藏药毛诃子水溶性化学成分研究＊

李 师，梁文仪，梁林金，叶 婷，简平，周 坤，张兰珍

（北京中医药大学中药学院 北京 102448）

藏药毛诃子(Terminalia billirica(Gaert.)Roxb.)为使君子科（Combretaceae）榄仁树属（Terminalia Linn.）植物，主产于南亚、东南亚，少量分布于我国西藏、云南等地[1-3]。其去核果实常作为一种藏族习用药材，具有清热解毒，收敛养血，调和诸药之功效，此外还具有抗癌、抗氧化、抗菌、抗惊厥、保肝，降胆固醇、降血糖、预防心肌坏死等多种药理活性[4-6]。传统藏医药中，毛诃子常与余甘子和诃子配伍，即合称为藏药大三果，用于治疗肝阳上亢、肺胃热盛等引起的“培根”、“赤巴”以及脾肺湿热导致的“黄水”病[7-9]，关于毛诃子的化学成分研究较少，目前仅报道了13个化合物的分离鉴定[10-15]。本文对毛诃子水溶性部位化学成分进行分离，为毛诃子的进一步开发利用提供参考。

1 仪器与材料

Varian NOVA-600 MHz核磁共振仪（美国Varian公司）；Diaion HP-20大孔树脂柱（日本三菱公司）；MCI gel CHP 20P树脂柱（日本三菱公司）；C18（ODS）色谱柱（日本三菱公司）；Sephadex LH-20凝胶柱（Pharmacia公司）；Toyopearl HW-40（Coarse）（日本Tosoh公司）；Toyopearl HW-40（Fine）（日本Tosoh公司）；聚酰胺薄层板（浙江黄岩四青生化材料厂）；萃取、分离及纯化所用有机试剂（分析纯）均为北京化工厂生产。

所用药材藏药毛诃子是于2016年4月在西藏采集，经北京中医药大学中药鉴定系刘春生教授鉴定为使君子科植物毗黎勒Terminalia billerica（Gaertn.）Roxb.干燥成熟去核果实，并在北京中医药大学植物标本室保藏了一份标本（编号：20160419）。

检识：聚酰胺薄层，显色剂：2%FeCl3乙醇溶液和FeCl3-K3[Fe(CN)6]水溶液

2 提取分离

干燥成熟去核的藏药毛诃子果肉10 kg，粉碎，过5目筛，70%丙酮10倍量温浸提取7天，温浸4次，合并提取液，40℃减压浓缩至无丙酮味，得藏药毛诃子药材总浓缩液，约5 L药液，相当于药材浓度2 g·mL-1。利用溶剂萃取系统，依次用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯萃取药材总浓缩液（每次萃取至有机层接近无色为止，便可更换下一种萃取溶剂），得到不同极性的萃取部位，40℃下再依次将各个部位减压浓缩，并真空干燥成固态，得到石油醚萃取部位、二氯甲烷萃取部位、乙酸乙酯萃取部位、水萃取部位。水萃取部位约200 g超声分散于适量水中，过滤，滤液上大孔吸附树脂Diaion HP-20柱，依次用10%、20%、30%、40%、50%、70%、95%EtOH进行梯度洗脱，聚酰胺薄层检识，2%FeCl3乙醇溶液和FeCl3-K3[Fe(CN)6]水溶液显色，40℃下减压回收溶剂至干，得到7个洗脱部分。30%EtOH（32.4 g）和50%EtOH（45.8 g）2个洗脱部分的干燥物分别超声分散于适量水溶液后，再各自通过ODS柱，并依次用不同浓度甲醇梯度洗脱，回收溶剂分别通过，MCI gel CHP 20P和Sephadex LH-20（甲醇）柱纯化后，行Toyopearl HW-40（Fine）反复纯化，得到化合物3（11.1 mg）。流份Fr.23行ODS柱，以H2O-MeOH梯度洗脱后，再经Sephadex LH-20（甲醇）柱和MCI gel CHP 20P树脂纯化，得到化合物1（6.2 mg）、化合物2（12.6 mg）、化合物4（9.3 mg）；流份Fr.25行MCI gel CHP 20P树脂柱，以H2O-MeOH梯度洗脱，再经Toyopearl HW-40（Fine）凝胶柱以H2O-MeOH梯度洗脱，得到化合物5（6.9 mg）；流份 Fr.27行 Toyopearl HW-40（Fine）凝胶柱，以H2OMeOH梯度洗脱，再经Sephadex LH-20（甲醇）柱和MCI gel CHP 20P树脂交替反复纯化，得到化合物6（5.7 mg）；化合物7（15.5 mg），化合物8（10.2 mg）化合物9（11.8 mg)、化合物10（9.6 mg）。

