急性喉炎患儿T淋巴细胞亚群差异性分析

隋丽丽，孟 娟，孙 平

(山东省高密市妇幼保健院儿二科，山东 高密 261500)

小儿喉炎是小儿常见病之一，分急性与慢性两种，是一种咽喉黏膜与淋巴组织的炎性病变，一般反应较为剧烈[1]。该病常见于婴幼儿，高发年龄段为1～3岁、有春冬季节高发的特点，临床表现为声音嘶哑、干咳，“空空”样咳嗽，似犬吠状，多数患儿伴有不同程度发热，其中轻中度发热占大多数，高热则较为少见[2-3]。小儿发生喉炎后，因其喉腔狭小，喉部黏膜组织松弛，黏膜淋巴管丰富，极易发生水肿阻塞咽喉，导致呼吸困难，所以患儿常伴有焦躁不安，情绪波动较大，敏感易怒，夜晚病情加重等特点。另外，小儿急性喉炎多伴有免疫功能低下，但有关方面研究不足，有待进一步探讨。T淋巴细胞亚群指标和红细胞免疫指标可以反映患儿的免疫状态，而痰液炎性因子的表达水平则可较为准确地反映患儿局部炎性反应严重程度，具有较高的研究价值。因此本次实验对小儿急性喉炎患儿与同年龄段健康儿童的免疫功能相关指标进行对比分析，探究患儿体内T淋巴细胞亚群、红细胞免疫指标和痰液相关炎性分子表达水平的变化情况，现报道如下。

1资料与方法

1.1一般资料

选取2016年2月至2017年2月山东省高密市妇幼保健院儿科收治的急性喉炎患儿56例为实验组。纳入标准：根据《实用儿科学》[4]中有关小儿急性喉炎诊断的相关标准确诊；患儿呼吸困难、体温升高；咽喉肿痛、吞咽困难。排除标准：患有其他免疫功能疾病者；患其他呼吸道疾病者；伴随严重器质性病变者。实验组患儿男28例，女28例；年龄为0.9～12岁，平均3.98±0.21岁；病程3～15天，平均7.29±4.56天。另选体检中心健康儿童56例为对照组，其中男29例，女27例；年龄0.8～12岁，平均3.88±0.16岁；两组小儿性别、年龄一般情况比较差异均无统计学意义(均P>0.05)，具有可比性。本次实验小儿监护人已签署自愿同意书，且获我院伦理委员会批准。

1.2方法

1.2.1 T淋巴细胞亚群指标的检测

采集两组小儿上午10时前的空腹静脉血4mL于肝素管内。利用试剂(购自USA BD)对血液样本进行处理，采用流式细胞仪[赛默飞世尔科技(中国)有限公司生产，型号：Attune NxT]检测小儿外周血中T淋巴细胞亚群CD3+、CD4+和CD8+细胞含量，并计算CD4+/CD8+比值。

1.2.2红细胞免疫指标的检测

采集两组小儿静脉血4mL于肝素管内。利用补体致敏和未致敏的酵母多糖冻干试剂(购自北京大学人民医院免疫研究室)对血液样本进行处理，采用酵母群红细胞花环实验改良法检测红细胞免疫指标，包括：酵母菌红细胞花环率(RBC·C3bRR)，红细胞免疫复合花环率(RBC·ICR)，协同肿瘤红细胞花环率(collaborative tumor erythrocyte rosette，ATER)、直向肿瘤红细胞花环试验(erythrocyte rosette test，DTER)、肿瘤红细胞花环率(erythrocyte rosette rate，ETER)、免疫黏附促进因子(immune adhesion promoting factor，FEER)、免疫黏附抑制因子(immune adhesion inhibitory factor，FEIR)。

1.2.3炎症因子的检测

所有小儿在就诊2小时内用无菌棉签采集咽喉部分泌物。痰液取样方法：用弯压舌板向后压舌，用棉拭子伸入咽部，小儿因压舌刺激咳嗽时，可喷出肺部或气管分泌物粘在拭子上，获得痰液样本，在采样时应用力适度，注意擦拭咽喉后壁与两侧扁桃体。采样后迅速将样品放入1.0mL的生理盐水中充分摇匀，用于痰液相关炎性因子的检测。

采用酶联免疫吸附法(ELISA)法检测痰液相关免疫因子，包括：白细胞介素(interleukin，IL)-5、IL-8、IL-10、C反应蛋白(C-reactionprotein，CRP)、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor，TNF)-α，试剂盒由深圳子科生物科技有限公司生产。

1.3统计学方法

2结果

2.1两组T淋巴细胞亚群分析

实验组患儿CD3+、CD4+、CD8+和CD4+/CD8+指标均显著低于对照组小儿，经比较差异均有统计学意义(均P<0.05)，见表1。

表1 两组T淋巴细胞亚群指标比较结果Table 1 Comparison of T lymphocyte subsets

2.2两组红细胞免疫指标分析

实验组患儿的ATER、DTER、ETER、FEER、RBC·C3bRR均显著低于对照组小儿，实验组患儿FEIR和RBC·ICR显著高于对照组小儿，两组比较差异均有统计学意义(均P<0.05)，见表2。

