膜性肾病患者人类白细胞抗原-DP基因多态性与黄葵胶囊疗效的关系

杨凤文　陈素枝　藏倩男　袁国栋　檀金川　

(河北省中医院肾病科，河北　石家庄　050011)

1天津中医药大学2河北医科大学

膜性肾病(MN)病理主要表现为在肾小球上皮下沉积大量免疫复合物，而临床主要表现为无症状的蛋白尿〔1〕。流行病学调查显示，过半的MN患者会发生肾功能恶化，急需及时、规范、合理的治疗。MN的具体发病机制尚未完全清楚〔2〕。近年来，中成药对MN病的治疗效果越来越受到重视。其中，黄葵胶囊是国内研究较多的一种中成药〔3〕。现有研究发现，黄葵胶囊对MN患者的疗效具有遗传差异性，提示机体遗传因素导致黄葵胶囊治疗的个体差异〔4〕。人类白细胞抗原(HLA)Ⅱ类基因是迄今为止研究最多的人类遗传因素之一，主要分为HLA-DQ、DR、DP三个亚型〔5〕。本课题组前期研究发现，HLA-DP基因rs3077位点多态性与膜性遗传的发病风险存在关联，且对MN患者的肾功能也存在影响〔6〕。本研究探讨MN患者HLA-DP基因rs3077位点多态性与黄葵胶囊治疗MN疗效之间的关系。

1　对象与方法

1.1研究对象本研究获河北省中医院伦理委员会的批准。研究对象均为河北省中医院收治且病理学诊断为MN的患者，共计139例。入选标准：①患者均符合Ehrenreich-churg MN的诊断标准；②年龄18～70岁；③汉族；④自且确保完成实验过程。排除标准：①其他肾脏相关疾病；②妊娠或哺乳妇女；③心、脑、血管、肿瘤等严重原发性疾病；④未能坚持完成整个实验者。

1.2治疗方案所有研究对象口服黄葵胶囊治疗(生产企业：苏中药业集团股份有限公司，批准文号：国药准字Z19990040)，5粒/次，3次/d，治疗周期为8 w。治疗前后观察指标包括24 h尿蛋白、血清肌酐和血清白蛋白。按照MN疗效标准，完全缓解：尿蛋白量<0.3 g/d，血清白蛋白正常68例为完全缓解组。部分缓解：尿蛋白量0.3～2.9 g/d，血清白蛋白≥30 g/L 39例为部分缓解组。此两组为有效组。无效：未能达到上述缓解标准32例为无效组。

1.3DNA提取和HLA-DP基因rs3077位点分型采集研究对象外周静脉血5 ml，通过酚-氯仿法提取细胞DNA。运用ABI公司设计的TaqMan-MGB荧光探针实时定量聚合酶链反应(PCR)法检测rs3077位点基因型。探针和引物均由南京骥骜生物技术公司设计，探针序列为P-C：FAM-AAACTACCCCAGTGGC-MGBP-T：HEX-AAACTACTCCAGTGGCT-MGB，引物序列为F：TCAGCTTTTCTTCTCACTTCATGTG；R：GAGCTTGAAG-GGTCAGCAATT。反应在ABI 7900 PCR仪中进行，采用SDS2.3软件读取检测数据。

1.4统计分析应用SPSS17.0软件进行Logistic回归分析、方差分析及χ2检验。

2　结　果

2.1不同疗效组别HLA-DP基因rs3077位点基因型分布情况完全缓解组中GG基因型分布低于部分缓解组，部分缓解组中GG基因型分布低于无效组。rs3077位点AA基因型在无效组中的分布显著低于有效组(OR=0.19，95%CI=0.04～0.90)；rs3077基因型在完全缓解组和部分缓解组中分布差异无统计学意义(OR=0.21，95%CI=0.21～1.16)。见表1。

2.2不同rs3077位点基因型组别中各项血生化指标的分布不同rs3077位点基因型组别中24 h尿蛋白的分布水平差异有统计学意义(P=0.04)，血肌酐和血清白蛋白在不同rs3077位点基因型组别中分布差异无统计学意义(P均>0.05)。见表2。

2.3不同rs3077位点基因型组别中不良反应情况25例发生不良反应(GG 5例、GA 14例、AA 6例)，主要表现为胃肠道反应，肺部感染反应等。不良反应个体在不同rs3077位点基因型组别中(GG 46例、GA 51例、AA17例)差异无统计学意义(χ2=3.89，P=0.11)。

