地龙的采收加工、炮制和质量标准的研究进展

2018-02-12熊颂强钟凌云宋嬿张玉莲陈风晨

江西中医药大学学报 2018年1期

★ 熊颂强钟凌云宋嬿张玉莲陈风晨

(1.江西中医药大学南昌330004；2.上海上药华宇药业有限公司上海 200002)

地龙(又名蚯蚓)为钜蚓科动物参环毛蚓Pheretimaaspergilium(E.Perrier)、通俗环毛蚓PheretimavulgarisChen、威廉环毛蚓Pheretimaguillelmi(Michaelsen)或栉盲环毛蚓PheretimapectiniferaMichalsen的干燥体。地龙性寒，味咸，能清热定惊，通络，平喘，利尿；具有降血压、止咳、镇静解热、抗癌、增强免疫功能等作用；临床上用于高热神昏、癫痫、皮肤病、肺热喘咳、烧伤烫伤、支气管哮喘、高血压等症[1]。目前，地龙在临床上的应用的得到了广大研究者的认可，继续对地龙作为药品的开发和研究能够获取巨大的经济价值，并造福全人类。

地龙的采收加工及炮制直接影响地龙饮片的质量，而地龙饮片质量的好坏，直接影响到临床中医用药的安全，所以为了临床用药安全建立地龙的采收加工和炮制的标准研究是重要且必要的。目前，地龙饮片的具体含量测定标准还未制定，导致地龙饮片市场相对混乱。建立地龙饮片的的质量标准能够使地龙饮片市场规范化，能够促进地龙药物的研究，能够提供一个安全临床用药环境。从地龙的采收季节、加工方法、最佳炮制工艺、炮制后活性成分的含量和药效变化以及地龙质量标准等方面介绍地龙的研究进展，从源头对地龙的质量控制进行研究，以期能够为建立较为全面的地龙质量控制体系作为参考。

1 地龙采收加工的研究

有关地龙的采收加工的方法古籍中早有记载，如《神农本草经》中记载的地龙应“二月取，阴干”，而《本草纲目》收录的地龙采收加工条件是“三月取，曝干”[2]。通过现代研究发现，地龙的采收时间与古籍中记载的有所不同。结合现代资源保护原则及实践经验，应集中在地龙的活动期对地龙进行采收，地龙的活动期是春、夏、秋三个季节。又根据研究和观察，春季是地龙的繁殖期，这一时期对地龙进行采收不利于可持续发展，并且从蚯蚓形态上春季的蚯蚓要比夏秋的要小，而且与夏秋季的蚯蚓对比，夏秋季的蚯蚓肉更为厚实，而且根据相关研究，在夏季时蚯蚓体内降血压的活性成分血小板活化因子含量最高[3]，所以选择夏季采收蚯蚓最为适合，所以每年的7～9月是地龙的最佳采收时间[2]。这时对地龙进行采收不仅可以使蚯蚓的繁殖得到保护，而且还能使得地龙药材的品质更佳。

蚯蚓加工成的药材有两种，一种是鲜地龙，另一种是干地龙。鲜地龙能够在将地龙捣成泥后直接作为药物服用，也可以将鲜活的地龙加入白糖进行搅拌，过滤后提取汁水服用或制成丸剂进行使用，内服能够治疗消化道溃疡等病症，外敷可以治疗腮腺炎等，见效明显[2]。

干地龙的加工有两种，一种是民间常用的方法：蚯蚓收获后将其与草木灰搅拌使其呛死，然后用温水除去附着在蚯蚓表面的草木灰及杂质，再逐条固定并从腹部剖开地龙，用温水冲洗干净，最后在太阳下曝干或用火烘干[4]；二是药典规定方法：蚯蚓收获后，及时剖开腹部，除去内脏及泥沙，洗净晒干或低温干燥[5]。

这两种方法各有优缺点。有研究发现，蚯蚓在受到外界刺激时会释放应激分泌液，这种分泌液静脉注射显剧毒[6]，民间的方法加工时能够去除这种分泌液，所以这种加工方式较为安全，但是由于运用草木灰，会引入大量的杂质，如果冲洗不完全，会造成杂质超标；并且操作时间较长。药典法优点是操作时间短，但是对于应激分泌液可能造成残留，不利于药材安全。

采用民间方法和药典法剖开处理地龙时需要做到从头至尾完全剖开，从而减少地龙产品的杂质含量。徐向恩等[7]在甘肃省地龙药材及饮片质量现状分析中发现现在市面上的地龙产品很多加工方法都是从虫体中部不同程度剖开，导致蚯蚓的头、尾部及有些其他部分未被剖开，这些地方聚集着大量的泥土、沙石等杂质，使得这些药材中的杂质含量远远超过药典中规定的含量，使得中医的临床用药安全得不到保障。

