高危型人乳头瘤病毒在宫颈组织学和细胞学检查中感染情况的临床研究

(太原市妇幼保健院，山西 太原 030012)

宫颈癌是我国女性最常见的恶性肿瘤之一，有研究报道持续地感染人乳头瘤病毒(human papillomavirus，HPV)是引起宫颈癌的重要因素，宫颈癌的发生似乎与HPV流行有关，2013年美国国立综合癌症网络(NCCN)公布的《宫颈癌筛查临床实验指南》也将HPV联合细胞学检查作为30～65岁女性宫颈癌的筛查手段[1]。本研究将经利普液基细胞学和组织学检测确诊的患者伴HR-HPV感染情况进行分析，为患者病情预测提供科学依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2014年1月～2016年6月太原市妇幼保健院收治的宫颈不同程度病变的患者431例，年龄18～78岁；其中CIN(cervical intraepithelial neoplasia，CIN)Ⅰ级217例、Ⅱ级146例、Ⅲ级58例，鳞状细胞癌(squamous carcinoma of the cervix, SCC)10例。患者及其家属均知情同意本研究。纳入标准：阴道镜下宫颈活检确诊并且能够配合利普液基细胞学检查(LPT)检测及二代杂交捕获试验(Hybrid Capture Ⅱ, HCⅡ)检测者；排除既往有阴道手术史、习惯性流产史及精神疾病者。

1.2 方法

1.2.1 利普液基细胞学检查(liquid-based cytology，LPT) a)标本采集:先用无菌干棉球轻擦宫颈表面黏液，将采样刷插入宫颈管内约1 cm，顺时针旋转数圈，取下刷头放入Liqui-PREP液基保存液备检。b)制片步骤:将Liqui-PREP清洁液4 mL加入已混匀的标本内再缓慢地加于离心管中离心10 min，弃上清、沥干，加入适量细胞基液(大概为细胞团体积3～4倍)，混匀，取50μL细胞悬液，在清洁的载玻片上均匀涂片，自然干燥、95%乙醇固定-巴氏染色-封片。c)细胞学诊断:细胞学分类方法采用Bethesda 2001报告系统，宫颈病变的范围包括：良性细胞改变及宫颈上皮内病变，后者根据程度可分为：非典型鳞状上皮细胞，包括：无上皮内病变或恶性病变(NILM)，意义不明确的非典型鳞状上皮细胞(ASC-US)及不能排除高度上皮的非典型鳞状上皮细胞(ASC-H)，低度鳞状上皮内病变(LSIL)，高度鳞状上皮内病变(HSIL)。

1.2.2 HPV-DNA-HCⅡ检测 应用第二代杂交捕获试验(HCⅡ)技术进行HR-HPV定性及半定量检测，具体方法参照WHO制定的人乳头状瘤病毒感染及病毒载量检测方法说明书。a)取样：由妇产科医生将宫颈管专用刷置入宫颈口，刷缘紧贴宫颈，旋转3圈，然后将细胞刷置于标本存储液中送检。根据美国Digene公司研制的HPV-DNA-HCⅡ 检测方法，对标本进行13种高危型HPV(16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68)检测。b)结果判定：荧光读数与阴性测定值比值(RLU/CO)≥1.0为阳性，比值(RLU/CO)<1.0 为阴性。

1.2.3 宫颈组织活检 阴道镜下进行醋酸试验和碘试验，对宫颈可疑病变多点取活检。本研究根据病理检查，筛选宫颈上皮内瘤变、鳞状细胞癌患者的结果。

1.3 统计学方法

采用SPSS 20.0统计软件处理数据。计数资料以%表示，组间比较采用χ2检验，P<0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 不同级别宫颈病变患者的HR-HPV检测阳性率

CINⅠ级、Ⅱ级、Ⅲ级、宫颈鳞癌患者HR-HPV的阳性率随着宫颈病变级别的增加而升高，差异具有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 组织学检查不同程度宫颈病变患者的HR-HPV感染阳性率比较[n(%)]

2.2 利普液基细胞学检查中不同程度细胞学异常患者的HR-HPV检测阳性率

NILM、ASC-US、LSIL、ASC-H、HSIL各组的HR-HPV 阳性率随细胞学异常的级别增加而逐渐升高，差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 利普液基细胞学检查不同级别患者的HR-HPV感染阳性率比较[n(%)]

3 讨论

随着宫颈癌的深入研究，更多的流行病学资料和分子生物学证据表明高危型HPV持续性感染是导致宫颈癌前病变和宫颈癌发生的重要条件[2]，本文采用HC-Ⅱ技术法对HR-HPV进行检测，具有较高灵敏度与特异度，研究结果也验证了通过HR-HPV检测来评价宫颈癌风险性是可靠的，初筛HR-HPV阳性后的分流可筛查出需要提前干预的风险人群，所以HR-HPV检测在宫颈癌前病变与癌变筛查中具有重要意义。由此，在临床工作中是否进行HPV检测、何时检查以及对于HPV感染者的进一步处理都值得临床工作者进一步探讨。2013年美国阴道镜检查和宫颈病理学会(ASCCP)公布的2012年宫颈癌筛查和癌前病变全球共识指南》[3]指出对21～29岁女性推荐常规筛查，不推荐进行HPV检测；对于30岁以上妇女，HPV检测增加了筛查的安全性与可靠性。今后将进一步对患者进行分层研究，对高风险人群跟踪随访，必要时二次HPV检测，避免HPV一过性感染者的过度治疗以及确诊需要进一步治疗的病患，提高宫颈癌筛查的规范性。

随着宫颈细胞学筛查的无创性和检测敏感性强等优势被临床普遍使用，日渐成为宫颈癌筛查的重要手段之一。液基细胞学方法检测已被美国病理学会推荐使用，本研究与大多数的临床研究报告结果相符，本研究中选取细胞学诊断的NILM、ASC-US、LSIL、ASC-H、HSIL各组HR-HPV感染阳性率随着细胞学异常程度增加，HR-HPV的感染阳性率也随之增加[4]。电子阴道镜作为宫颈癌的辅助检查手段，同样有着显著的敏感性，并能够明确定位和有效降低漏诊率，对病理组织学诊断有极大的辅助作用。本研究中显示经阴道镜宫颈多点活检组织中CINⅠ级、Ⅱ级、Ⅲ级、SCC等不同级别宫颈病变患者的HR-HPV检测阳性率，显示HR-HPV感染阳性率随宫颈病变级别的升高而逐渐上升的趋势，其中HR-HPV感染伴随着宫颈病变的增加而增加，反映宫颈癌的发生发展过程。

综上所述，早期通过液基细胞学检测联合高危型HPV检测可以明显的提高宫颈癌的检出率，通过宫颈活检组织学方法明确诊断、判断病变程度、预测疾病发展，在一定程度降低宫颈癌的发病率和死亡率。