贮藏期及贮藏温度对低温制粒颗粒料霉变的影响

金娉婷 张明花 曹美花 张秀海 赵善仓 盛清凯

摘要：为促进发酵饲料的应用，研究贮藏期（1、8、16、24 d）和贮藏温度（低温0～4℃、中温16～20℃和高温30～34℃）对猪用发酵饲料低温制粒颗粒料自由基、pH值、淀粉酶、霉菌及黄曲霉毒素等指标的影响。制粒温度48℃，颗粒料水分含量为12.27%，用呼吸膜塑料袋厌氧贮藏。试验结果表明，贮藏期对过氧化氢、霉菌和黄曲霉毒素的含量及过氧化氢酶、淀粉酶活性无显著影响（P>0.05）;贮藏温度对丙二醛含量、过氧化氢酶和淀粉酶活性及pH值有显著影响（P<0.05），对霉菌和黄曲霉毒素含量无影响（P>0.05）。高温下贮藏24 d时霉菌和黄曲霉毒素的含量与贮藏1 d时无差别（P>0.05）。结果显示发酵饲料低温制粒颗粒料尽量避免高温贮藏，高温下贮藏期可以达到24 d。

关键词：低温制粒颗粒料;贮藏期;贮藏温度;自由基;霉变

中图分类号：S816.8文献标识号：A文章编号：1001-4942（2018）12-0123-04

发酵饲料具有改善饲料适口性、促进猪生长、降低猪粪臭味、改善肉品质的良好效果[1，2]，但发酵饲料为湿料，水分含量达到50%，饲喂时难以运输，无法大规模应用，其瓶颈因素为目前大规模猪场的饲料自动运输系统为干颗粒料运输系统。如果发酵饲料高温制粒，理论上可以应用于大规模猪场，但高温制粒耗能多，且破坏益生菌、生物酶、维生素等热敏物质[3]。如果发酵饲料低温制粒，则在保留其中益生菌、酶、维生素等物质活性的前提下，便于大规模猪场的应用。但低温制粒的颗粒料水分含量高，容易变质，如何贮藏成为难题。饲料变质为自由基紊乱[4]、菌群改变[5]的结果，霉变过程受贮藏温度、贮藏期等外界条件的影响[6]。确定适宜的贮藏参数，有助于低温制粒颗粒料的广泛使用。目前关于饲料低温制粒颗粒料贮藏期的资料缺乏。盛清凯等报道高温下水分含量为27.53%的全株青绿玉米低温制粒颗粒料贮藏期不超过8 d[7]。一般高温制粒颗粒料的水分含量低于8%，其贮藏期可以超过6个月。水分含量居于10%至20%之间低温制粒颗粒料的贮藏期未见报道。为此，本试验研究贮藏期及贮藏温度对发酵饲料低水分含量低温制粒颗粒料自由基、酶、霉菌及霉菌毒素等指标的影响，为发酵饲料应用提供参考。

1 材料与方法

1.1 试验材料

全价饲料低温制粒颗粒料：将乳酸菌厌氧发酵成功的全价饲料湿粉料与全价饲料干粉料按一定比例混匀后[8]，输送入平模颗粒制粒机中，48℃低温制粒。将制备好的颗粒料装入呼吸膜塑料袋中贮存待测。低温制粒颗粒料的初始水分含量为12.27%。

1.2 试验设计

采用两因素试验设计，两因素分别为贮藏环境温度与贮藏期。环境温度为低温（0～4℃）、中温（16～20℃）和高温（30～34℃），贮藏期分别为1、8、16、24 d。将样品根据试验设计分为三组，分别存放于低温、中温和高温环境中，每组10袋，每袋2 kg。试验开始日上午8时起至次日上午8时为第一天，其余类推。每次上午8时取样100 g，然后立即将呼吸膜塑料袋封闭并挤压排出空气;将所取样品快速溶于质量比10%的蒸馏水中，3 000 r/min离心5 min后取上清液进行分析。

1.3 检测指标及方法

过氧化氢、丙二醛、过氧化氢酶、淀粉酶试剂盒由南京建成生物工程研究所生产。黄曲霉、霉菌毒素酶联免疫检测试剂盒购自上海优甘生物公司。呼吸膜塑料袋由沃进公司提供。霉菌采用平板计数法。

1.4 数据处理

采用SAS（V9.2）软件对所有数据进行处理，采用TWO-WAY ANNOVA进行方差分析，采用Student-Newmnan-Keuls法进行多重比较。数据以平均值表示。