有研究表明，蚓激酶主要存在于蚯蚓消化道内[8]，所以为了使地龙具有最大的药效作用，地龙加工时应保留内脏。民间的加工方法和药典法都不保留内脏，所以都会造成有效成分流失。刘艳玲等[9]研究了蚯蚓新的加工方法：将收获的蚯蚓使其自行吐净内脏中的泥土，经过洗涤和日光下曝干获得干地龙。这种加工方法的优点是加工方便，由于保留了内脏所以纤溶活性成分的提取更高。但是在这种方法中如何界定蚯蚓内脏泥土吐净没有给出标准，如果蚯蚓未吐净泥土，会造成杂质超标。同时还研究了不同干燥方法对地龙加工的影响，发现地龙在日光下暴晒干,得到的干地龙在外观、色泽、味道几方面都比低温干燥好。这与地龙中所含有的多种活性蛋白酶有关。地龙低温干燥的干燥温度大于70℃时，容易使地龙中的某些活性蛋白酶失活变性；如果干燥温度太低，容易受到微生物侵蚀而引起变质，并且由于温度在35℃～55℃时地龙会出现自溶现象[8]。而日光下晒干，日光中的紫外线照射能够杀死部分微生物，而且干燥时间较短，但晒干的方法易受天气的影响。

2 地龙炮制的研究

地龙的炮制品有很多，有生地龙、炒地龙、地龙炭、酒地龙、盐地龙、油地龙、蛤粉制地龙、甘草制地龙、花椒糯米制地龙等，炮制的主要目的是便于粉碎和去除地龙的不良气味，但是有些辅料制法还能够促进地龙的药理作用，如酒制地龙中辅料酒除了能矫正地龙的腥味，还能增长地龙通经活络止痛作用；地龙经醋制后，不但可以去掉不良气味，还能增加活血通络、祛瘀止痛等作用；地龙与蛤粉共制不仅能使地龙更为酥脆，改变药物的滋腻性质，还能增强药物清热化痰作用。

目前，地龙的炮制方法虽有很多，但关于地龙的最佳炮制工艺的研究很少，仅有对广地龙饮片和酒地龙饮片最佳炮制工艺的研究。李钟等[10]通过研究最终确定广地龙最佳炮制工艺的为：取适量的干地龙，加水淘洗(药材与水量1∶5)，淘洗3min，40℃烘干。别甜甜[11]以次黄嘌呤含量和水溶性浸出物的含量作为指标，考察加酒量、闷润时间以及炒制温度对酒地龙炮制的影响，最终获得酒地龙的最佳炮制工艺为：取适量净地龙(每100 kg地龙，加入黄酒 12kg)，加入黄酒闷润 30 min，加入到预热好的铁锅内，控制温度在80℃温度进行炒制，炒至药材呈棕黄色时取出，摊开，放凉。

现代地龙炮制研究表明，不同的方法对地龙进行炮制得到的炮制品在主要成分和功效上具有差异。利红宇等[12]进行了五种广地龙饮片的不同炮制品化痰、止咳、平喘的药效对比，在五种不同炮制品中化痰、止咳、平喘药效最好的是蛤粉制广地龙，黄酒制广地龙次之，黄酒制药效大于白酒制。其原因是与其他炮制品对比蛤粉制广地龙中保留黄嘌呤和次黄嘌呤最多。张文斌等[13]对比了不同地龙炮制品中琥珀酸含量，发现经炮制的地龙中琥珀酸的含量都减少，其含量顺序为生品>炒品>酒炙品>醋炙品。造成这种结果与琥珀酸的水溶性和热不稳定性有关。李钟等[14]比较了五种不同的广地龙炮制品中次黄嘌呤和肌苷的含量。五种不同炮制品中肌苷的含量都有所下降，而经过蛤粉制、酒制、醋制后的炮制品中次黄嘌呤含量有明显上升，黄酒制次黄嘌呤含量高于白酒制，并且蛤粉制广地龙中次黄嘌呤含量最高而肌苷含量最低；净制广地龙中肌苷含量最高而次黄嘌呤含量最低，其原因从物质化学成分的结构上进行分析，肌苷又可称为次黄嘌呤核苷，它在化学结构上与次黄嘌呤极为相似，仅比次黄嘌呤多了一个呋喃糖。在炮制时，炮制温度的升高，呋喃糖容易失去，转化为次黄嘌呤，因此使炮制品中次黄嘌呤的含量会相应增高，肌苷的含量会相应降低。

