枸杞多糖对II型糖尿病大鼠非酒精性脂肪肝的干预作用*

王爱青，何 媛

(1.洛阳市食品药品检验所，河南 洛阳 471023； 2.郑州大学，河南 郑州 450001)

糖尿病是非酒精性脂肪肝发生的独立危险因素。II型糖尿病患者糖、脂代谢紊乱，血液中游离脂肪酸含量增加，从而引起肝脏内三酰甘油增多，造成肝脏代谢紊乱，形成非酒精性脂肪肝。临床研究[1-3]表明：Ⅱ型糖尿病与肝脏脂代谢紊乱有密切关系，糖尿病患者中非酒精性脂肪肝的患病率近半。因此，寻找治疗Ⅱ型糖尿病患者非酒精性脂肪肝具有重要的临床意义。枸杞是茄科植物，花紫、果红，其果实枸杞子是我国传统的名贵中药材，具有滋肾补髓、养肝明目的功效。现代医学认为其可以调节机体免疫力、抑制肿瘤生长和细胞突变、延缓衰老及抗脂肪肝等药理作用[4]。枸杞多糖作为枸杞子的主要活性成分之一，具有增强免疫力、抗癌、抗衰老、保护视神经、防止细胞凋亡等作用[5]。本实验研究了枸杞多糖对II型糖尿病大鼠非酒精性脂肪肝的干预作用，以期为临床用药提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 动 物

6周龄纯系雄性Wistar 大鼠58只，体质量140～160 g，清洁级，购自河南省实验动物中心，许可证号：SCXK(豫)2016-0024。

1.2 药品、试剂与仪器

枸杞子，购自安徽省亳州市药材总公司中药公司。枸杞多糖，自制，方法如下：精密称取枸杞3 000 g，料液比1∶35，温度90 ℃，pH值 11，浸提3 h，提取2次，合并提取液，加3倍体积 950 mL/L乙醇沉淀6 h时，Sevage 法和DATE-纤维素法纯化，浓缩干燥，检测纯度为68.6%。使用时以无菌生理盐水配置为混悬液。链脲佐菌素(STZ)，美国Sigma公司产品，批号 8008193473；总胆固醇(TC)试剂盒，深圳市宝安康生物技术有限公司产品，批号170402；3 g/L 胆酸钠及胆固醇,郑州利伟生物实业有限公司产品，批号170504。5424R型低温高速离心机，德国艾本德股份公司产品；UV-1600型紫外可见分光光度计，上海美谱达仪器有限公司产品；INFORS 全自动生化分析仪，北京桑翌实验仪器研究所产品。

1.3 动物分组、模型的建立与给药

随机选出10只大鼠为正常对照组，给予常规饲料喂养；其余48只大鼠给予高脂饲料喂养，4周后，给药STZ(35 μg/g)一次性腹腔注射，3 d后测空腹血糖。以空腹血糖值>11.1 mmol/L确定为II型糖尿病模型[6]。将造模成功的大鼠随机分为模型对照组、枸杞多糖高剂量组、枸杞多糖中剂量组与枸杞多糖低剂量组，每组10只，并持续给予高脂饲料至实验结束。枸杞多糖高、中、低剂量组分别给予枸杞多糖混悬液300，150，75 μg/g灌胃，正常对照组和模型对照组给予等体积生理盐水，1 d 2次，持续14周。每周称量体质量1次，并随体质量调整给药剂量。

1.4 检测指标

灌胃结束后的第2天称量大鼠体质量，空腹于尾静脉取血；摘除肝脏并称量质量，计算肝重指数；制作肝脏病理切片，光镜下进行组织病理学观察。采用全自动生化分析仪测定血清丙氨酸转移酶(ALT)、天冬氨酸转移酶(AST)、血清三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、空腹血糖(FBG)及游离脂肪酸(FFA)。

1.5 统计学方法

2 结 果

2.1 各组大鼠体质量、肝湿重与肝重指数对比

与模型对照组对比，枸杞多糖中剂量组、高剂量组大鼠体质量升高，枸杞多糖各剂量组大鼠肝湿重与肝重指数降低，差别有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。见表1。

组 别动物数体质量/g肝湿重/g肝重指数/%正常对照组10508．7±16．4∗∗25．8±1．97∗∗5．01±0．32∗∗模型对照组10376．4±17．831．2±2．03 7．94±0．33枸杞多糖低剂量组10387．4±16．928．97±2．08∗ 5．94±0．25∗∗枸杞多糖中剂量组10413．8±17．3∗∗26．39±2．13∗∗ 5．67±0．29∗∗枸杞多糖高剂量组10432．9±16．5∗∗25．6±2．17∗∗5．32±0．35∗∗

注：与模型对照组对比，*P<0.05，**P<0.01

2.2 各组大鼠FBG、FFA、ALT、AST、TG和TC水平对比

与模型对照组对比，枸杞多糖各剂量组大鼠FBG、FFA、ALT、AST、TG水平下降，枸杞多糖中剂量组、高剂量组大鼠TC水平下降，差别有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。见表2。

