膝痹膏摩法对膝骨性关节炎兔血清IL-6、IL-1β、TNF-α水平的影响

摆 雪，刘俊昌,，王新军,*，孙 芸，张洪平,，马鑫文，辛春光

（1.新疆维吾尔自治区中医医院，乌鲁木齐 830000；2.新疆医科大学，乌鲁木齐 830011）

1.4 指标检测及方法

1.4.1 步态观察 采用David Coderre法步态分级评价[10]：Ⅱ级：行走时间＜3 min，中度跛行；I级：行走时间3～5 min，轻微跛行； 0级：行走时间＞5 min，正常行走。

1.4.2 IL-6、IL-1β和TNF-α检测 给药干预8周，末次给药的第二天取样，经耳缘静脉取血4 mL，3 000 r/min，离心10 min后，取上清液，用无菌EP管分装好后置于- 20 ℃冰箱保存，待检，严格按试剂盒说明书采用ELISA法测试血清中IL-6、IL-1β和TNF-α 含量。

1.5 统计学分析 采用SPSS 17.0统计软件进行统计学分析，计量数据采用均数±标准差（±s）表示，各组间比较采用ANOVA，各组间两两比较采用LSD-t。

2 结果

2.1 一般情况 正常组：兔膝关节内外侧间隙较明显，关节面光滑且平整，关节软骨色泽透明；模型组：兔膝关节内侧间隙明显变窄，关节面凹凸不平，边缘可见增生肥厚的软骨组织和部分剥脱凹陷，滑膜与关节软骨有少许黏连；干预组：兔膝关节内外侧间隙较模型组明显，关节软骨大体观察呈淡蓝透明白色，关节表面平整光滑，软骨与滑膜无黏连，滑膜表面光滑。

2.2 IL-6、IL-1β和TNF-α检测结果 运用单因素方差分析（ANOVA）统计各组白兔实验后血清中IL-6、IL-1β 和 TNF-α浓度。

各组IL-6浓度平均数值为模型组＞膝痹膏低浓度组＞手法组＞膝痹膏高浓度组＞正常组＞膝痹膏中浓度组，通过方差分析，F =12.835，P=0.000。用LSD-t进行两两比较分析，得出正常组与模型组比较，P =0.000，膝痹膏中浓度组与模型组比较，P=0.000，膝痹膏高浓度、低浓度和手法组与模型组比较，P=0.000，表明正常组、膝痹膏高浓度、低浓度、中浓度组、手法组与模型组差异皆有统计学意义，其中膝痹膏中浓度组IL-6浓度明显低于高浓度、低浓度和手法组（P＜0.05），而高浓度、低浓度和手法组之间不能认为有差异（如图1）。

图1 各组血清IL-6检测结果（μg/L）

各组IL-1β浓度平均数值为模型组＞手法组＞膝痹膏高浓度组＞膝痹膏低浓度组＞正常组＞膝痹膏中浓度组，通过方差分析，F=14.201，P=0.000，P＜0.05。用LSD-t进行两两比较分析,得出正常组与模型组比较，P=0.000，膝痹膏中浓度组与模型组比较，P=0.000，膝痹膏高浓度、低浓度和手法组与模型组比较，P =0.000，表明正常组、膝痹膏高浓度、低浓度、中浓度组、手法组与模型组的差异皆有统计学意义，其中膝痹膏中浓度组IL-1β浓度明显低于高浓度、低浓度和手法组（P＜0.05），而高浓度、低浓度和手法组之间不能认为有差异（如图2）。

图2 各组血清IL-1β检测结果（μg/L）

各组TNF-α浓度平均数值为模型组＞手法组＞膝痹膏高浓度组＞膝痹膏低浓度组＞膝痹膏中浓度组＞正常组，统计学上通过方差分析，P＜0.05。用LSD-t进行两两比较分析,得出正常组与模型组比较，P =0.000，膝痹膏中浓度组与模型组比较，P=0.000，膝痹膏高浓度、低浓度和手法组与模型组比较，P=0.000，表明正常组、膝痹膏高浓度、低浓度、中浓度组、手法组与模型组的差异皆有统计学意义，其中膝痹膏中浓度组IL-1β浓度明显低于高浓度、低浓度和手法组（P＜0.05），而高浓度、低浓度和手法组之间不能认为有差异（如图3）。

