臭牡丹的化学成分研究

张贵杰+代禄梅+张斌+张永丽+王恒山+梁东

[摘要] 研究臭牡丹Clerodendrum bungei的化学成分。采用硅胶，Sephadex LH-20，MCI，ODS和半制备HPLC等色谱技术，从臭牡丹95%乙醇提取物中分离得到10个化合物，分别鉴定为11，12，16S-trihydroxy-7-oxo-17（15→16），18（4→3）-diabeo-abieta-3，8，11，13-tetraen-18-oic acid（1），12S*，13R*-dihydroxy-9-oxo-octadeca-10（E）-enoic acid（2），赪桐苷A（3），trichotomoside（4），山橘脂酸（5），4′-O-methylscutellarein（6），neroplomacrol（7），butylitaconic acid（8），hexylitaconic acid（9），对羟基苯甲酸（10）。化合物1和2为新天然产物，化合物7～10为首次从该属植物中分离得到，化合物为3，5，6首次从该植物中分离得到。

[关键词] 臭牡丹； 马鞭草科； 化学成分； 二萜

[Abstract] Ten compounds were isolated from the 95% aqueous EtOH extract of Clerodendrum bungei by a combination of various chromatographic techniques including column chromatography over silica gel， Sephadex LH-20， MCI， ODS， and semi-preparative HPLC. Their structures were elucidated as 11，12，16S-trihydroxy-7-oxo-17（15→16），18（4→3）-diabeo-abieta-3，8，11，13-tetraen-18-oic acid （1）， 12S*，13R*-dihydroxy-9-oxo-octadeca-10（E）-enoic acid （2）， clerodenoside A （3）， trichotomoside （4）， glycosmisic acid （5）， 4′-O-methylscutellarein （6）， neroplomacrol （7）， butylitaconic acid （8）， hexylitaconic acid （9）， p-hydroxybenzonic acid （10） by their physicochemical properties and spectroscopic data. Compounds 1 and 2 are new natural products， while compounds 7-10 were obtained from the genus Clerodendrum for the first time， and compounds 3， 5， 6 were isolated from this plant for the first time.

[Key words] Clerodendrum bungei； Verbenaceae； chemical constituents； diterpenoids

臭牡丹Clerodendrum bungei Steud.系馬鞭草科Verbenaceae大青属植物，在我国分布广泛。根、茎、叶入药，有祛风解毒、消肿止痛之效，近来还用于治疗子宫脱垂[1]。现代科学研究证明臭牡丹主要含有二萜、苯乙醇苷等化学成分[2-5]，具有抗肿瘤、降糖等多方面药理活性[2-4]。为了寻找其有效成分，本文对臭牡丹95%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部位进行了化学成分研究，从中分离得到10个化合物，利用多种波谱技术鉴定了它们的结构，分别为11，12，16S-trihydroxy-7-oxo-17（15→16），18（4→3）-diabeo-abieta-3，8，11，13-tetraen-18-oic acid（1），12S*，13R*-dihydroxy-9-oxo-octadeca-10（E）-enoic acid（2），赪桐苷A（3），trichotomoside（4），山橘脂酸（5），4′-O-methylscutellarein（6），neroplomacrol（7），butylitaconic acid（8），hexylitaconic acid（9），对羟基苯甲酸（10）。其中化合物1和2均为新天然产物，化合物1为1个二萜，化合物3和4为2个苯乙醇苷，化合物7～10为首次从该属植物中分离得到，化合物3，5，6为首次从该植物中分离得到（图1）。

1 材料

瑞士Bruker AVANCE 400 MHz超导核磁共振仪；Thermo-Scientific Exactive高分辨质谱仪；Bruker HCT离子阱质谱仪；创新通恒高效液相色谱仪，YMC C-18（20 mm×250 mm，5μm）色谱柱；簿层色谱硅胶 GF254 及柱色谱硅胶（200～300目）为青岛海洋化工厂生产；反相柱色谱硅胶 RP-18（50 μm）为YMC公司生产；葡聚糖凝胶 Sephadex LH-20为Pharmacia公司生产；MCI（CHP20，75～150 μm）为日本Mitsubishi 公司生产；所用试剂均为分析纯或色谱纯。

臭牡丹于2015年8月采于广西桂林，由广西师范大学生命科学学院唐绍清鉴定，标本（No CB-2015022）保存于广西师范大学省部共建“药用资源化学与药物分子工程”国家重点实验室。

2 提取与分离

臭牡丹地上部分15 kg，粉碎后用95%乙醇加热回流提取3次，合并提取液，减压浓缩得到浸膏。将浸膏悬浮于水中，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇分别萃取。endprint

