Cervista HR-HPV检测 A9组阳性208例临床分析△
2018-03-20莫菊玲冯敏清肇丽杰胡路琴刘小燕
莫菊玲 冯敏清 肇丽杰 胡路琴 刘小燕
(广东省佛山市妇幼保健院 佛山 528200)
近年来，宫颈癌病因学领域的研究有了重大突破，明确了人乳头状瘤病毒(HPV)感染是引发妇女罹患宫颈癌的重要因素。HPV亚型、CIN级别与宫颈癌病变之间存在一定的关系，不同的HPV亚型对宫颈上皮细胞的感染能力不同，而且存在较大差异，其中HPV16和HPV18是引发宫颈癌及其癌前病变的发生率最高的病毒株。如何正确识别HPV的各种亚型，特别是各亚型感染与宫颈病变进展的关系，是及早发现、及时干预宫颈癌前病变、预防宫颈癌的最有效和最经济的手段。本文应用Cervista HPV检测技术分析A9组高危型感染与CIN级别的关系，旨在阐明Cervista HPV检测 A9组高危型HPV感染在宫颈癌前病变及宫颈癌筛查中的临床意义。
1 资料与方法
1.1 资料来源
选择2017年1月～2017年6月期间来我院妇科门诊就诊的细胞学检查≥ASCUS的患者，行阴道镜检查，且在阴道镜下定位活检，对经病理检验确诊为CIN的患者使用TCT检测，用同一剩余样本进行Cervista HR-HPV检测，共筛选出符合条件A9型组阳性患者208例，对上述患者进行临床分析。患者年龄范围20～65岁，平均年龄为(38.25±9.15)岁，其中CINⅠ为52例，CINⅡ为78例，CINⅢ为75例，浸润癌为3例。所有研究对象均有3年以上性生活史，无子宫切除和宫颈手术史。
1.2 方法
1.2.1TCT检测
应用新柏氏液基细胞学检测(TCT)技术(Hologic公司，美国)检测宫颈细胞，诊断结果根据国际癌症协会(NCI)推荐的TBS(2001)诊断系统分类标准进行分类，所有标本均由我院细胞病理科专业医师进行阅片并作出诊断。
1.2.2Cervista HPV检测
标本使用新柏氏液基细胞学检测剩余样本(Hologic公司)，所有Cervista HR-HPV检测均按照仪器生产商提供的说明书中的检测流程进行。使用Genfind DNA提取试剂盒(Hologic公司)从患者剩余的TCT宫颈样本中进行DNA样本提取，采用酶切信号放大技术来检测DNA的14种高危型HPV病毒，检测试剂中含有3组寡核苷酸探针混合物，分别为A5/A6组、A7组和A9组，3组探针共可检测出14种HPV病毒，A5/A6型组可识别51、56、66亚型，A7型组可识别18、39、45、59、68亚型，A9型组可识别16、31、33、52、58亚型。
1.2.3阴道镜检查及宫颈活检
由技术过硬、经验丰富的宫颈专科门诊医生进行阴道镜检查，在阴道镜指导下在病变部位或疑似病变部位取活检，如果阴道镜效果不好，则继续行宫颈管搔刮术，所有组织标本均由本院有经验的专业病理科医生进行阅片并作出诊断。
1.3 统计学处理
采用SPSS17.0软件进行统计学处理，计数资料以频数和百分率表示，组间比较采用χ2检验，P<0.05代表差异具有统计学意义。
2 结果
Cervista HPV A9型组阳性208例中年龄构成比：<30岁67例，占比32.21%；30～39岁68例，占比32.69%；40～49岁65例，占比31.25%；≥50岁10例，占比4.81%。年龄差距差异具有统计学意义(P<0.05)。49岁以内HPVA9型组感染率相近，差异无统计学意义(P>0.05)，而年龄大于50岁以上者HPV感染率明显下降。由此提示HPV感染率与年龄相关，年龄不同，妇女体内的雌激素水平、宫颈局部的免疫功能以及个人的性生活状况均不相同，因此HPV病毒的感染几率、清除速率与再次感染几率都不尽相同。
Cervista HPV A9型组阳性208例中各级别CIN在不同年龄段的分布情况：208例标本经活检病理确诊CINⅠ为52例，CINⅡ为78例,CINⅢ为75例，浸润癌为3例，随着年龄的增大，CINⅡ～Ⅲ及浸润癌的发生率亦随之增加，见表1。
