淋巴细胞微核的两种染色方法检测结果分析

任振平

（吉林省白城医学高等专科学校附属医院 检验科，吉林 白城 137000）

0 引言

微核是细胞染色体畸变在有丝分裂间期中的一种表现形式，放射线照射过量微核率会升高，小剂量辐射对长期从事放射性工作人员健康存在一定影响[1]，还可以造成放射工作人员细胞遗传方面变化[2]，要加强放射防护工作[3]，就要对职业性放射工作者所受辐射损伤做出客观评价，分析判断个人受照剂量。因此检测淋巴细胞微核率成为放射工作者职业健康检测中的重要一项。从2013年起，我院经吉林省卫生厅审定、批准，获得放射工作人员职业健康检测资格[4]，在2017年我们对382例在岗放射工作者微核率检测中，采用吉姆萨染色和瑞氏吉姆萨复合染色的两种方法染色，对两种染色方法的检测结果比对分析。

1 对象与方法

1.1 测定对象

吉林省白城市以及周边地区放射工作者岗中382人，男322人，女60人。此次检测的都是放射诊断人员包括X光室和CT室以及同位素室的放射工作者。由于微核率男女之间差异无统计学意义[5]，故在此不做分析。

1.2 检测方法

1.2.1 仪器设备

恒温培养箱、显微镜、低速离心机、移液器、超净工作台、载玻片。

1.2.2 试剂

（1）RPM1640培养基5mL/瓶

（2）固定液：甲醇（优级纯）：冰醋酸（优级纯）=3∶1用前新鲜配制

（3）低渗液：0.075MKCL溶液，用前配制（4）吉姆萨染液

（5）瑞氏吉姆萨复合染液

1.2.3 实验步骤

（1）无菌采集0.4mL静脉血。无菌注入5mL 1640培养瓶中混匀放入37℃培养箱中培养72小时。

（2）开启培养瓶，用吸管吸弃上清，轻吹混匀，移入10mL离心管中，1500转低速离心10分钟，吸弃上清，轻吹混匀。

（3）加入2mL0.075MKCL低渗溶液，轻吹混匀，立即加入2mL固定液，轻吹混匀，1500转低速离心10分钟吸弃上清。

（4）加入3mL固定液，轻吹混匀，1500转离心10分钟，吸弃上清。

（5）重复（4）。

（6）剩余固定液，吹散混匀。

（7）滴片：将玻片从冰水中取出，滴片（10cm高度）自发干燥，每份标本至少两张片。

（8）染色：每份标本两张玻片分别采用吉姆萨染色和瑞氏吉姆萨复合染色，均染色10分钟。慢水流冲洗，自然干燥。

（9）阅片：油镜下，计数1000个完整淋巴细胞中微核数。

（10）玻片冷藏处理的效果比热水处理后的效果好[3]。

1.3 统计分析

通过对382例放射工作者淋巴细胞微核率两种染色方法检测结果分析，发现两种结果完全相同291人，占76.2%，不同91人，占23.8%。两种方法微核总数为218个，其中吉姆萨染色法微核计数107个，瑞氏吉姆萨复合染色法微核数111，两种染色法平均109个，瑞氏吉姆萨复合染色法比吉姆萨染色法多3.7%。

2 结果分析

两种染色方法存在差异，瑞氏吉姆萨复合染色法微核率略高于吉姆萨染色，没有明显差异。计数淋巴细胞微核细胞数时，吉姆萨染色法略高于瑞氏吉姆萨复合染色法。

3 讨论

1）吉姆萨染色和瑞氏吉姆萨复合染色在淋巴细胞微核率检测上没有明显差异。瑞氏吉姆萨复合染色法微核率略高于吉姆萨染色，吉姆萨染色法微核细胞数却略高于瑞氏吉姆萨复合染色法。说明在检测一个细胞多个微核时，瑞氏吉姆萨复合染色法结果更好些。

2）在阅片时，两种染色方法区别非常明显。吉姆萨染色侧重细胞核的着色，而对胞浆染色较逊色，胞核与胞浆色差小。而瑞氏吉姆萨复合染色则克服了这一缺点，胞核胞浆染色都良好。胞核与胞浆色差大，胞核紫红色，胞浆淡蓝色，界线分明，微核清晰易于辨认。尤其遇多个微核时不易漏检。

3）综上所述，在淋巴细胞微核率检测中，瑞氏吉姆萨复合染色优于吉姆萨染色。同样，瑞氏吉姆萨复合染色也适用于淋巴细胞染色体畸变率实验。选择合适的染色方法，提高微核的检出率，降低漏检率，降低误检率，保证实验质量，缩短阅片时间。对长期从事职业放射性工作人员需要加强对此工种人员认知培训[6]，提高防范安全意识与举措[7]，因为长期低剂量电离辐射不但对放射工作人员的微核率和微核异常有明显影响[8]，而且还会对晶状体也有影响[9]，加强工作场所X线防护及个人健康监护也是今后长期重要的工作任务[10]。