胃泌素释放肽在脑胶质瘤中的表达与临床意义

赵 波 赵 萍 关新明

胶质瘤(glioma)是中枢神经系统最常见的肿瘤，起源于神经外胚层细胞，约占人类脑肿瘤的40%～60%，具有广泛的侵袭性及低级别向高级别转化的趋势，手术中全切比较困难，术后复发率高，预后差，病人生存期短，死亡率高，治疗困难，是1种严重影响人类健康的疾病[1-2]。胃泌素释放肽(gastrin releasing peptide,GRP)作为1种新的肿瘤标志物正逐渐应用于临床[3]。本研究通过检测脑胶质瘤患者GRP的表达水平变化，分析其临床意义。

1 材料与方法

1.1 一般资料

选取2015年1月至2016年1月在我院住院的胶质瘤患者60例作为试验研究对象，男性30例，女性30例，年龄30～70岁，平均年龄(52.5±4.8)岁，包括Ⅰ级12例，Ⅱ级18例，Ⅲ级19例，Ⅳ级11例；同时取入组患者距离肿瘤组织5 mm处的瘤旁组织60例。正常对照组30例，包括男性15例，女性15例，年龄31～70岁，平均年龄(54.2±4.5)岁，均取自于颅脑损伤患者术中内减压而切除的额、颞叶脑组织。所有入组患者术前均未接受过放疗、化疗、免疫等抗肿瘤治疗，均经显微手术全切除肿瘤。患者在性别、年龄等方面无明显差异(P<0.05)，具有可比性。

1.2 试剂及器材

GRP ELISA试剂盒，GRP封闭液加一抗，兔抗鼠免疫组化二抗试剂盒(北京中杉金桥生物技术有限公司)；离心机(上海飞鸽)；显微镜(日本Olympus)；酶标仪(英国TECNA)；脱水机(日本TIYODA)；切片机(德国Leica)；计算机图像分析系统(美国惠普)。

1.3 观察指标及检测方法

1.3.1 ELISA法检测入组患者血液中GRP含量 入组患者于术前、术后及预后过程中抽取空腹静脉血，1 500 r/min离心10 min后吸取上清，保存于低温冰箱中。计算板孔数；试剂盒常温放置30 min；标准品稀释；每个浓度均设5个复孔，加样；配液；洗涤；显色；终止；酶标仪以450 nm的波长处测量吸光值；绘制线性回归方程，计算样品浓度。

1.3.2 IHC法检测组织中GRP的表达 福尔马林液固定、脱水、透明；包埋、切片；热修复；过氧化氢阻断；正常山羊血清封闭；加一抗(浓度1∶100)50 μl静置1 h；加二抗(浓度1∶100)50 μl 静置10 min；显色、终止；复染、分化；封片。

1.3.3 判断标准 GRP阳性结果判定：细胞核不染色，胞膜或胞质出现棕黄色颗粒为阳性。阳性细胞数≤10%为阴性(-)；11%～25%为弱阳性(+)；26%～50%为阳性(++)；>50%为强阳性(+++)。

1.4 统计学分析

2 结果

2.1 ELISA法检测入组患者血清中GRP含量

胶质瘤组术前GRP含量为(1.25±0.14) ng/ml，均较正常对照组升高，差异有统计学意义(P<0.05)；胶质瘤组术后及预后期间GRP水平均较术前下降，差异有统计学意义(P<0.05)；具体结果见表1。

表1 ELISA法检测入组患者血液中GRP含量

注：*为与正常对照组比较，P<0.05；#为与术前比较，P<0.05。

2.2 免疫组织化学法检测入组患者脑组织中GRP的表达

胶质瘤组中14例GRP强阳性表达，30例阳性表达，阳性率为73.3%，均较瘤旁组织、正常对照组升高，差异有统计学意义(P<0.05)；且瘤旁组织GRP阳性表达率较正常对照组升高，差异有统计学意义(P<0.05)，具体结果见表2。