3 结构鉴定

化合物1：类白色无定形粉末（甲醇）；ESI-MS：m/z 633[M-H]-。1H-NMR（600 MHz，CD3OD）：δ 7.09（Galloyl，2H，s，H-2，H-6），δ 6.70（HHDP，1H，s，H-3′），δ 6.68（HHDP，1H，s，H-3），δ 4.98（1H，t，J=10.8，H-6b），δ 4.82（1H，s，H-3），δ 4.53（1H，m，H-5），δ 4.48（1H，t，J=1.5Hz，H-4），δ 4.18（1H，m，H-6a），δ 4.00（1H，d，J=1.8Hz，H-2）。13C-NMR（150MHz，CD3OD）：δ 95.02（Glc，C-1），δ 69.52（Glc，C-2），δ 71.72（Glc，C-3），δ 62.49（Glc，C-4），δ 76.23（Glc，C-5），δ 65.04（Glc，C-6），δ 120.63（Galloyl，C-1），δ110.93（Galloyl，C-2，C-6），δ 146.40（Galloyl，C-3，C-5），δ140.41（Galloyl，C-4），δ 166.69（Galloyl，C-7）；δ 125.47（HHDP，C-1），δ 116.73（HHDP，C-2），δ 108.31（HHDP，C-3），δ 137.70（HHDP，C-4），δ 145.64（HHDP，C-5），δ 145.23（HHDP，C-6），δ 170.12（HHDP，C-7），δ 125.48（HHDP，C-1′），δ 117.21（HHDP，C-2′），δ 110.13（HHDP，C-3′），δ 138.18（HHDP，C-4′），δ 146.05（HHDP，C-5′），δ 145.33（HHDP，C-6′），δ 168.53（HHDP，C-7′）。以上数据与文献[16-20]所报道基本一致，故推测该化合物为柯里拉京（Corilagin）。

化合物2：类白色无定形粉末（甲醇）；ESI-MS：m/z 309[M+Na]+。1H-NMR（600 MHz，D2O）：δ 7.16（1H，t，J=7.5Hz，H-4），δ 7.22（1H，d，J=8.4Hz，H-6），δ 7.38（1H，d，J=7.8Hz，H-5），δ 7.41（1H，t，J=7.2Hz，H-3），δ 4.73（1H，dd，J=12.6，11.4 Hz，H-7a），δ 5.12（1H，d，J=7.8 Hz，H-1′），δ 3.94（1H，d，J=12.6 Hz，H-6b′），δ 4.53（1H，m，H-7b），δ 3.75（1H，dd，J=6.0，12.6 Hz，H-6a′），δ 3.63（1H，m，H-4′），δ 3.51（1H，t，J=9.3Hz，H-2′）。13CNMR（150MHz，D2O）：δ 100.39（Glc，C-1′），δ 72.87（Glc，C-2′），δ 76.00（Glc，C-3′），δ 69.30（Glc，C-4′），δ 75.50（Glc，C-5′），δ 60.41（Glc，C-6′），δ 154.46（C-1），δ 129.29（C-2），δ 129.56（C-3），δ 123.24（C-4），δ 129.60（C-5），δ 115.19（C-6），δ 59.14（C-7）。以上数据与文献[21-23]所报道基本一致，推测该化合物为水杨苷（Salicoside）。

化合物3：无色针状结晶（甲醇）；ESI-MS：m/z 165[M+H]+。13C-NMR（150MHz，CD3OD）：δ 109.34（C-1），δ 82.63（C-2），δ 79.04（C-3），δ 84.76（C-4），δ 62.96（C-5），δ 60.57（-OCH3）。1H-NMR（600 MHz，CD3OD）：δ 3.59～4.00（m）。以上数据与文献[24]所报道基本相符，推测化合物分别为甲基-α-D-阿拉伯糖苷（Methyl-α-D-arabinofuranoside）。

化合物4：无色针状结晶（甲醇）。13C-NMR（150 MHz，CD3OD）：δ 101.63（C-1），δ 71.57（C-2），δ 69.39（C-3），δ 65.22（C-4），δ 71.11（C-5），δ 64.48（C-6），δ 73.95（1-OCH3），δ 63.03（4-OCH3）。1H-NMR（600 MHz，CD3OD）：δ 3.45～3.49（m）。以上数据与文献[25]所报道基本一致，推测该化合物为1，4-二甲基-β-D-吡喃果糖（1，4-dimethyl-β-D-fructopyranose。）

