白及组培苗繁育组织继代培养研究

王高鹏 孟淑霞 程超民 公少波 白耀春 刘鹏科

（1洛宁县竹林研究所，河南 洛宁 471700；2洛宁县林业调查规划设计队；3洛宁县林业技术工作站；4河南绿普森农林科技有限公司）

1 材料与方法

1.1 材料处理

用酒精棉球将未开裂的成熟白及蒴果表面擦试干净，用0.1%升汞溶液消毒灭菌8min，无菌水冲洗5次，无菌滤纸吸干水分。在无菌超净台上将白及种子接种1/2MS培养基表面。

1.2 培养基

培养基为MS培养基，分别添加试验组所需生长调节剂置于培养瓶中，高压灭菌锅121℃灭菌30min，冷却备用。

1.2.1 出苗前：1/2MS+NAA0.1mg/L、1/2MS+NAA0.5mg/L、1/2MS+NAA1.0mg/L 3种培养基，分别添加蔗糖3%、琼脂1%、pH值5.8～6.0。每个处理15瓶，每瓶30mL。高温、高压灭菌后冷却备用。无菌接种，待种子萌发月余，用无菌镊子夹取白及小苗，进行继代培养。

1.2.2 出苗后：首先记录下各组继代之前白及芽苗的叶长记为C继代前，28天后记录下试验处理下的叶长C处理，由此可得白及芽的叶生长率K白及叶。计算公式如下：

1.3 处理方法

（1）MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L、MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.2mg/L、MS+6-BA1.5mg/+NAA0.5mg/L。

（2）MS+6-KT0.5mg/+NAA0.1mg/L、MS+KT1.0mg/+NAA 0.2mg/L、MS+KT1.5mg/+NAA0.5mg/L 3种培养基。

（3）MS+6-BA0.5mg/+2，4-D 0.1mg/L、MS+6-BA1.0mg/+2，4-D 0.2mg/L、MS+6-BA1.5mg/+2，4-D 0.5mg/L 3 种培养基，其中分别添加蔗糖3%，琼脂1%，pH值5.8～6.0。

培养基中分别添加蔗糖3%，琼脂1%，pH值5.8～6.0。每个处理15瓶，每瓶接种20株小苗。

2 结果与分析

2.1 不同浓度的6-BA、NAA对白及愈伤组织继代培养的影响

从接种过白及芽28天后，芽愈伤组织已渐渐显现出差别。当6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L时，白及小芽纵向生长旺盛，光合作用范围较大，但叶片窄而细长不利于植株的营养积累。

当6-BA1.0mg/L+NAA0.2mg/L时，白及芽苗生长茂密，且接种的芽都有旺长的趋势，叶宽而翠绿非常有利白及芽苗的营养积累。

当6-BA1.5mg/L+NAA0.5mg/L时，白及生长又发生衰退之势，接种20棵小芽都有小幅度生长，但芽叶没有明显旺长反而有萎靡不振的趋势，说明此时的NAA浓度对白及苗芽有轻微的抑制作用。

表1 6-BA+NAA对白及愈伤组织继代培养的影响

从数据表1中可以得到，6-BA+NAA组合对白及愈伤组织继代培养的积极作用浓度：6-BA1.0mg/L+NAA0.2mg/L＞6-BA0.5mg/L+NAA0.2mg/L＞6-BA1.5mg/L+NAA0.5mg/L。

2.2 不同浓度的KT、NAA对白及愈伤组织继代培养的影响

接种28天后，白及芽愈伤组织发生了形态上的完全变化：

表2 不同浓度的KT、NAA对白及愈伤组织继代培养的影响

2.3 不同浓度的2，4-D、6-BA对白及愈伤组织继代培养的影响

白及芽苗在培养瓶中生长28天后，白及芽生长形态没有太大的变化，白及芽苗仅生长了1cm多，但接种的每瓶20株小芽都没萎缩枯死，说明白及苗芽在2，4-D+6-BA的作用下，白及苗芽不适合在该浓度下叶生长，但没死亡说明本试验中2，4-D+6-BA的浓度对白及苗芽只有抑制作用。

2.4 不同激素及同浓度配比对白及愈伤组织继代培养的影响

表3 不同浓度2，4-D、6-BA对白及愈伤组织继代培养的影响

同种激素不同浓度的组合已作出结果分析，但具体哪一个才是白及愈伤组织继代培养的最佳方案，现下进行同浓度不同激素的配比来进行筛选，得到的结果如下：

2.4.1 生长素及细胞分裂素类似物低浓度时。对白及芽苗生长情况KT+NAA组合促进效果好，6-BA+NAA效果次之，2，4-D+6-BA组无明显生长；在这组NAA 0.1mg/L前提条件下，6-BA与KT进行比较可知，KT对白及苗的生理活性作用强于6-BA。

2.4.2.浓度达到1.0mg/0.20mg时。情况发生变化，6-BA+NAA组的苗长势良好，KT+NAA组的生长趋势稍次之，2，4-D+KT生长不明显；说明6-BA+NAA组合对白及苗增殖生长的最佳浓度处在1.0mg/0.5mg徘徊；但KT+NAA组的长势仍＞6-BA+NAA.。

2.4.3 生长素和细胞分裂素类似物浓度达1.5mg/0.5mg时。KT+NAA搭配组对苗的生长有明显的辅助效果，6-BA+NAA的壮苗长势不明显，2，4-D+6-BA几乎停滞不前。

3组中，2，4-D+6-BA组合对白及苗的生长促进作用甚微，KT+NAA组合增强植株的生存能力最佳，NAA 0.5mg/L+KT 1.5mg/L配合为白及苗增殖的优良方案。

3 讨论

白及组培繁育继代培养的关键是生长素和细胞分裂素的比例，其次才是所加添加剂的类别，在低浓度时，6-BA+NAA作用效果最好且易于控制；浓度升高时，NAA作用的抑制效果显现出来，而KT+NAA没有此作用，KT可通过增强植株代谢缓解NAA的副作用，故KT+NAA可作为高浓度下的良好选择；2，4-D+6-BA搭配中白及苗对2，4-D敏感，起抑制作用，且对苗来讲有轻微的毒性。KT+NA组合增强植株的生存能力最佳，NAA 0.5mg/L+KT 1.5mg/L为白及组培繁育继代培养的优良培养方案。

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