表2 两组红细胞免疫指标比较结果Table 2 Comparison of red blood cell immune indexes between two

2.3两组痰液炎性因子分析

实验组患儿痰液中IL-5、IL-8、IL-10、CRP和TNF-α均显著高于对照组小儿，经比较差异均有统计学意义(均P<0.05)，见表3。

表3 两组炎性细胞因子比较结果Table 3 Comparison of inflammatory cytokines between two

3讨论

3.1儿童急性喉炎临床治疗的研究意义

随着抗生素的滥用和生态环境的改变，儿童健康受到严重威胁，其中急性呼吸道疾病是其中之一。有流行病学研究显示，5岁以下儿童急性上呼吸道感染的发病率高达20%[5]。在入院就医的儿童中，喉炎、支气管炎、扁桃体炎约占整体的15.8%[6]。儿童是祖国的未来，家庭的希望，疾病带来的不仅是身体上的伤害，还有巨大的经济负担和严重的心理负担。儿童急性喉炎的发病机制尚未完全明确，经过国内外儿科医学专家的长期探索发现：在病毒感染的基础上合并细菌感染是最清晰合理的一种途径[7]。由于小儿自身免疫力较成人低下，所以合并性感染极易导致患儿营养不良、变态反应体质，合并上呼吸道慢性病灶如化脓性扁桃体炎、慢性鼻炎、腺样体肥大、鼻分泌物增多等，最终诱发急性喉炎。小儿急性喉炎也可伴随一些急性传染病出现，常见的如：急性腮腺炎、水痘、荨麻疹、小儿猩红热等。小儿急性喉炎一般起病危急，具有白天缓解、夜间加重的特点，症状以喉痉挛为主，根据患儿自身条件不同，可表现为嘴唇发绀、情绪烦躁不安、面色虚弱苍白、犬吠样咳嗽等，因此在抢救患儿时要争分夺秒，及时确诊并实施正确有效的治疗手段至关重要。

3.2 T淋巴细胞亚群因子与免疫因子在小儿急性喉炎中的水平调节作用

本研究通过测定外周血中T细胞亚群反映患儿体内的T细胞免疫状态。CD3+代表总T细胞数，CD4+是辅助T细胞表面上的一种标记，CD8+是抑制性T细胞表面的一种标记，CD4+/CD8+则是反应免疫功能的指标[8-10]。ATER、DTER及ETER可反映患者体内红细胞免疫状态，FEER和FEIR则是一对反映红细胞黏附功能的指标。本研究结果显示：实验组CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+指标均显著低于对照组(均P<0.05)，ATER、DTER、ETER、FEER、RBC·C3bRR均显著低于对照组(均P<0.05)；FEIR和RBC·ICR显著高于对照组(均P<0.05)，说明小儿急性喉炎对其T细胞亚群免疫功能、红细胞免疫功能和红细胞黏附功能可产生巨大的影响。急性喉炎可降低患儿免疫功能，抑制红细胞免疫黏附功能。其原因可能是CD8+细胞水平降低时，细胞毒性因子水平降低，机体对抗原杀伤能力降低；CD4+作为辅助T细胞表面的抗体水平降低，说明T细胞在增殖、分化、提呈抗原、杀伤细胞的过程中辅助的细胞因子均降低，从而患儿机体免疫力降低；CD4+/CD8+比值也印证了患儿免疫力的确低于同年龄段健康儿童的免疫力。红细胞免疫抑制因子是一种存在于血清中的糖蛋白，在许多理化性质上与肿瘤免疫抑制因子具有相同的特征，因此利用肿瘤免疫因子反映红细胞免疫抑制因子水平具有合理性和可行性。红细胞免疫抑制主要抑制红细胞C3b受体的活性，具有赖氨酸的结合位点，可与补体受体(complement receptor，CR)结合，降低红细胞黏附携带免疫复合物(immune complex，IC)的能力，大量循环免疫复合物(circulating immune complexes，CIC)覆盖RBC·C3b受体空位，使C3b活性下降，且肿瘤疾病时RBC·C3b受体活性下降，肿瘤抗原-抗体复合物增多，致使RBC·C3bRR显著低下[11]，提示在治疗中，应该加强对患儿的免疫调节，增强其自身免疫功能。

3.3 IL-5和TNF-α等炎症因子在小儿急性喉炎中的水平调节作用

本研究通过测定小儿急性喉炎痰液中的IL-5、IL-8、IL-10、CRP、TNF-α浓度，反映患儿体内的炎症反应情况。IL-5可增加嗜酸性粒细胞数量和提高嗜碱性粒细胞活性，是炎症反应中重要的淋巴因子[12]；IL-8是一种淋巴因子，由成纤维细胞和T细胞产生，可加重炎症发应；IL-10可促进B细胞增殖与分化，在抗体生成过程中起着重要作用，可诱发炎症反应。CRP是机体受到微生物入侵或组织损伤等炎症性刺激时肝细胞合成的非特异性急性时相蛋白，可反映炎症组织的大小或活动性[13]。TNF-α主要是由巨噬细胞分泌的多肽调节因子，具有广泛的生物活性，与免疫炎症反应有着密切的关系[14]。本研究结果显示：实验组痰液中IL-5、IL-8、IL-10、CRP和TNF-α均显著高于对照组(均P<0.05)，说明急性喉炎可诱发患儿炎症反应，进一步加重患者症状。对患儿炎症因子的检测可以为小儿急性喉炎的早期诊断和预后提供依据，具有重大的诊断价值。但在治疗中，应找出病因，消除炎症，缓解患儿炎性反应症状。

综上所述，急性喉炎患儿的免疫功能较差，炎性反应严重，患儿体内T淋巴细胞亚群、红细胞免疫指标和痰液相关炎性分子表达水平均具有较高的诊断价值。

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[专业责任编辑：吴红艳]