猪瘟病毒的四种检测方法比较

(汕头市动物卫生监督所, 广东 汕头 515041)

1 猪瘟及四种检测方法

猪瘟是一种危害性较大的禽畜疾病，一般是因为猪瘟病毒而引发，当前世界动物卫生组织将猪瘟列于A类疫病，同时也是当前我国要重点防控的动物疫病之一。但是因为猪瘟病毒的毒株不同而且毒株的毒性程度不同，所以在临床的表现以及剖检的病理上，也存在着区别。因此对于猪瘟及猪瘟病毒要采用合理的检测方式进行具体的检测，实现科学合理的猪瘟病症确诊，开展合理有效的防控措施。目前针对猪瘟开展的检测方法主要有4种：①对病毒进行分离的鉴定处理，这种也就是将病毒放置于细胞上进行增殖处理后，借助荧光抗体方式在这些细胞培养物上面进行病毒的检测。②荧光抗体法，借助猪瘟病毒本身的特异性情况，通过荧光抗体法在组织器官里面进行病毒的检测。③酶联免疫吸附试验，在猪组织及血液里进行猪瘟病毒粒子的检测。④反转录聚合酶链式反应,对病料里面的病毒核酸进行检测。

2 猪瘟4种检测方法对比分析

2.1 猪瘟病毒分离鉴定处理

依照常规的方法进行PK-15细胞的培养处理，并且细胞培养液是MEM的培养基。之后，从猪的脾脏里面提取一小块组织剪碎以后放置到乳钵里面进行研磨的处理，并且在里面掺入了5倍体积的PBS内容将其制成乳液，之后加入离心管里面进行离心处理10 min，然后对其上清及滤膜除菌处理之后，获取到无菌浸出液。并且在盖玻片以及荧光抗体染色处理之后，等待自然干燥以后对其进行培育和冲洗处理，将其封装以后放置于显微镜之下进行观察，如果细胞里面呈现亮绿色的荧光斑，则属于阳性病毒，而如果没有这些光斑，那么就属于阴性的病毒。

2.2 猪瘟病毒荧光抗体检测

把无菌采取出来的感染猪瘟病毒的淋巴结以及脾脏等组织，采用消毒过的剪刀进行剪取处理，从而提取出一小块的组织将其放置于无划痕的载玻片上面进行触压处理，在室温环境下等待干燥之后进行多抗和冲洗及封装处理，并且在显微镜下进行观察，呈现光斑则为阳，没有光斑则为阴性。

2.3 猪瘟病毒的酶联免疫吸附试验

这种检测方法主要是将组织里面的细胞提取液进行化学处理之后，在一定的反应条件之下，将这些产物稀释出来的物品进行配对及循环分析，而且在72℃条件下，进行10 min的延伸处理，之后将其产物取出来，在琼脂糖凝胶里面进行电泳处理，并借助这种凝胶成像的结果进行具体的病毒情况分析。

2.4 反转录聚合酶链式反应

采取猪瘟病毒的阳性及阴性还有疑似的病料3 g，将其剪碎之后进行研磨处理，并且加入样品稀释液充分地进行涡旋混匀处理并放置于室温环境下1 h，对其进行孵育之后将其再进行清洗处理，室温孵育10 min之后对其进行终止反应处理，从而借助反应物的波长测定,将其与对照样品进行对比分析，从而对病毒进行确定。

3 结果分析

上面提到的4种猪瘟检测方法，综合对比有以下表现：第1种方法一般不常用，因为检测的时间较长，而且需要的内容较多，而猪瘟病毒的荧光抗体检测一般是对于病料组织里面的猪瘟病毒进行检测，而且检测的时间比较短，结果也比较直观，因此在实验室里面比较常见。在具体检测上对于特异性检测容易出现偏差，例如假阳性的情况，还有触片的厚薄以及漂洗的具体时间等都会对结果产生影响。而采用猪瘟病毒的酶联免疫吸附试验进行检测的时候，因为猪瘟病毒在这些组织材料里面含量不高，因此在具体检测的时候能够有效实现低含量猪瘟病毒检测，同时又能精确检测其特异性情况。最后一种检测方法，在实际检测方面有高效而且敏感的优点，并且不大容易受到人为因素的影响，因此其检测的结果更加精确。