3 地龙的质量标准研究

与其他中药材一样，地龙也是化学成分复杂，但是药用范围十分广泛的药物，而且根据活性成分的不同所呈现的药理作用也不同。关于地龙的质量标准，中国药典2015版地龙项下面收录了地龙饮片的鉴别、杂质、水分、总灰分、酸不溶性灰分、重金属、黄曲霉毒素、浸出物八项具体指标，还未制定相应的含量测定的标准。

地龙中的主要成分有脂类、氨基酸、蛋白质、琥珀酸、嘌呤等[15]。目前，研究学者们多用次黄嘌呤以及肌苷的含量作为地龙药材的质量标准。因为地龙中降压平喘作用的主要活性物质是次黄嘌呤及含氮化合物，并且这些物质有抗组织胺、扩张支气管和平喘作用[16]。吴文如[17]以次黄嘌呤和肌苷为对照品，采用高效液相色谱法测定地龙饮片中次黄嘌呤和肌苷的含量，结果显示液相色谱有适当的保留时间，良好的分离度和重现性，可以用于地龙饮片的含量测定，并且制定了地龙饮片的质量标准：按干燥品计算，含次黄嘌呤不得少于0.2mg·g-1含肌苷不得少于0.3mg·g-1。谭峻英等[18]利用以次黄嘌呤含量和肌苷含量作为指标，采用HPLC经测定，最终确立了甘草水制广地龙的质量标准：以干燥品计算，次黄嘌呤含量应不少于0. 006%，肌苷含量不少于0. 40%。

有研究者通过研究认为琥珀酸含量也可以作为地龙的质量标准。何琳[19]通过研究测定了广地龙饮片中琥珀酸的含量，并且通过进行平喘止咳的药效学实验，证明琥珀酸也具有平喘止咳作用，进一步证明琥珀酸含量可以作为地龙的质量标准，但她们并未给出具体的含量标准。所以以琥珀酸含量作为地龙质量标准值得进一步深入研究。

另外，研究学者通过建立适合地龙的ISSR扩增系统，进而应用ISSR分析对地龙类药用动物进行分子特征的刻画，为地龙药材的DNA分析及鉴别分类研究提供参考[20]。也有研究者通过建立地龙HPLC指纹图谱的分析方法，用于鉴别不同种类及不同产地地龙样品间的差异[21]。这些方法的建立能够加强对地龙质量的有效控制。

4 小结

地龙的采收最好在夏秋季节，每年的7～9月进行，这时采收不仅可以使蚯蚓的繁殖得到保护，而且还能使得地龙药材的品质更佳。地龙现有的加工方式都存在不同程度的缺陷，寻找在保证有效成分含量保留多而使杂质含量少的加工方法，值得研究。

应加强其他地龙最佳炮制工艺的研究。目前，仅有广地龙饮片和酒地龙的最佳炮制工艺的研究，其余辅料炮制的研究还是空白，但是从广地龙不同炮制品平喘化痰止咳药效的比较可以看出，蛤粉制地龙的平喘止咳化痰功效相当有效，拥有广阔的研究价值，应继续深入研究。

地龙在炮制时尽量减少后砂炒法炮制地龙，因为地龙中平喘的主要成分次黄嘌呤、琥珀酸等都是水溶性和对热不稳定的物质，砂作固体辅料传热快，所以砂烫温度一般较高，对地龙中的次黄嘌呤和琥珀酸会造成比较严重的损失，砂炒本身也不利于除去地龙的腥味，砂仅仅是中间传热

物质，而没有任何其他作用，所以在地龙在炒制时应改用传热慢的其它固体辅料比较合理。

通过实验可以发现地龙进行酒炙时应选用黄酒作为辅料炮制，其炮制品的次黄嘌呤的含量高于以白酒炮制的含量。并且根据中医理论，活血通络用酒炙；散瘀止痛用醋炙；利尿用滑石粉炒；清肺化痰用蛤粉炒。或者按用药需求用液体辅料如黄酒、醋、甘草水等拌匀后闷润，再用固体辅料炒制。如用醋拌滑石粉炒地龙能够治疗小便不利、尿路不通等症状，醋不仅能起到止痛作用还能去除异味，滑石粉可以起到清热利尿的作用；如酒拌蛤粉炒能够治疗咳嗽，酒既能起到通经活络的作用又能去除地龙的腥味，蛤粉能够起到清热化痰的作用。这样配合使用能够使两种辅料和地龙形成协同作用[22]。

结合2015版中国药典，建立以次黄嘌呤和肌苷的含量为指标的地龙含量测定的质量标准，加强对琥珀酸含量为地龙质量标准的研究，并且借助适合地龙的ISSR扩增系统和地龙HPLC指纹图谱技术，建立较为健全的地龙药材的质量控制体系。这样不仅能够规范地龙饮片市场，促进地龙药材的标准化养殖，也能够全面提高地龙相关产品的研制水平和质量控制。

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