图3 各组血清TNF-α检测结果（μg/L）

说明膝痹膏高浓度、中浓度、低浓度和手法组都能降低膝痹兔血清中的IL-6、IL-1β和TNF-α浓度,且膝痹膏中浓度组IL-6、IL-1β和TNF-α浓度含量明显低于模型组。

3 讨论

膝骨性关节炎属于祖国医学中的“膝痹”范畴。祖国医学认为，本病的发生多由于肝肾不足，精血亏损，风寒湿邪侵入骨骼，以致瘀滞经络，运行失畅，不通则痛；现代医学认为：本病的病理表现主要是关节软骨发生退行性改变，骨质增生、软骨基质降解、关节软骨受损是其病理演变的关键[11]。大量研究发现，膝骨性关节炎的病变程度与IL-6、IL-1β和TNF-α的含量有关，炎性细胞因子IL-6、IL-1β和TNF-α是骨性关节炎发病过程中的重要介质，其中分解代谢因子IL-1β和TNF-α能够促进细胞外基质的降解，也能抑制软骨细胞内蛋白多糖和Ⅱ型胶原的合成[12]；IL-6是单核吞噬细胞等在IL-1、TNF-α等诱导下产生的一种细胞因子，IL-6作为炎症介质又可以增强TNF-α在关节疾病中的作用[13]。TNF-α能够促使滑膜成纤维样细胞增殖，使得滑膜组织纤维样变，并且增加滑液中细胞因子[14]。IL-1是最经典的炎症调节的始动因素，其IL-1β能促进软骨细胞凋亡，降解软骨细胞基质，直接干预滑膜和骨的代谢发生病变[15]。IL-1β对膝骨性关节炎的主要作用表现为：促进I、Ⅲ型胶原蛋白的合成；抑制透明软骨特征性Ⅱ、Ⅸ型胶原蛋白的合成；还能促进软骨细胞分泌金属蛋白酶，从而提高蛋白分子酶类的活性，进而对关节软骨进行降解[16-18]。大量研究证实：骨性关节炎的破坏可以被IL-1β、IL-6、TNF-α的选择性抗体、细胞因子受体拮抗蛋白、可溶性或转移性细胞因子受体的分子所修复，因此说明骨性关节炎的破坏与IL-1β、IL-6、TNF-α 的作用密切相关[19-20]。本实验用ELISA实验检测模型组中IL-6、IL-1β和TNF-α的含量，均较高，说明IL-6、IL-1β和TNF-α在骨性关节炎中起主要调控作用，能够介导骨性关节炎炎症的发生。

膝痹膏摩法为新疆医科大学附属中医医院推拿科治疗膝关节骨性关节炎的经验方法，该方法是方药与推拿手法的完美结合，临床研究中发现：该方法能够缓解膝关节疼痛和改善功能活动度，在临床上治疗膝骨性关节炎疗效显著[21]。课题组在前期的实验研究中亦发现，膝痹膏摩可以减轻膝骨性关节炎大鼠关节软骨基质的破坏及关节病损[22]。

本课题研究结果表明：膝痹膏中浓度配合推拿手法即“膝痹膏摩法”最有效地降低IL-6、IL-1β和TNF-α浓度；膝痹膏高浓度可能因为药物含量太高，凡士林羊毛脂的透皮吸收受到抑制。因此得出膝痹膏摩法能够抑制膝骨性关节炎软骨基质降解和关节软骨的破坏，从而延缓关节软骨的退变，其中膝痹膏中浓度摩法在降低血清中IL-6、IL-1β和TNF-α疗效显著。

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