丹参调节肾组织AQP2效应与其活血利尿功效的相关性研究

吴庆昕

河南省息县人民医院中医科(息县464300)

祖国医学称“血不利则为水，血水本同源”，提示血和水在生理上相互化生且功用相近，病理上则“瘀水关联”，强调对血瘀证治疗关键是活血利水。水通道蛋白2(AQP2)广泛存在于肾脏远端小管和集合管的主细胞顶膜中，其作用作用是参与尿浓缩和稀释功能，和肾的“利尿”作用相近。丹参作为临床上应用最广泛的中医药材，其具有“活血化瘀、曲瘀止痛、凉血养血，安神”等功效，现代药理学证实，丹参具有降低血液黏度、抑制血小板聚集、抗血栓形成，同时能改善微循环和减少血管内皮细胞损伤，能降低血管通透性，能减少组织水肿，同时能调节AQP2表达[1]。研究[2]指出，中医活血利尿本质是上调AQP2蛋白表达，促使局部肌肉和肾组织水吸收入红细胞和血浆，通过代谢将水液消耗，降低AQP2蛋白表达，促使肾组织水通过尿液排出，实现消肿利尿，从而减轻组织血瘀和水肿病理状态。基于此，本次研究做如下实验，以证实该结论，为临床用药提供有力依据。

材料与方法

1 材 料 收集30只大鼠，分成正常组、模型组和丹参组，每组均为10只，均为雄性，体重150～210g，平均(180±20)g；药物均购自复旦大学临床实验室研究中心，丹参根据《中国药点》提取称丹参干燥成粉剂，给药前用生理盐水调成混悬液，将丹参调剂成1g/ml。

2 方 法 将30只大鼠分成三组，正常组不建立模型，每日常规喂养生理盐水10 μl/g。模型组和丹参组则采用定量化打击法进行造模型，即将大鼠右后肢放置在打击器上，砝码为500 g，高度为58 cm，自由落下后打击在后肢内侧中上部，成功标志为单侧肢体跛行，无皮肤破损，无出血，无骨折，模型组继续生理盐水10 μl/g灌胃，丹参组则用丹参混悬液1 g/kg灌胃，均连续治疗1周。12周后处死，取局部肌肉和肾组织，部分标本迅速放入在4%多聚甲醛中进行固定，进行免疫组化和病理学观察，用肾组织匀浆Western Blot法检测AQP2蛋白表达。观察在肾组织AQP2蛋白表达情况。

结 果

1 各组尿量和AQP2浓度等指标比较 尿量上以丹参组含量最高，和其他两组比较差异显著(P<0.05)，而在AQP2浓度、肾组织AQP2表达、Western blot表达上以模型组最高，和其他两组比较差异显著(P<0.05)，而正常组和丹参组在以上三个指标上比较差异则不显著(P>0.05)，见表1。

表1 各组尿量和AQP2浓度等指标比较

2 三组病理组织学观察 正常组肌纤维结构清晰，肾小球正常，肾小管上皮细胞排列整齐。模型组局部肌纤维索损伤，周围炎性细胞浸润显著，肾小球不同程度扩张，上皮细胞增生，毛细血管肿胀，肾小管扩张变性，毛细血管充血显著。丹参组肌纤维接近正常，肾小管-间质变显著改善，仅有少数毛细血管扩张，但程度均较轻。

讨 论

水通道蛋白是近20年发现的一种广泛存在机体各器官组织内，对水高度选择性的细胞膜转运蛋白，其主要分布在和液体吸收和分泌紧密相关的内皮细胞和上皮细胞上，参与调节和水跨细胞膜转运相关的病理和生理过程[3-4]。目前对AQP在临床上可分成13个亚型，AQP2主要分布在肾脏中，其主要是表达在远端小管和集合管主细胞顶膜中，其主要参与尿液稀释浓缩。研究[5-6]称，AQP2集合管中约有3%随尿液排出体外，在不同生理或病理下，其排出量不同，故可将AQP2作为肾功能的一个重要检测指标。

结果显示，AQP2浓度、肾组织AQP2表达、Western blot表达上以模型组最高，而在尿量上则以丹参组最高，这点和报道[7-8]结论是一致的，实验证明，糖尿病肾损伤模型组织AQP2表达增多，丹参则能显著降低糖尿病大鼠肾组织中的AQP2蛋白表达，在肾脏AQP1高表达中近端小管和髓袢支细段上皮细胞顶膜和侧膜，其主要参与水重吸收。当AQP1表达下降则代表肾脏对水重吸收功能减弱，AQP2表达增加则表示其原尿重吸收能力增加，故两者有协同作用，能促使尿量增加[9]。这也证实外伤后血瘀证大鼠在AQP2表达上增加显著，故尿液较正常显著增加。

丹参在临床上能降低血管通透性，能减轻血管源性水肿，能增加肾血流，且有利尿、调节肾组织局部微循环等作用。研究[10-11]指出，丹参能上调急慢性肺损伤的微血管内皮细胞AQP2蛋白的表达，能降低胆汁淤积性肝硬化大鼠肝硬化AQP2表达。报道称，丹参能减轻血瘀证大鼠局部肌肉和肾组织血管内皮细胞损伤，能调高血管内皮细胞膜中的水通道蛋白表达，能减轻局部肾组织瘀肿，故丹参有很好“活血消肿”作用。结果显示，丹参组在AQP2浓度、肾组织AQP2表达、Western blot表达上和正常组相近，而在尿量上则显著高于正常组和模型组，且在病理组织学上也和正常组相近，这证实丹参能下调肾组织AQP2表达，能增加肾排出尿液功能[12-15]，推断出AQP2能促使肾小管对原尿水重吸收有关，故丹参的活血功效其中主要和肾脏的利尿是一致的。

总之，丹参能降低肾脏远端小管和集合管主细胞的AQP2表达，能升高近端血管上皮细胞的AQP1表达，故其能减少肾对原尿的重吸收功能，增加尿量，同时能减少肾水肿。而当体内水液不足，则AQP2表达增加，尿量减少，因AQP2能随尿液排出3%，故其能在一定程度上反映肾组织利尿和水肿疾病相关性[16-17]，故丹参的“活血利尿”功效可能和其调节肾小管AQP2水平紧密相关[18-19]。

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