组 别FBG/(mmol·L-1)FFA/(mmol·L-1)ALT/(U·L-1)AST/(U·L-1)TG/(mmol·L-1)TC/(mmol·L-1)正常对照组4．54±0．68∗∗1．10±0．21∗∗50．16±4．29∗∗178．35±9．56∗∗1．08±0．05∗∗1．67±0．20∗∗模型对照组26．32±2．213．64±0．28171．20±9．56301．26±8．322．16±0．114．20±0．21枸杞多糖低剂量组15．34±3．61∗∗2．13±0．49∗∗131．66±7．43∗∗241．98±7．48∗∗1．74±0．16∗∗4．12±0．16枸杞多糖中剂量组12．88±2．69∗∗1．98±0．52∗∗123．66±7．95∗∗234．73±7．15∗∗1．46±0．11∗∗3．92±0．14∗∗枸杞多糖高剂量组9．32±2．36∗∗1．69±0．21∗∗98．78±7．69∗∗193．58±6．23∗∗1．25±0．14∗∗3．81±0．17∗∗

注：与模型对照组对比，*P<0.05，**P<0.01

2.3 各组大鼠肝脏组织病理变化

正常对照组:肝小叶结构正常，肝细胞形态饱满，大小均匀一致，肝细胞分界清析并以中央静脉为中心向四周呈放射状整齐排列。模型对照组：肝小叶结构明显紊乱，肝细胞索模糊，肝窦消失，肝细胞高度气球样变，呈现以大泡性为主的脂肪性变化，为重度脂肪肝改变。枸杞多糖各剂量组大鼠肝细胞索模糊，肝窦狭窄，肝细胞内脂滴减少，以大、小泡性混杂，为中度脂肪肝改变。见图1。

A.正常对照组；B.模型对照组； C.枸杞多糖高剂量组； D.枸杞多糖中剂量组； E.枸杞多糖低剂量组图1 各组大鼠肝脏组织病理学变化(HE染色，×200)

3 讨 论

糖、脂代谢紊乱在Ⅱ型糖尿病非酒精性脂肪肝的发生、发展中发挥着重要作用，但因治疗时程较长，严重影响着患者的生活质量和健康状况[7]。枸杞子的药理和保健作用与枸杞多糖的含量有很大关系。枸杞多糖是枸杞子中重要的活性成分之一，具有抗氧化、抗衰老、提高免疫力、抗肿瘤、保肝、降血压、降血糖、降血脂等多种功能，且无任何毒副作用[5]。马艺鑫等[8]研究揭示：枸杞多糖对由于雌激素降低而引起的脂代谢紊乱有改善作用；但针对其对II型糖尿病大鼠非酒精性脂肪肝的干预作用研究较少。因此，枸杞多糖降糖作用的相关机制有待进一步研究。

本实验参考相关文献[9]，通过高脂饮食与小剂量STZ建立了II型糖尿病非酒精性脂肪肝的大鼠模型，与正常对照组对比，模型对照组大鼠体质量降低，肝重指数升高，且ALT、AST、TG、TC、FBG和FFA水平均有所升高，且差别有统计学意义(P<0.01)。枸杞多糖高、中、低剂量组大鼠经灌胃枸杞多糖混悬液14周，体质量升高，肝功能好转，血糖、血脂水平降低；肝细胞病理组织学表现改善。结果表明：枸杞多糖可改善肝脏脂质代谢，减缓大鼠II型糖尿病非酒精性脂肪肝的病变，但其机制有待进一步研究。

[1]郑欢,洪士聪,余杰,等.贞清方对2型糖尿病大鼠非酒精性脂肪肝病变及肝脏盐诱导激酶1表达的影响[J].中国中西医结合杂志,2014,34(7):846-851.

[2]张珊,张洁,傅力,等.2型糖尿病患者血清脂联素与肝脏脂肪含量的相关性研究[J].国际内分泌代谢杂志,2017,37(3):155-158.

[3]李卫东,傅坤发,连燕舒,等.成人非酒精性脂肪肝与2型糖尿病发病关系的前瞻性队列研究[J].中国全科医学,2015,18 (28):3426-3429.

[4]任奕.枸杞多糖提取纯化工艺研究进展[J].农业科技与装备,2015,257(11):47-48.

[5]张芳,郭盛,钱大玮,等.枸杞多糖的提取纯化与分子结构研究进展及产业化开发现状与前景分析[J].中草药,2017,48(3):424-431.

[6]何方平.非酒精性脂肪性肝病的治疗:欧洲肥胖-2型糖尿病-消化临床实践指南解读[J].中华肝脏病杂志,2017,25(2):119-121.

[7]刘如.2型糖尿病合并脂肪肝的相关因素分析[J].糖尿病新世界,2016,19(3):57-58.

[8]马艺鑫,宋囡,贾连群,等.枸杞多糖改善去卵巢大鼠脂质代谢紊乱的作用研究[J].时珍国医国药,2017,28(4):774-777.

[9]朱红霞,邓晓龙,高静,等.利拉鲁肽对糖尿病合并脂肪肝大鼠的脂代谢相关基因表达的影响[J].中国临床研究,2017,30(1):7-10.