表2 IHC法检测入组患者脑组织中P53、VEGF表达情况/例

注：*为与瘤旁组织比较，P<0.05；#为与正常对照组比较，P<0.05。

2.3 胶质瘤组GRP表达水平与其临床病理特征的关系

GRP表达水平与胶质瘤病理类型、WHO分级、远处转移、生存时间有关(P<0.05)，与年龄、性别、PS评分无关(P>0.05)；对于胶质母细胞瘤、分级为Ⅳ级者、出现远处转移、生存时间≤5年的胶质瘤患者，GRP表达升高，具体结果见表3。

表3 GRP表达水平与胶质瘤临床病理特征的关系/(例，%)

3 讨论

胶质瘤是颅内最常见的恶性肿瘤，其成人发病率约为6/10万，5年生存率约为20%～30%，具有高发病率、高复发率、高死亡率、低治愈率的特点[4]。胶质瘤预后差的主要原因在于胶质瘤大多数呈浸润性生长，与周围脑组织边界不清，手术难以全部切除，术后易复发，尽管采取了放疗或化疗等综合治疗措施，目前为止疗效仍不够理想[5]。GRP最早在1978年由McDonald等从猪的胃组织中分离出来的，具有促胃泌素分泌的作用，是有效的促分泌素或调节肽，由27个氨基酸组成，普遍存在于非胃窦组织、神经纤维脑、肺组织的神经内分泌细胞中，通过自分泌、异常分泌、神经内分泌等方式作用于特异性的受体GRPR[6]。在本研究中，检测胶质瘤患者CRP的表达变化，分析其临床意义。

在本研究中，抽取入组患者外周静脉血检测血清GRP含量，胶质瘤组患者于术前的血清GRP水平高于正常对照组，而在术后、预后期间CRP水平较术前有所下降，但仍高于正常对照组。进一步检测入组患者脑组织中GRP的表达，胶质瘤组患者的瘤组织中GRP阳性率显著高于瘤旁组织、正常对照组，且瘤旁组织中GRP阳性表达率较正常对照组升高。这表明，在胶质瘤患者的血清及脑组织中均存在GRP的表达水平升高。Flores对正常人脑组织和人脑胶质瘤组织进行研究发现，正常人脑组织神经胶质细胞中未检测到GRP的特异性受体GRPR表达，GRPR在人脑胶质瘤组织中的阳性表达率为100%[7]。在肿瘤组织中，两者结合后通过影响信号转导途径刺激肿瘤的发生、增殖、血管形成及侵袭、转移[8]。

本研究进一步对入组胶质瘤患者GRP的表达水平与性别、年龄、PS评分、病理类型、WHO分级、远处转移、生存时间等临床病理特征进行比较，GRP表达水平与胶质瘤的病理类型、WHO分级、远处转移、生存时间有关，与年龄、性别、PS评分无关；对于胶质母细胞瘤、分级为Ⅳ级、出现远处转移、生存时间≤5年的胶质瘤患者，GRP的表达水平明显升高。有实验指出，胶质瘤组织GRP呈现高表达，随着胶质瘤恶性分级的增加，其表达强度也随之增加。GRP通过GRPR发挥作用，除促进生长、调节胃肠运动和激素分泌外，也参与调节昼夜节律、记忆、焦虑、恐惧反应、并与炎症、类风湿性关节炎、退行性病变、神经精神性疾病、肿瘤相关[9]。GRP可能为与其特异性受体体GRPR结合，启动相应的信号转导途径，刺激某些原癌基因的转录、翻译，抑制瘤细胞凋亡，促进癌细胞增殖、新生血管生成、浸润、转移的发生，最终导致肿瘤的生长、侵袭、转移[10]。

综上所述，在胶质瘤患者血清及组织中均存在GRP的高度表达，与胶质瘤的病理类型、WHO分级、远处转移、生存时间有关，对于胶质母细胞瘤、分级为Ⅳ级、出现远处转移、生存时间≤5年的胶质瘤患者，GRP的表达水平明显升高。GRP涉及肿瘤发生发展的各个步骤，以GRP为靶点的靶向免疫治疗、靶向化疗、靶向分子生物治疗都是有效的抗肿瘤手段。研究者们可进一步深入探索，以GRP为靶点的各种抗肿瘤治疗有望在临床中得到应用。

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