迟发型阿尔茨海默病患者脑脊液神经丝轻链蛋白含量测定的meta分析

管细红 黄文娟 鄢 茵 董永海

阿尔茨海默病(Alzheimer′s disease,AD)是一种进行性发展的神经系统退行性疾病，临床中常以记忆障碍、人格及行为改变等痴呆表现为基本特征，65岁以后发病的称之为迟发性AD。目前该病的病因未明，曾有研究报道AD与脑脊液中神经丝蛋白含量有一定联系，尤其是与其中的轻链蛋白(neurofilament light，NFL)关系密切[1-3]。然而既往研究结论参差不齐[4-11]。通过文献搜索发现，目前国内外尚无脑脊液中NFL水平与迟发性AD关系的系统评价，因此本研究拟采用meta分析的方法，综述NFL对迟发性AD的影响，以期为进一步研究AD的危险因素及提出相应的防治策略提供参考依据。

材料与方法

1.文献筛选标准

(1)纳入标准：①病例-对照研究；②AD的病例诊断标准依据精神疾病诊断与统计手册或美国国立神经病语言障碍卒中研究所AD及相关疾病协会标准；③研究对象年龄大于65岁；④研究中报告了病例组和对照组的样本量、均数、标准差或者可以通过报告数据进行相互转换可计算效应值的数据；⑤语种限于中文和英文；⑥文献发表时间截止至2017年1月。

(2)排除标准：①重复发表文献或者来源于同一个样本；②动物实验；③数据不全。

2.文献筛选策略

电子检索PubMed、EMBase、中国知网、维普数据库、万方数据库中有关迟发性AD脑脊液中NFL含量的病例对照研究。中文检索词为：阿尔茨海默病/老年性痴呆，神经丝轻链蛋白，病例对照研究；英文检索词为：neurofilamentlight/NFL，Alzheimer/AD/dementia，case-control study。

3.文献筛选与资料提取

由本课题组的两位研究人员依据既定的文献纳入和排除标准独立筛选文献并提取数据资料。文献提取基本信息包括第一作者姓名、发表时间、研究地区、病例组和对照组的样本量以及脑脊液中NFL的均数和标准差等。

4.质量评价方法

应用观察性研究偏倚风险评估工具Newcastle-Ottawa Scale(NOS)量表进行三方面的质量评价：研究人群的选择、组间可比性、暴露因素的测量。若NOS得分为1～3分，则文献质量评为低质量；4～6分为中等质量；7～9分为高质量。

5.统计分析

应用Stata 12.0进行统计分析，效应统计量为标准化均数差(SMD)。若经异质性检验分析，P>0.10认为各研究间无异质性；P≤0.10，各研究间存在异质性。异质性的大小用统计量I2判定：≤25%为低异质性， 25%～75%为中异质性，>75%为高异质性。若异质性较小，采用固定效应模型进行meta分析；若异质性较大，则采用随机效应模型。发表偏倚的评估采用Egger′s回归检验。采用敏感性分析(单个研究逐一排除后重新计算效应量大小)评估结果的稳定性。

结 果

1.纳入文献的基本情况

依据既定的文献检索策略，共筛选出435篇电子文献，通过进一步的排出不符合纳入标准的文献后，最终共有8篇文献纳入meta分析中。文献检索流程见图1。

筛选出的8篇文献，发表时间跨度为1999-2016年，同时发现其中的7篇来源于瑞典地区[4-6,8-11]，1篇来源于荷兰[7]，其他国家的研究并未发现。共纳入研究对象1905人，其中迟发型AD患者1468人，对照437人。

图1 文献检索流程图

2.纳入文献的质量

通过运用NOS量表进行文献质量评价，表1显示2篇文献得6分[8,11]，2篇得7分[4,6]，4篇得8分[5,7,9-10]。总体来看，纳入的文献质量为中至高质量。

3.脑脊液中NFL水平与迟发型AD关系的meta分析

meta分析结果显示，各研究间存在异质性(P<0.001)；I2=98.2%。采用随机效应模型进行统计量的合并，结果显示SMD=2.49，95%CI=1.13～3.85。森林图见图2。

4.发表偏倚评价

Egger′S回归图显示(图3)，截距穿过0点，同时检验结果显示t=1.98，P=0.095>0.05；均提示无发表偏倚。

表1 纳入研究文献的基本资料

*：NA：不详。

图2 脑脊液中NFL水平与迟发型AD关系的森林图

图3 脑脊液中NFL水平与迟发型AD关系的Egger′s回归图

5.敏感性分析

逐一剔除单个文献后合并其余研究的效应量，然后与总的效应量进行比较，结果显示本研究的稳健性较好(图4)。

图4 脑脊液中NFL水平与迟发型AD关系的敏感性分析图

讨 论

AD是痴呆中最常见的一种类型，预计2030年我国将有1603 万人患 AD[12-13]。随着对AD临床研究的不断深入，各种生物标志物逐渐被发现，脑脊液中的NFL就是近几年新兴的一种生物标志物。