2 结果与分析

2.1 贮藏期及贮藏温度对颗粒料自由基的影响

表1显示，贮藏期和贮藏温度对过氧化氢含量皆无显著影响（P>0.05），皆对丙二醛含量影响显著（P<0.05）。贮藏第1、8、16、24 d，高温处理丙二醛含量皆显著高于低温（P<0.05）。建议颗粒料贮藏时尽量避免高温。

2.2 贮藏期及贮藏温度对颗粒料自由基清除剂的影响

表2显示，贮藏期对过氧化氢酶活性无显著影响（P>0.05），贮藏温度对过氧化氢酶活性影响显著（P<0.05）。贮藏期和贮藏温度对过氧化物酶活性的影响同过氧化氢酶。对于过氧化氢酶，贮藏第1、8、16、24 d高温处理的活性皆显著高于低温处理（P<0.05）。对于过氧化物酶，贮藏第1 d高温处理的活性与低温处理无显著差异（P>0.05），第8、16、24 d皆显著低于低温（P<0.05）。

2.3 贮藏期及贮藏温度对颗粒料pH值和淀粉酶活性的影响

表3显示，贮藏期和贮藏温度对pH值皆有极显著影响（P<0.01）;贮藏期对淀粉酶活性无显著影响（P>0.05），而贮藏温度对淀粉酶活性影响显著（P<0.05）。贮藏第1、8、16、24 d，高温处理的pH[JP3]值皆显著高于低温处理（P<0.01）。贮藏第1 d高温处理的淀粉酶活性显著高于低温，而第8、16、24 d皆显著低于低温处理（P<0.05）。

2.4 贮藏期及贮藏温度对颗粒料霉菌和黄曲霉毒素的影响

表4显示，贮藏期和貯藏温度对霉菌和黄曲霉毒素皆无显著影响（P>0.05），表明高温下颗粒料贮藏期可以达到24 d。

3 讨论与结论

由于低温制粒的颗粒料初水分含量仍超过10%，远高于干颗粒料的8%，因此如何贮藏发酵饲料低温制粒颗粒料成为制约大规模猪场广泛应用的关键问题之一。

目前未見贮藏期对低温制粒颗粒料自由基影响的报道。本试验贮藏期对颗粒料自由基及霉菌无显著影响的结果与贮藏期影响发酵饲料质量的结果[1]不同，差异原因在于本试验颗粒料为呼吸膜塑料袋中厌氧贮存，而发酵饲料为有氧贮存。本试验贮藏期对颗粒料霉菌无显著影响，其可能原因为：其一，全价饲料厌氧发酵后碳水化合物降解，产生乳酸等有机酸，有机酸抑制了霉菌、大肠杆菌等的生长[9，10]，从而延长贮藏期;其二，呼吸膜塑料袋有助于饲料的厌氧发酵[11]，使饲料维持在厌氧的酸性环境中。

目前国内外未见贮藏温度对低温制粒颗粒料自由基及霉菌影响的报道。本试验中贮藏温度对颗粒料丙二醛含量、过氧化物酶活性等有显著影响，表明贮藏温度影响自由基的代谢，这与食品类的相关研究结果一致[12，13]。本试验贮藏温度对霉菌和黄曲霉毒素无显著影响的结果与食品类的一些研究结果不同[14，15]，原因可能主要在于厌氧发酵与有氧发酵的方式不同。本试验中随着贮藏温度的变化，自由基代谢发生改变，而霉菌、黄曲霉毒素没有改变，这与自由基紊乱导致食物变质的结论[16，17]并不矛盾。其中一个可能原因为本试验自由基代谢虽然发生变化，原有的自由基产生与清除之间的平衡被打破，但自由基尚未过量产生。尽管自由基能够攻击细胞膜、线粒体等，但本试验条件下自由基尚未导致饲料的变质。本试验自由基尚未泛滥的原因可能在于贮藏期短或贮藏温度不高。Mannaa等[18]报道高温有助于霉菌的生长和霉菌毒素的产生，低温作用相反。Mondal等[19]报道高温增加了过氧化氢等自由基的活性，缩短了贮藏期。更高的贮藏温度及更长的贮藏期对于低温制粒颗粒料自由基代谢及微生物活性的影响有待进一步研究。

本试验高温下贮藏期24 d的结果与盛清凯等[7]的结果不同，原因在于水分含量不同。目前未见低温制粒颗粒料中水分含量对贮藏期影响的报道。从本试验结果、盛清凯试验结果[7]以及高温制粒颗粒料可以长期贮藏的常识判断，降低水分含量或许可以延长低温制粒颗粒料的贮藏期，这有待进一步试验验证。

本试验结果表明，贮藏温度影响低温制粒颗粒料自由基的产生与清除以及饲料品质。高温下全价饲料低温制粒颗粒在呼吸膜塑料袋中贮藏期可以达到24 d，低温下可能更长。

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