东莞地区831例地中海贫血基因检测结果分析

华仙丽 ，李敬河 ，梁爱芬 ，雷亚丽 ，隋洪

(1、东莞康华医院，广东 东莞 523080；2、东莞市石碣医院，广东 东莞 523290)

地中海贫血（Thalassemia）是一组溶血性贫血病，呈现常染色体隐性遗传规律，是由于人体珠蛋白基因突变或者缺失而导致某种珠蛋白链合成障碍，造成α，β-珠蛋白肽链合成速率的不平衡而导致的溶血性贫血。地贫为世界上发病率最高、危害性最大的单基因遗传性疾病之一。据统计，广东省人群中α，β地贫基因的携带率高达11.07%，是地贫的高发区[1]，地中海贫血被列为广东省出生缺陷重点干预病种。东莞市地处珠三角，人口结构复杂，聚居了南方各省务工人员，有较复杂的基因背景。为此，作者对本地区疑似地贫的831名患者进行了α与β地贫的基因诊断，检测外周血，以期获得本地区地中海贫血病分布特征，为地贫的防控和降低出生缺陷积累资料。现报告如下：

1 资料与方法

1.1 标本来源 2016年1月至2017年7月，在东莞康华医院就诊的门诊和住院患者。平均红细胞体积 （MCV）＜82fL和 （或）平均血红蛋白含量（MCH）＜27pg做为初筛阳性指标[2]，共 831例标本。其中男259例，女572例，年龄1月～84岁，平均年龄28.59岁。其中368例进行血红蛋白电泳检测，HBA2＜3.5，HBF＜3.0(孕妇＜5.0) 检测 α 地贫基因，HBA2＞3.5同时检测α和β地贫基因[3]。463例患者未做血红蛋白电泳检测，血常规初筛阳性，同时检测α和β地贫基因。

1.2 样本采集和处理 抽取患者外周血2ml，EDTA-K2抗凝全血，及时送检，置于2～8℃冰箱中保存并于一周内检测。

1.3 仪器 ABI 2720基因扩增仪、DYY-8电泳仪、SHA恒温水浴摇床等。

1.4 试剂 采用深圳益生堂公司生产的地中海贫血基因检测试剂盒。严格按照试剂说明书进行操作与结果判读。

1.5 检测方法

1.5.1 缺失型α-地中海贫血基因检测采用跨越断裂点的PCR技术(也称裂口PCR，Gap-PCR)结合琼脂糖电泳技术，检测东南亚型缺失(--SEA)、右侧缺失 (-α3.7)、左侧缺失 (-α4.2)和泰国型缺失(--THAI)。

1.5.2 非缺失型α-地中海贫血基因采用PCR-膜反向点杂交技术(PCR-RDB)检测3种非缺失型α地中海贫血突变（Hb WS、Hb CS与Hb QS）

1.5.3 β地中海贫血基因检测采用PCR-膜反向点杂交技术(PCR-RDB)检测17种基因位点突变，分别是 CD41-42、IVS-2-654、-28、CD7l-72、CD17、βE、CD31、CD27/28、IVSI-1、CD43、-32、-29、-30、CD14-15、CAP、Int、IVS-1-5。

2 结果

831例受检标本中，检测到有基因改变（α及β地贫）的有625例，占总检测对象的75.21%，⑴α-地贫基因检测结果检出α地中海贫血基因携带者412例；检出率为 49.58%，其中--SEA/αα 302例，占α地中海贫血所有突变类型的73.30%，是东莞地区α地中海贫血主要类型，检出α杂合子391例，HbH 21例。α双重杂合子21例。α基因型分布见表1；⑵β-地贫基因检测结果 检出β-地中海贫血基因携带者243例，检出率为29.24%。检出10种β-地中海贫血基因突变类型，其中CD41-42/N 90例、βIVS-2-654/N 68例、CD17/N 35例、-28/N 30例，4种β-地中海贫血基因突变共217例，占所有β-地中海贫血突变类型的91.77%。检出2例复合型β-地中海贫血，1例IVS-2-654纯合子。β基因型分布见表2；⑶检测到αβ复合地贫30例，基因型分布见表3。