既往有关迟发型AD患者脑脊液NFL水平的研究由于各个研究样本量比较小，研究对象特征不一等多方面的限制，研究结论不尽相同。本研究运用meta分析的方法尽可能地合并同质研究，结果显示迟发型AD患者脑脊液中的NFL水平高于正常对照组(SMD=2.49,95%CI=1.13～3.85)，差异有统计学意义，提示脑脊液中较高水平的NFL可能是迟发型AD发病的一个危险因素。目前脑脊液NFL虽然尚未广泛用于临床诊断，但此研究结果将对AD辅助诊断具有重要意义。

在纳入的8篇文献研究中，7篇来自瑞典，说明瑞典地区对AD疾病NFL生物标志物的研究关注度较高，而在其他国家尚未引起重视。Jong[7]以荷兰某医院的76～90岁迟发型AD患者为研究对象，发现AD患者脑脊液中NFL含量仅为15.2pg/mL，并且发现与对照组相比无统计学差异。而在瑞典地区的7个研究中AD患者脑脊液的含量范围348～1995pg/mL，并且与对照组比较均有统计学差异。可见在迟发型AD患者中脑脊液含量水平变化范围比较大，其原因可能与AD患病进程有关[5]。

本研究存在几个不足之处：①由于病例对照研究在因果推论上的自身局限性，后期仍需要前瞻性的队列研究进一步证实研究结论；②由于样本量较少，因此得出结果的可靠性仍需今后大样本量的研究进行验证； ③纳入的研究主要来于瑞典地区，本研究结果在其他国家是否能得到相同的结论尚需多中心的研究证实。

[1] Mattsson N,Insel PS,Palmqvist S,et al.Cerebrospinal fluid tau,neurogranin,and neurofilament light in Alzheimer′s disease.EMBO Mol Med,2016,8(10):1184-1196.

[2] Landqvist WM,Frizell SA,Passant U,et al.Cerebrospinal fluid neurofilament light chain protein levels in subtypes of frontotemporal dementia.BMC Neurol,2013,13:54.

[3] Skillback T,Zetterberg H,Blennow K,et al.Cerebrospinal fluid biomarkers for Alzheimer disease and subcortical axonal damage in 5,542 clinical samples.Alzheimers Res Ther,2013,5(5):47.

[4] Zetterberg H,Skillback T,Mattsson N,et al.Association of Cerebrospinal Fluid Neurofilament Light Concentration With Alzheimer Disease Progression.JAMA Neurol,2016,73(1):60-67.

[5] Skillback T,Farahmand B,Bartlett JW,et al.CSF neurofilament light differs in neurodegenerative diseases and predicts severity and survival.Neurology,2014,83(21):1945-1953.

[6] Hall S,Hrfelt A,Constantinescu R,et al.Accuracy of a panel of 5 cerebrospinal fluid biomarkers in the differential diagnosis of patients with dementia and/or parkinsonian disorders.Arch Neurol-Chicago,2012,69(11):1445.

[7] de Jong D,Jansen RW,Pijnenburg YA,et al.CSF neurofilament proteins in the differential diagnosis of dementia.J Neurol Neurosurg Psychiatry,2007,78(9):936-938.

[8] Norgren N,Rosengren L,Stigbrand T.Elevated neurofilament levels in neurological diseases.Brain Res,2003,987(1):25-31.

[9] Andreasen N,Gottfries J,Vanmechelen E,et al.Evaluation of CSF biomarkers for axonal and neuronal degeneration,gliosis,and beta-amyloid metabolism in Alzheimer′s disease.J Neurol Neurosurg Psychiatry,2001,71(4):557-558.

[10]Sj Gren M,Rosengren L,Minthon L,et al.Cytoskeleton proteins in CSF distinguish frontotemporal dementia from AD.Neurology,2000,54(10):1960.

[11]Rosengren LE,Karlsson JE,Sjogren M,et al.Neurofilament protein levels in CSF are increased in dementia.Neurology,1999,52(5):1090-1093.

[12]Querfurth HW,Laferla FM.Alzheimer′s disease.N Engl J Med,2010,362(4):329-344.

[13]孙倩倩，王晓成，孔盼盼，等.基于Markov模型的中国阿尔茨海默病患病趋势测.中国卫生统计，2015，32(1)：61-65.