化合物5和化合物6：无色针状结晶（甲醇）；ESIMS：m/z 179[M-H]-。13C-NMR（150MHz，D2O）：δ 65.91（C-1），δ 99.17（C-2），δ 69.39（C-3），δ 71.83（C-4），δ 71.26（C-5），δ 64.54（C-6）；δ 64.81（C-1′），δ 105.30（C-2′），δ 78.67（C-3′），δ77.21（C-4'），δ 83.57（C-5′），δ 64.81（C-6′）。1H-NMR（600 MHz，D2O）：δ 3.25-4.00（m）。以上数据与文献[26]所报道基本相符，故本论文确定该化合物分别为β-吡喃果糖（β-fructopyranose）和β-呋喃果糖（β-fructofuranose）。

（注：在重水中，果糖以两种形式存在，相互转化，且吡喃型分布较多，约占75%，而呋喃型占20%左右。）

化合物7:类白色无定型粉末（甲醇）；ESI-MS：m/z 169[M-H]-。1H-NMR（600 MHz，CD3OD）：δ 7.07（2H，s，H-2，H-6）。13C-NMR（150 MHz，CD3OD）：δ 170.38（C=O），δ 121.94（C-1），δ 110.31（C-2，C-6），δ 146.37（C-3，C-5），δ 139.58（C-4）。以上数据与文献[27-28]所报道基本一致，推测该化合物为没食子酸（Gallic acid）。

化合物8:土黄色无定型粉末（甲醇）；ESI-MS：m/z 301[M-H]-。1H-NMR（600 MHz，Pyridine-d5）：δ 8.17（2H，s，H-5，H-5′）。13C-NMR（150MHz，Pyridine-d5）：δ 161.04（C=O，C-7，C-7′），δ 138.21（C-3，3′），δ 112.23（C-5，C-5′），δ 150.69（C-4，C-4′），δ 113.94（C-6，C-6′），δ 109.20（C-1，C-1′），δ 142.20（C-2，C-2′）。以上数据与文献[29-30]所报道基本一致，推测该化合物为鞣花酸（Ellagic acid）。

化合物9：棕黄色无定型粉末（甲醇）；FeCl3-K3[Fe(CN)6]溶液显蓝色斑点，推断该化合物含有酚羟基。ESI-MS：m/z 963[M+Na]+。 1H-NMR（400 MHz，DMSO-d5）：δ 6.35（1H，d，J=9.6 Hz，H-1），δ5.44（1H，t，J=9.6 Hz，H-2），δ 5.96（1H，t，J=9.6Hz，H-3），δ5.42（1H，t，J=9.6 Hz，H-4），δ 4.44（1H，m，H-5），δ4.36（1H，d，J=11.2 Hz，H-6a）和δ4.53（1H，dd，J=11.2，6.4 Hz，H-6b），分别为葡糖上的质子信号；此外δ7.00左右处有五个单峰，分别显示2个质子信号，为没食子酰基质子信号，δ 6.96（2H，s，H-2′，H-6′），δ 6.90（2H，s，H-2″，H-6″），δ 6.83（2H，s，H-2‴，H-6‴），δ 6.80（2H，s，H-2″″，H-6″″），δ 6.75（2H，s，H-2″‴，H-6″‴），为五没食子酰基取代葡糖苷。13C-NMR（100 MHz，DMSO-d5）：δ 91.17（C-1），δ 71.39（C-2），δ 71.40（C-3），δ 70.05（C-4），δ 71.60（C-5），δ 67.24（C-6）为一个β-D-葡萄糖苷的碳信号；在低场区 δ 163.42（C-7′），δ 163.94（C-7″），δ 164.98（C-7‴），δ 164.30（C-7″″），δ 164.91（C-7″‴）分别为五个酰基碳信号，且有五组对称的苯环上碳信号，即δ 116.84（C-1′）、δ 108.20（C-2′，C-6′）、δ 144.87（C-3′，C-5′）、δ 138.25（C-4′）、δ 117.41（C-1″）、δ 108.22（C-2″，C-6″）、δ 144.95（C-3″，C-5″）、δ 138.40（C-4″）、δ 117.54（C-1‴）、δ 108.27（C-2‴，C-6‴）、δ 144.99（C-3‴，C-5‴）、δ 138.60（C-4‴）、δ 117.57（C-1″″）、δ 108.37（C-2″″，C-6″″）、δ 145.05（C-3″″，C-5″″）、δ 138.63（C-4″″）以及 δ 118.37（C-1″‴）、δ 108.50（C-2‴″，C-6‴″）、δ 145.17（C-3″‴，C-5″‴）、δ 139.12（C-4‴″），经与文献对照[31-33]，推测化合物9为1，2，3，4，6-五-O-没食子酰基-β-D-葡萄糖吡喃苷。