乙酸乙酯部分（55 g）经硅胶柱色谱分离，以二氯甲烷-甲醇（1∶0～0∶1）梯度洗脱，得到Frs. A～O共15个部分。Fr. F部分（9.7 g）经MCI柱色谱，以甲醇-水（20∶80～100∶0）作为流动相梯度洗脱，得到Frs. 1～15共15个流分。Fr. F-3（672.8 mg）凝胶Sephadex LH-20（甲醇）柱色谱，得到7个流分Fr.F-3-6（71.5 mg）经制备型HPLC，以乙腈-水（10∶90）等度洗脱（8 mL·min-1），得到化合物10（11.4 mg，tR=33.9 min）。Fr. F-6（171.8 mg）凝胶Sephadex LH-20（甲醇）柱色谱，得到7个流分Fr. F-6-2（72.7 mg）经制备型HPLC，以乙腈-水（28∶72）等度洗脱（8 mL·min-1），得到化合物8（25.2 mg，tR=30.3 min）。Fr. F-7（265.4 mg）凝胶Sephadex LH-20（甲醇）柱色谱，得到9个流分：Fr. F-7-2（56.7 mg）经制备型HPLC，以乙腈-水（30∶70）等度洗脱（8 mL·min-1），得到化合物7（17.9 mg，tR=41.4 min）。Fr. F-8（1 713.2 mg）凝胶Sephadex LH-20（甲醇）柱色谱，得到17个流分Fr. F-8-4（143.1 mg）经制备型HPLC，以乙腈-水（38∶62）等度洗脱（8 mL·min-1），得到化合物2（5.3 mg，tR=40.6 min）；Fr.F-8-5（442.4 mg）经制备型HPLC，以乙腈-水（35∶65）等度洗脱（8 mL·min-1），得到化合物3（13.9 mg，tR=30.7 min）；Fr. F-8-7（171.3 mg）经制备型HPLC，以乙腈-水（40∶60）等度洗脱（8 mL·min-1），得到化合物9（32.3 mg，tR=33.6 min）；Fr. F-8-10（211.6 mg）經制备型HPLC，以乙腈-水（32∶68）等度洗脱（8 mL·min-1），得到化合物1（79.7 mg，tR=33.1 min）；Fr. F-8-14（31.5 mg）经制备型HPLC，以乙腈-水（25∶75）等度洗脱（8 mL·min-1），得到化合物5（8.8 mg，tR=43.5 min）。Fr. F-11（613.1 mg）经ODS柱色谱，以甲醇-水（50∶50～70∶30）作为流动相梯度洗脱，进一步经制备型HPLC，以甲醇-水（60∶40）等度洗脱（6 mL·min-1），得到化合物6（9.0 mg，tR=42.2 min）和4（15.5 mg，tR=66.0 min）。

3 结构鉴定

化合物1 白色无定形粉末，[α]20D -1.3（c 0.1，MeOH）。HR-ESIMS m/z 383.145 4 [M+Na]+（计算值为383.146 5），结合NMR推测其分子式为C20H24O6。1H-NMR（表1）显示1个芳氢信号（δH 7.39，s）和1个连氧质子信号（δH 4.11，m）。13C-NMR（表1）显示20个碳信号，结合HSQC谱可以将其归属于2个羰基碳（δC 199.7，173.0），8个sp2杂化碳信号，1个sp3杂化的季碳（δC 38.3），2个sp3杂化的次甲基（其中1个与氧相连δC 69.9），4个亚甲基和3个甲基碳信号。1H-1H COSY谱中，H2-15（δH 2.83，2.73）与H-16（δH 4.11），H-16与H3-17（δH 1.17）有交叉信号峰，表明该化合物存在-CH2-CH（OH）-CH3的结构片段。该化合物的核磁数据与文献报道的11，12，16-trihydroxy-17（15→16），18（4→3）-diabeo-abieta-3，8，11，13-tetraen-7-one非常相似[6]，区别仅在于本化合物的A环少了1个甲基碳，多了1个羧基碳信号。在HMBC谱中（图2），H3-18（δH 1.81）与C-2（δC 30.3），C-3（δC 137.4）和C-4（δC 129.1）均存在相关信号，表明化合物1的18位被甲基取代；同时存在H3-18与C-19（δC 173.0）的弱HMBC 4键相关，表明该化合物的19位被羧基取代。

化合物1的绝对构型是采用与Rh2（OCOCF3）4络合后测试CD差谱，运用bulkiness规则的方法得以确定[7]。将化合物1溶解在无水氯仿溶剂中，测试其基础谱；之后加入Rh2（OCOCF3）4，待反应完全 后测试其CD光谱，得到稳定的反应后谱；用反应后谱减去基础谱得到CD差谱（图3），观察CD差谱在350 nm附近处的正负号，运用bulkiness规则解谱。化合物1的CD差谱在350 nm附近处显示正的Cotton效应（图3），故确定了16S的绝对构型。综合上述信息，确定化合物1的结构为11，12，16S-trihydroxy-7-oxo-17（15→16），18（4→3）-diabeo-abieta-3，8，11，13-tetraen-18-oic acid，为新天然产物[4]（图1）。

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[责任编辑 丁广治]endprint