胃肠胰腺神经内分泌肿瘤中血管表皮生长因子的表达与淋巴结转移的关系及意义

乐 静 赵 涛 刘爱林

胃肠胰神经内分泌肿瘤(gastroenteropancreafic neuroendocrine neoplasm,GEP-NEN)发病率由1973年的1.09/10万增长到2004年的5.25/10万，患病率在消化系恶性肿瘤中占第2位，仅次于大肠癌[1-2]。诊断时多数为转移性晚期NENs，在治疗方式上，主要有手术、药物、介入、靶向等[3]。血管表皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)作为一种能诱导受体酪氨酸激酶Flt4细胞内酪氨酸残基磷酸化的因子，于1996 年被分离纯化[4]。在成人某些组织中，检测发现VEGF 是淋巴管内皮细胞标记物，参与了淋巴管的发育过程[5]。本研究通过检测胃肠胰腺NENs中VEGF、淋巴管密度(LVD)水平的变化，分析其与淋巴结转移的关系。

1 材料与方法

1.1 一般资料

选取2015年1月至2016年1月在我院住院通过病理诊断为GEP-NEN的60例患者作为试验研究对象，男性30例、女性30例，年龄30～70岁，平均年龄(52.5±4.8)岁，包括淋巴结转移患者38例、淋巴结未转移患者22例。淋巴结是否转移患者在性别、年龄等方面无明显差异(P>0.05)，具有可比性。

1.2 实验试剂及器材

VEGF ELISA试剂盒，VEGF封闭液+一抗，兔抗鼠免疫组化二抗试剂盒(北京中杉金桥生物技术有限公司)；离心机(上海飞鸽)；显微镜(日本Olympus)；酶标仪(英国TECNA)；脱水机(日本TIYODA)；切片机(德国Leica)；计算机图像分析系统(美国惠普)。

1.3 免疫组织化学法检测组织中VEGF、淋巴管密度(LVD)的表达

福尔马林固定、脱水、透明；包埋、切片；热修复；过氧化氢阻断；正常山羊血清封闭；加一抗(浓度1∶100)50 μl静置1 h；加二抗(浓度1∶100)50 μl 静置10 min；显色、终止；复染、分化；封片。

1.4 判断标准

VEGF阳性结果判定以细胞核不染色，胞膜或胞质出现棕黄色颗粒为阳性，染色细胞数阴性(-)：≤10%；弱阳性(+)：10%～25%；阳性(++)：26%～50%；强阳性(+++)：>50%。

LVD的判定及计数：在肿瘤区域内，未成腔但内皮细胞胞质含棕黄色颗粒或者已成腔但内皮细胞呈单层形态不规则均为淋巴管。

1.5 数据处理

采用SPSS 17.0统计学软件进行数据处理，以(均数±标准差)表示，计数资料用χ2检验，计量资料用t检验，多因素用Logistic回归模型，P<0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 入组GEP-NEN患者VEGF表达及与淋巴结转移的关系

对入组GEP-NEN患者VEGF的表达进行检测，结果发现，淋巴结转移组VEGF阳性率为55.26%(21/38)，淋巴结未转移组VEGF阳性率为13.64%(3/22)，差异有统计学意义(χ2=4.789,P=0.035)。

2.2 入组GEP-NEN患者LVD的表达及与淋巴结转移的关系

对入组GEP-NEN患者LVD的表达及与淋巴结转移的关系进行分析，结果发现，淋巴结转移组的LVD均值达(0.83±0.14)，较淋巴结未转移组(0.23±0.11)明显升高，差异有统计学意义(t=6.163,P=0.038)。

2.3 入组GEP-NEN患者VEGF表达与LVD的关系

对入组GEP-NEN患者VEGF表达与LVD的关系进行分析，结果发现，VEGF阳性表达者的LVD为(1.33±0.15)，较VEGF阴性者的(0.43±0.11)显著升高，差异有统计学意义(t=7.987,P=0.022)；VEGF的表达与LVD呈正相关(γ=0.36,P=0.012)。

3 讨论

胃肠NET源于胃肠道组织，胰腺NET源于胰岛细胞[6]，患者可出现包括疼痛、恶心、呕吐、贫血等一系列非特异症状[7]。VEGF参与了胚胎时期淋巴管的形成及发育过程，并在机体处于病理状态调节淋巴管的生成，能够增加淋巴管壁的通透性，促进新生淋巴管的形成，促进恶性肿瘤淋巴转移的发生[8]。在本研究中，选取GEP-NEN患者，检测其VEGF的表达，分析其与患者淋巴结转移的关系。

在本研究中，首先对入组的GEP-NEN患者是否出现淋巴结转移分为2组，淋巴结转移组出现VEGF阳性20例，占55.26%；淋巴结未转移组VEGF阳性4例，占13.64%。进一步对入组GEP-NEN患者的LVD进行检测，结果发现，出现淋巴结转移的GEP-NEN患者其LVD均值较未出现淋巴结转移的患者明显升高。这提示，对于出现淋巴结转移的GEP-NEN患者，其VEGF表达阳性率显著升高，LVD值明显升高。VEGF在机体多种不同类型的恶性肿瘤均有表达，如肺癌、胃癌、结肠癌等，在这其中，VEGF-C由于能够特异性地作用于淋巴管内皮细胞，又称之为淋巴管内皮细胞生长因子[9]。既往曾有研究发现，VEGF与恶性肿瘤发生淋巴结转移，以及新生淋巴管的生成过程关系密切[10]。

本研究分析VEGF表达与LVD的关系发现，对于VEGF阳性表达的GEP-NEN患者，其LVD均值较VEGF阴性表达的GEP-NEN患者显著升高，VEGF的表达与LVD呈正相关。VEGF-C结合其特异性的受体，促进酪氨酸激酶发生磷酸化，激活细胞信号传导通路，促进淋巴管内皮细胞的分化、增殖、迁移，抑制细胞发生凋亡，刺激新生淋巴管的形成。

综上所述，对于出现淋巴结转移的胃肠胰腺神经内分泌肿瘤患者，其VEGF表达阳性率升高，LVD值明显升高，VEGF的表达与LVD呈正相关。二者之间的具体作用机制仍需进一步基础研究证实，但VEGF可能成为判断胃肠胰腺神经内分泌肿瘤预后的新指标。

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