HPLC法测定蒲公英颗粒中咖啡酸、阿魏酸的含量

张俊伟,张 斌,唐枞贵,杨 莹,谢丽娜,董树国

(吉林医药学院药学院,吉林 吉林 132013)

蒲公英颗粒是由蒲公英加辅料蔗糖制成的颗粒剂，具有清热解毒的功能，常用于治疗上呼吸道感染、急性扁桃腺炎、乳腺炎、疖肿等。蒲公英中含有黄酮、皂苷、有机酸等多种活性成分[1-2]，其中的一些重要有机酸成分如咖啡酸和绿原酸具有抑菌作用，阿魏酸具有抗菌消炎、抗病毒、抗氧化的作用[3-4]。因此建立蒲公英颗粒中的咖啡酸与阿魏酸的含量测定方法对于确保药物的安全性和有效性、提高药物质量是十分重要的。目前，蒲公英颗粒中酚酸的测定主要集中于咖啡酸与绿原酸[5-6]，本实验利用高效液相色谱同时测定蒲公英颗粒中咖啡酸和阿魏酸的含量，为建立快速准确测定蒲公英颗粒中的咖啡酸与阿魏酸提供依据。

1 仪器与试药

LC-20AT高效液相色谱仪器(日本岛津公司,包括LC-20AT溶剂输送泵、SPD-20A紫外-可见检测器、N2000在线色谱工作站)。

咖啡酸对照品批号为C10058305,阿魏酸对照品批号为C100577473；蒲公英颗粒(购自吉林市吉林大药房)。

2 方法与结果

2.1 供试品溶液的制备

取蒲公英颗粒样品1袋，研细，精密称取粉末1 g，置于50 mL锥形瓶中加入pH=2.3的甲醇-磷酸溶液20 mL，摇匀，称定质量，超声处理30 min，放冷，再称定质量，以pH=2.3甲醇-磷酸溶液补足减失的质量，离心15 min后取上清液，滤过置于容量瓶中即得供试溶液。

2.2 色谱条件

色谱柱：C18色谱柱(150 mm×4.6 mm 5 μm)，流动相:甲醇-磷酸盐缓冲液(25∶75，pH 2.3)，检测波长323 nm，进样量20 μL，流动相流速0.8 mL/min。

2.3阴性干扰实验

按照参考文献[6]配制阴性干扰样品，在方法2.2的实验条件下进行分析，并与咖啡酸、阿魏酸、供试样品的色谱图比较，在阴性对照品溶液的色谱图上未见咖啡酸与阿魏酸的色谱峰，表明样品中的其他成分对测定没有干扰。

2.4 线性关系考察

分别精密量取浓度为0.10 g/L的咖啡酸标准溶液2、4、6、8、10 mL，置于10 mL容量瓶中，以甲醇稀释至刻度，摇匀，即得浓度为0.02、0.04、0.06、0.08、0.10 g/L的咖啡酸标准溶液。分别精密量取0.1 g/L的阿魏酸标准溶液1、3、5、7、9 mL，置于10 mL容量瓶中，以甲醇稀释至刻度，摇匀，即得浓度为0.01、0.03、0.05、0.07、0.09 g/L的阿魏酸溶液，按上述色谱条件进样分别对咖啡酸、阿魏酸标准溶液进样。以峰面积为纵坐标，进样浓度为横坐标，得到咖啡酸和阿魏酸的线性回归方程为

咖啡酸：Y=373X+3.2,R=0.999 7

阿魏酸:Y=272.1X+0.072,R=0.999 5

实验结果表明咖啡酸在0.02～0.10 g/L围内与峰面积呈良好的线性关系，阿魏酸在0.01～0.09 g/L围内与峰面积呈良好的线性关系。

2.5 精密度实验

分别精密吸取咖啡酸、阿魏酸对照品溶液，在2.2的色谱条件下，连续重复进样6次，根据咖啡酸，阿魏酸色谱峰的峰面积评价精密度，咖啡酸的峰面积的RSD为0.44%、阿魏酸的RSD为0.47%(n=6)。结果表明该方法测定蒲公英颗粒中咖啡酸、阿魏酸的精密度较好。

2.6 稳定性实验

取同一供试品溶液，按照0、1、2、3、4、5 h间隔进样，在2.2的色谱条件下进行分析，测得咖啡酸的峰面积的RSD为1.77%，阿魏酸的峰面积的RSD为1.91%，结果表明供试品溶液在5 h之内基本稳定。

2.7 重复性实验

精密称取同一批的蒲公英颗粒样品5份，按照2.2的实验条件进行分析，利用峰面积考察方法的重复性，咖啡酸的含量的RSD为0.45%,阿魏酸的含量的RSD为0.676%，结果说明使用该方法测定蒲公英颗粒中咖啡酸、阿魏酸的重现性良好。

2.8 加样回收率

取蒲公英颗粒样品批号为6份，按照低、中、高浓度分别准确加入咖啡酸与阿魏酸标准品，进行加样回收实验，结果咖啡酸平均回收率99.26%,RSD为1.74%;阿魏酸平均回收率98.34%,RSD为0.99%,因此所建立的高效液相测定蒲公英颗粒方法的在回收率上符合测定要求。

2.9 样品的测定

取3个不同批次样品利用所选择的色谱条件进行测定，每个样品测定6次，样品中咖啡酸的含量分别为0.123、0.134、0.129 mg/g，RSD分别为1.21%、1.45%、1.09%；阿魏酸的含量分别为0.085、0.786、0.824mg/g，RSD分别为1.32%、1.67%、1.04%。

3 讨 论

本实验以甲醇-磷酸盐缓冲液(25∶75，pH 2.3)作为流动相进行对蒲公英颗粒中的咖啡酸与阿魏酸含量进行测定，在所确定的实验条下，所建立的蒲公英颗粒中咖啡酸、阿魏酸的高效液相色谱分析方法具有较好的精密度、稳定性、重现性。咖啡酸的平均回收率为99.26%，RSD为1.74%；阿魏酸的平均回收率为98.34%，RSD为0.99%。高效液相色谱法适用于蒲公英颗粒中咖啡酸与阿魏酸的含量测定。

[1] 屠国昌.蒲公英化学成分、药理作用和临床应用[J].海峡医药，2012，24(5)：33-35.

[2] 刘华清，王天麟.蒲公英水溶性化学成分研究[J].中药材,2014，37(6)：989-991.

[3] 路保通，张鸯，胡新安，等.蒲公英有效成分提取及其抑菌活性作用[J].中国兽医杂志,2008，44(5)：45-56.

[4] 侯京玲，周霄楠，赵兴全，等.几种蒲公英成分的提取及体外抑菌效果试验[J].中国兽医杂志,2016,52(12):53-55.

[5] 张宇靖.HPLC法测定蒲公英颗粒中咖啡酸的含量[J].中国医药指南,2012,10(22):114-115.

[6] 柯薇.HPLC法测定蒲公英颗粒中咖啡酸含量[J].中国当代医药,2009,16(9):5-6.