型别数增加逐渐下降，符合高危型多重感染的一般特征，与其他研究一致[4-6]。多重感染是否增加宫颈癌的发生率，目前说法不一。SANDRI等[14]报道宫颈病变严重程度与HPV多重感染不相关，与HPV亚型密切相关，2/3的CIN患者的HPV16阳性。LEE等[15]研究显示，单一HPV感染可使宫颈癌患病风险增加19.9倍，而多重HPV感染使其风险增加31.8倍。HPV52/58多重感染也可能增加宫颈癌的风险，值得重视。

综上所述，HPV52/58是我国最常见的基因型，我国疫苗有必要考虑到HPV52/58覆盖；HPV52和HPV58一重感染高发年龄段分别为30～<50岁和30～<60岁，同时应重视多重感染严重性。

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