表1　不同疗效组别HLA-DP基因rs3077位点基因型分布情况〔n(%)〕

1)为完全缓解组+部分缓解组vs无效组；2)为完全缓解组vs部分缓解组

表2　不同基因型组别中血生化指标分布

3　讨　论

周劲峰等〔7〕最早探讨了HLA-DP位点等位基因多态性对鼻咽癌发病风险的影响，然而未能发现HLA-DP位点等位基因多态性与鼻咽癌发病存在关联。在一项日本学者开展的全基因组关联分析(GWAS)研究中发现，HLA-DP基因rs3077位点多态性与肝细胞癌的发病风险有关〔5〕。张凯等〔8〕在北方汉族人群中发现，rs3077可能是女性宫颈癌的易感性位点。本课题组前期研究发现，HLA-DP基因rs3077位点多态性与MN发病风险存在关联〔6〕。

黄葵胶囊具有抗湿、消炎、保护肾小管上皮细胞等功能。临床上，黄葵胶囊广泛应用于肾脏相关疾病〔9〕。本研究结果发现，HLA-DP基因rs3077位点多态性可能与黄葵胶囊治疗MN的疗效有关。本文提示携带AA基因型的患者黄葵胶囊治疗效果较好。携带AA基因型的MN患者最终治疗效果较好。黄葵胶囊的主要成分总黄酮元素，其可以抑制湿热型慢性炎症反应，从而抑制机体免疫反应〔10〕。携带AA基因型的个体HLA-DP mRNA表达较少，从而削弱了HLA分子在固体免疫和适应性免疫方面的功能〔11〕。因此，抑制机体免疫可能是黄葵胶囊和rs3077位点AA基因型共同作用于机体的结合点，从而发挥联合作用。

本研究在该领域尚属首次，也存在一些不足，如本研究样本量不够多，且研究对象局限于本院，不可避免存在选择偏移，因此，还需进一步扩大样本量，在其他人群中进行验证；此外，rs3077位点位于HLA-DP基因3′-非编码区，不能排除该区域其他位点也可能影响黄葵胶囊治疗MN的疗效。

1Grupper A,Cornell L,Lorenz E,etal.Recurrent membranous nephropathy(mn) post-kidney transplant(ktx).treatment and long term implications〔J〕.Am J Transplant,2014;14:97-8.

2丁小强,刘春凤.特发性膜性肾病研究进展〔J〕.中国实用内科杂志,2011;31(2):108-12.

3谭富媛,汪卫.黄葵胶囊治疗难治性膜性肾病的临床疗效观察〔J〕.中国中西医结合肾病杂志,2010;11(9):819-20.

4胡桂才,黄兰,赵亚娟,等.黄葵胶囊对特发性膜性肾病患者 ET-1 及 PAI 的临床研究〔J〕.中国中西医结合肾病杂志,2012;13(4):346-7.

5Kamatani Y,Wattanapokayakit S,Ochi H,etal.A genome-wide association study identifies variants in the HLA-DP locus associated with chronic hepatitis B in Asians〔J〕.Nature Genetics,2009;41(5):591-5.

6杨凤文,冯忖,陈文军,等.人类白细胞抗原DP基因多态性与特发性膜性肾病遗传易感性研究〔J〕.现代预防医学,2017;44(11):2108-12.

7周劲峰,郭实士,余平.湖南汉族人群 HLA-DP,-DQ 位点等位基因多态性与鼻咽癌的相关性〔J〕.中华医学遗传学杂志,2003;20(3):262-4.

8张凯,孙萍,郭兰伟,等.中国北方汉族女性 HLA-DP/DQ 基因多态性与宫颈癌易感性的关联研究〔J〕.中国肿瘤,2013;22(6):442-7.

9李鑫,蔡兰英,党毓起.黄葵胶囊联合用药治疗肾性蛋白尿的临床研究进展〔J〕.中国现代医药杂志,2014;16(8):109-12.

10徐丽云.黄葵胶囊在慢性肾炎治疗中的研究新进展〔J〕.医学理论与实践,2015;28(19):2605-6.

11O′brien TR,Kohaar I,Pfeiffer RM,etal.Risk alleles for chronic hepatitis B are associated with decreased mRNA expression of HLA-DPA1 and HLA-DPB1 in normal human liver〔J〕.Genes Immun,2011;12(6):428.