化合物10：类白色无定形粉末（甲醇）；FeCl3-K3[Fe(CN)6]溶液显蓝色斑点，推断该化合物含有酚羟基。ESI-MS m/z 953[M-H]-。1H-NMR（600 MHz，CD3OD）：δ 6.52（1H，s，H-1）；δ 5.41（1H，brs，H-2），δ 5.06（1H，brs，H-3），δ 5.24（1H，brs，H-4），δ 4.87（1H，t，J=9.0 Hz，H-5），δ 4.82（1H，dd，J=10.8，9.0 Hz，H-6a）和 δ 4.44（1H，d，J=10.8 Hz，H-6b）分别为糖上的质子信号；在δ 7.09处，显示有一个没食子酰基双质子信号，Galloyl，2H，s，H-2，6）；δ6.86，δ 6.66 有2个单质子信号，为一个HHDP结构的两个氢。其余质子信号为诃子酰基上的质子信号，即δ7.50（1H，s，ChebubylH-3″），δ 4.91（1H，d，J=6.0 Hz，ChebubylH-2′），δ 5.06（1H，d，J=6.0 Hz，ChebubylH-3′），δ 3.83（1H，m，ChebubylH-4'），δ 2.12（2H，m，ChebubylH-5′）。 13C-NMR（150MHz，CD3OD）：δ 92.20（C-1），δ 70.78（C-2），δ 66.46（C-3），δ 66.67（C-4），δ 73.95（C-5），δ 62.09（C-6）为一个β-D-葡萄糖苷的碳信号；δ 119.76（Galloyl，C-1），δ 110.57（Galloyl，C-2，C-6），δ 145.01（Galloyl，C-3，C-5），δ 140.05（Galloyl，C-4），δ 165.92（Galloyl，C-7）为没食子酰基上的碳信号；δ 115.65（HHDP，C-1），δ 124.49（HHDP，C-2），δ 107.87（HHDP，C-3），δ 145.21（HHDP，C-4），δ 137.24（HHDP，C-5），δ 145.28（HHDP，C-6），δ 166.06（HHDP，C-7）和δ 115.90（HHDP，C-1′），δ 125.53（HHDP，C-2′），δ 110.11（HHDP，C-3′），δ 146.82（HHDP，C-4′），δ 140.52（HHDP，C-5′），δ 146.22（HHDP，C-6'），δ 167.15（HHDP，C-7′）为 HHPD 结构上的碳信号；δ 169.78（Chebubyl，C-1′），δ 64.68（ Chebubyl，C-2′），δ 41.41（Chebubyl，C-3′），δ 39.67（Chebubyl，C-4′），δ 30.15（Chebubyl，C-5′），δ 170.41（Chebubyl，C-6′），δ 174.07（Chebubyl，C-7'），δ 167.15（Chebubyl，C-8'），δ 117.29（Chebubyl，C-1″），δ 118.70（Chebubyl，C-2″），δ 117.31（Chebubyl，C-3″），δ 147.06（Chebubyl，C-4″），δ 138.33（Chebubyl，C-5″），δ 140.08（Chebubyl，C-6″）为诃子酰基上的碳信号。以上数据与文献[34-35]所报道基本一致，推测该化合物为诃黎勒酸。

4 小结

本研究从毛诃子水萃取部位中分离得到了鞣质类、酚酸类及糖类成分，其中柯里拉京（1）、水杨苷（2）、甲基-α-阿拉伯糖苷（3）、1，4-二甲基-β-D-吡喃果糖（4）、β-吡喃果糖（5）和 β-呋喃果糖（6）1，2，3，4，6-五-O-没食子酰基-β-D-葡萄糖吡喃苷（9）和诃黎勒酸（10）为首次从毛诃子中分离得到，化合物2-6为首次从榄仁树属植物中分离得到。