HPLC法测定创愈宁凝胶剂中5种大黄蒽醌类成分

2018-04-26肖飞彭红张婷金鑫江西中医药大学南昌330004

江西中医药 2018年4期

★ 肖飞彭红张婷金鑫（江西中医药大学南昌 330004）

创愈宁凝胶剂是由大黄提取物加卡波姆940、丙二醇、薄荷醇、三乙醇胺等适宜辅料制成的亲水性凝胶剂，属于中药外用制剂，主要用于治疗烧烫伤。

大黄作为历代医家本草和历版《中国药典》所收载的常用中药，来源于蓼科植物掌叶大黄Rheum palmatum L.、唐古特大黄Rheum tanguticum Maxim.ex Balf.或药用大黄Rheum officinale Baill.的干燥根及根茎［1］，性味苦寒，归脾、胃、大肠、心、肝经，主要分布于陕西、四川、甘肃、青海等［2］。其化学成分主要有蒽醌类、蒽酮类、萘衍生物类、鞣质类等［3］。具有泻下、降血脂、抗感染、改善肾功能等药理作用［4］，其游离蒽醌类成分亦具有抑菌抗炎等多种药理活性［5］。

大黄提取物作为创愈宁凝胶剂中主要有效成分，本研究首次通过对其有效成分中的5种大黄游离蒽醌的同时测定，初步确定高效液相法为其质量监测有效方法，为保障其质量提供依据。

1 仪器与试药

安捷伦1200高效液相色谱仪（包括四元泵、在线脱气机、自动进样器、柱温箱、DAD检测器），电子天平（北京赛多利斯电子仪器有限公司），GZX-9146MBE电热鼓风干燥箱（上海博讯实业有限公司），SZ-97自动三重纯水蒸馏器（上海雅荣生化仪器设备有限公司）。

创愈宁凝胶剂样品由江西悦耳医药有限公司提供，五批样品批号分别为20140520、20140522、20140524、20140601、20140606、20140610；芦荟大黄素（上海科顺生物科技有限公司，纯度为98.5%）、大黄酸（上海抚生实业有限公司，纯度为98%）、大黄素（南京森贝伽生物科技有限公司，纯度为98%）、大黄酚（上海研生实业有限公司，纯度为98%）、大黄素甲醚对照品（上海研生实业有限公司，纯度为98%）；磷酸（色谱纯），甲醇（色谱纯），自制三蒸水，其余试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1 溶液制备

2.1.1 对照品溶液精密称取芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚对照品约10mg、5mg、10mg、20mg、10mg，置于 50mL容量瓶中，加甲醇适量，再超声处理（功率250W，频率40kHz）30min，冷却至室温，用甲醇定容成质量浓度分别为 0.2001、0.1001、0.2002、0.4001、0.2002mg/mL的储备液。精密量取上述5种对照品储备液各2mL，置于10mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度即得。

2.1.2 供试品溶液精密称定本品约2g，置于具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50mL，称定重量，再超声处理（功率250W，频率40kHz）30min，冷却至室温，称定重量，再用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，后取续滤液即得。

2.2 色谱条件色谱柱为InertSutain C18（250mm×4.6mm，5µm）；流动相为甲醇-0.1%磷酸水溶液（85∶15）；流速为1.0mL/min；检测波长为254nm；柱温为25℃；进样量为20µL。

2.3 专属性精密吸取混合对照品、供试品溶液注入高效液相色谱仪测定。结果显示供试品溶液中5种大黄游离蒽醌成分得到很好的分离。见图1。

图1 混合对照品（A）和凝胶剂溶液（B）的色谱图

2.4 线性试验精密移取对照品储备液各0.5、1、2、3、4mL，置10mL容量瓶，用流动相定容至刻度。注入液相色谱仪分析。以色谱峰峰面积A纵坐标，浓度为横坐标进行回归分析。回归方程如下：芦荟大黄素Y=85.73X-23.51，r=0.9999；大黄酸Y=70.046X-4.1506，r=0.9999；大黄素 Y=58.161X-1.8159，r=0.9999；大黄酚Y=83.624X-12.027，r=0.9999；大黄素甲醚Y=17.816X＋8.5988，r=0.9999。结果表明，芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚分别在10.01～80.08、5.005～40.04、10.01～80.08、20.00～160.0、10.00～80.04µg/mL与其峰面积呈良好的线性关系。

2.5 精密度和稳定性试验精密量取同一混合对照品溶液，重复进样6次，记录芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚峰面积，计算RSD分别为：0.68%、0.76%、0.39%、0.86%、0.93%，结果表明仪器精密度良好。

取同一份供试品（样品批号：20140522）溶液分别于0、2、4、8、12h进行测定，记录峰面积，计算RSD分别为0.46%、1.10%、0.89%、0.96%、0.93%，结果表明供试品溶液在12h内稳定。

2.6 重复性试验取同一批号样品（批号：20140520），按照2.1.2项下的方法平行制备6份供试品溶液，在上述色谱条件下测定。计算6份供试品中芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的平均含量分别为0.81、0.46、1.30、2.43、1.59mg/g，RSD分别为1.10%、0.96%、0.88%、0.59%、1.20%。说明含量测定方法重复性良好。

2.7 加样回收率试验取已知含量的创愈宁凝胶剂样品（批号：20140522）6份，每份约1.0g，精密称定，分别精密加入芦荟大黄素、大黄酸对照品储备液各4mL，大黄素、大黄酚对照品储备液各6mL，大黄素甲醚对照品储备液8mL，按照2.1.2项下方法制备供试品溶液，在上述色谱条件下测定。计算回收率，结果见表1。