3 讨论

地中海贫血是一种常染色体隐性遗传病，只在纯合子（aa）时才发病，基因携带者（Aa）通常为正常表型，不需要进行治疗。部分地贫基因携带者并不知道自己是携带者，易被忽略。同型携带者婚配的下一代有1/4的机会患重症地中海贫血，出现严重贫血症状。α地中海贫血的HbBarts水肿胎多在妊娠晚期或出生后数小时内死亡，严重影响母亲的身心健康；HdH病终身轻度或重度贫血和肝脾肿大，但个体差异较大，严重者类似重型β地中海贫血症[4]，严重影响患者的生存质量。重型β地中海贫血由于几乎不能合成正常的珠蛋白，贫血严重，需要靠输血结合除铁剂治疗维持生命，不接受治疗的重症患儿常常因发育迟缓而呈典型的“地贫面容”，常在五岁以前因严重贫血或继发感染在儿童期死亡[5]，为家庭和社会带来沉重的精神和经济负担。目前对携带者检查及产前基因诊断是唯一防止重症患儿出生有效措施。所以应用DNA分析技术对该病进行早期产前诊断并选择性终止妊娠防止重型地中海贫血患儿的出生，是目前国际上公认的首选办法，有着重要的优生学意义[6]。

表1 α-地中海贫血各基因突变类型及比例(n，%)

表2 β-地中海贫血各基因突变类型及比例(n，%)

表3 αβ复合型地中海贫血检测结果

本实验以MCV<82fL和 （或）MCH<27pg做为初筛阳性指标，初筛阳性的831例标本，检测到有基因改变（α及β基因）的有625例，占总检测对象的75.21%，检出α-地中海贫血基因携带者412例，占基因阳性者65.92%；检出β-地中海贫血基因携带者243例，占基因阳性者38.88%；其中α及β复合地贫30例，占基因阳性者4.8%。

在831例受检人群中，共检出标准型--SEA/αα302例，占检出α-地中海贫血的73.30%，是东莞地区α-地中海贫血的主要类型。检出静止型62例， 其中-α3.7/αα 42 例，-α4.2/αα20 例， 分别占α-地中海贫血突变类型的10.19%及4.85%。与何怡等[7]的报道相似。 数据显示，--SEA/、-α3.7/和-α4.2/最常见的3种基因缺失类型，占α地贫的91.99%（379/412）。另外本数据还检出--THAI携带者 5 例，α 点突变（WS、CS、QS）携带者 28 例，检出HbH 21例。虽然α地贫大部分的患者可以用Gap-PCR方法进行诊断，但也不能忽视点突变型α地贫，因为点突变型血红蛋白H病 （如--SEA/αCSα，--SEA/αQSα） 的贫血症状比缺失引起的血红蛋白H病更严重。

不同地区、不同种族的人群常见β基因突变类型存在差别[6，7]。本实验检出10种β-地中海贫血基因突变类型，CD41-42/N(90 例，37.04%)、IVS-2-654/N(68 例，27.98%)、CD17/N(35 例，14.40%)、-28/N(30 例，12.35%)共占 91.77%(223/243)，说明这 4种突变类型是东莞地区最常见的β基因突变类型，与广东广州、深圳地区同类研究结果相似[9-11]。与广东中山、梅州、汕头地区[12-14]的β地贫的携带类型有区域性差别。迄今为止，中国人群已发现30余种β珠蛋白基因的点突变，本实验检测的17种基因型覆盖了我国β突变类型的95%以上[15]，本实验所用方法（PCR-RDB）无法检出缺失型β-地中海贫血和其他少见的β突变类型。因此，在产前检查中对于地贫初筛阳性，HbA2升高提示存在β地贫，而常规PCR-RDB方法未检测到突变者要进行测序分析，避免罕见突变β地贫患者的漏诊，从而避免罕见突变引起重型β地贫患儿的出生[16]。

在831例受检人群中，发现α及β复合地中海贫血30例，占基因阳性者4.8%，在表型筛查中，α及β个体的HbA2值在3.5至6.8之间，因此，临床上易误诊为单一的β地贫携带者，产前诊断中若仅进行β-地贫基因诊断，忽视α-地贫基因诊断，会导致重症α地贫患儿的出生[17]。因此，在HbA2升高的可疑地贫人群中，有必要α和β基因一起检测，以免漏检α和β地贫基因携带情况。

由于东莞地区人群多来自广东，广西，湖南，海南等地贫高发地区，开展地贫的宣传教育和大规模人群筛查，对指导优生优育有着重要意义。本研究结果有助于更深入地了解东莞地区地中海贫血基因突变的类型、频率和分布，也为在当地开展地贫防治知识的宣传、遗传咨询、产前诊断、防止重症地贫患儿的出生等工作提供有力的支持。

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