表1 各级别CIN及浸润癌发生率在不同年龄段的分布情况
3 讨论
宫颈癌是妇科常见的、高发的恶性肿瘤之一，其发病率高居女性恶性肿瘤发病率的第2名，全球每年因宫颈癌致死的患者人数约有20余万[1]。有数据显示，2015年我国宫颈癌新发病人数为9.89万，其中死亡人数为3.05万[2]。而在发达国家宫颈癌的死亡率已经退出前10位，这主要得益于发达国家持续推进有组织的大规模宫颈癌筛查项目，且其宫颈癌筛查技术比较先进的[3]。而在我国，宫颈癌则居于女性生殖系统恶性肿瘤发病率与死亡率之首，且近年来显现出明显的年轻化、低龄化趋势。众多流行病学、分子生物学与基础医学研究已经证实高危型HPV持续感染是诱导宫颈癌发生的根本原因。因而，宫颈癌也是目前人类所患癌症中唯一能够明确病因的，这项发现对于宫颈癌的防治具有非常重要的意义[4]。从女性宫颈感染高危型HPV开始到宫颈癌前病变直至最终发展成为宫颈癌是一个漫长、渐变、反复的过程，通常需要经历8～10年时间，有的甚至更长时间。而HPV病毒并非是一种不可逆的生殖道感染[5]，在这个渐变的过程中，及时发现高危因素，及早明确诊断、正确治疗癌前病变，是阻止其发展为浸润癌、降低宫颈癌发生率和死亡率的重中之重。由于HPV DNA 检测具有高度的灵敏性和可靠性，因而可更加有效地排除低风险女性，近年来已被一些国家作为初筛手段纳入国家宫颈癌筛查体系中[6]。随着对HPV结构、性质及感染机制等基础研究的不断深入，各种更加简便、高效的HPV检测方法不断涌现。由于年轻女性是HPV感染的高危人群，因此，中国优生科学协会阴道镜和宫颈病理学分会(CSCCP)建议以高危HPV检测作为初筛用于30岁以上女性[7]。本文采用的DNA酶切放大技术检测高危型HPV是2009年获得美国国家食品药品监督管理局(FDA)批准的，Cervista HPV 检测系统是全新一代可区分不同高危型组、且拥有内部质控技术的高危型HPV检测方法，该方法基于DNA酶切放大技术(即invader技术)，一种用于检测特定核苷酸序列的信号放大技术定性检测14种HPV-DNA高危亚型，检测试剂中含有3组寡核苷酸探针混合物，分别为A5/A6组、A7组和A9组，3组探针共可检测出14种HPV病毒，A5/A6型组可识别51、56、66亚型，A7型组可识别18、39、45、59、68亚型，A9型组可识别16、31、33、52、58亚型。陈慧萍等[8]的研究显示A9型组高危型HPV感染占所有感染人群的45.00%，并且A9型组HPV感染患者在CIN中的阳性率随着病变程度的增加呈上升趋势，本文分析结果亦显示A9型组高危HPV感染发生宫颈病变(CIN2+或CIN3+)患者明显高于CIN1, 差异有统计学意义(P<0.05)。一项多中心临床研究表明：Cervista HPV 检测A9组对CIN2+十分灵敏且阴性预测值十分准确，分别达到87.97%和78.3%，可见其在宫颈癌筛查中意义重大。目前，HPV16和HPV18是引发宫颈癌及其癌前病变的发生率最高的病毒株，70%左右的宫颈癌发生都与HPV16、18型感染有关[9]。但由于种族和基因的差异，对于中国人来说HPV16,31,33亚型是与CIN2+的关系最为密切病毒。上海的一项大样本研究[10]显示，高危型HPV感染在CINⅡ、CINⅢ以及宫颈鳞癌中的发生率分别为74.9%、70.2%和83.3%，最常见的高危型HPV型是16、58和52型。广州金域诊断中心[11]以HPV分型检测共51345例(其中广东占55%)，结果亦显示最常见的高危型HPV感染依次为52、16、58亚型，50岁以上组则是以致病性最强的16亚型为最常见。本文10例高危型HPVA9型组感染中，全部为CIN2+，2例为浸润癌，与其结果相符。而A9组正好可识别16、31、33、52、58亚型。因此，临床中若以高危HPV作为初筛，如检出A9型组高危HPV阳性，应引起重视，做更进一步的随访和检查，包括TCT分流检测或阴道镜检查，以便及早发现高级别宫颈病变，并给于积极治疗，可提高发现宫颈癌并有效降低死亡率。
