叶酸口腔速溶膜剂的质量控制

周禹宏，张金芬，房志仲

（天津医科大学药学院，天津市临床药物关键技术重点实验室，天津300070）

药物速溶传递系统（fast dissolving drug delivery systems，FDDDS）最早开发于上世纪 70年代，作为可代替传统片剂、胶囊剂及糖浆剂的新兴剂型[1]，口腔速溶膜剂常用作儿童、老年人以及吞咽困难的患者人群的传统剂型替代产品，具有纤薄柔韧、易于吞咽、剂量准确、快速崩解溶化等优点[2-4]，便于患者自主给药，提高患者的顺应性。近年来，人们逐渐发现了叶酸的其它新的治疗作用。对于H型高血压[5]、萎缩性胃炎[6]和骨性关节炎[7]均具有有效的治疗作用；另外，对胃癌、肝癌、大肠癌等多种癌症有明显的辅助治疗作用[8-12]。因此，叶酸被不断应用于多种疾病的预防、治疗和诊断。目前，国内市场的叶酸制剂只有片剂、胶囊剂、颗粒剂等普通剂型。叶酸口腔速溶膜剂具有药物速溶传递系统的优点，它的出现极大改善了患者的用药体验，特别适合儿童、老人、吞咽困难和精神疾病患者等特殊人群的预防治疗用药需求，具有良好的市场前景。本课题对自制的叶酸口腔速溶膜剂进行了质量控制方面的研究，建立了检测叶酸的质量控制方法，确保所建立方法准确、可靠、简便、易行。

1 材料与方法

1.1 试药 叶酸（河北冀衡集团药业有限公司，批号：61410001）；羟丙甲纤维素 E15（HPMC E15，安徽山河药用辅料股份有限公司，批号：150509）；丙二醇（青岛优索化学科技有限公司，批号：I94102224）；β-环糊精（β-CD，安徽山河药用辅料股份有限公司，批号：150506）；三氯蔗糖（安徽山河药用辅料有限公司，批号：150319）；DL-苹果酸（常茂生物化学工程股份有限公司，批号：20150708）；甜橙香精（天津市香源商贸有限公司，批号：1000506149）；对照品：叶酸标准品（中国食品药品检定研究院，供含量测定用）；供试品：叶酸口腔速溶膜剂（自制）；甲醇（天津市康科德科技有限公司，色谱纯，批号：20150724）；磷酸二氢钾(天津市光复科技发展有限公司，分析纯，批号：20151121)；氢氧化钾(天津市风船化学试剂科技有限公司，分析纯，批号：20150724)；氨水（天津市风船化学试剂科技有限公司，25%，批号：20150723）；重蒸水自制。

1.2 仪器 高效液相色谱仪（Waters 2690）；柱温箱（CBL Model 100型，天津科贝尔公司）；色谱柱（Inn oval.ODS-2，250 mm ×4.6 mm，5 μm；Phenomenex.luna，250 mm×4.6 mm，5 μm）；Empower色谱工作站；CPA225D电子分析天平（赛多利斯科学仪器（北京）有限公司）；AFA-Ⅱ型自动涂膜机（上海亚培实业有限公司）；电子数显千分尺（量程：0~25 mm，桂林广陆数字测控股份有限公司）；78X-3C片剂多用崩解测定仪（上海黄海药检仪器有限公司）。

1.3 方法[13-14]

1.3.1 色谱条件 色谱柱：Innoval ODS-2 C18色谱柱（250 mm×4.6 mm,5 μm）；流动相：甲醇-0.054 mol/L磷酸二氢钾缓冲盐溶液（调节 pH=6.3±0.1）（8:92）；检测波长：λ=254 nm；流速1.0 mL/min；进样量为20 μL；柱温为（30±1）℃。

1.3.2 供试品的制备 采用溶剂浇铸法制备口腔速溶膜剂。精密称取处方量的成膜材料HPMC E15，加入适量纯净水，搅拌均匀使其充分溶胀，形成均匀而质地黏稠的胶液。向胶液中加入处方量丙二醇，搅拌均匀后，依次按照处方称取主药、填充剂以及其他矫味剂，先后加入胶液中，再持续搅拌15 min，静置脱气。待胶液呈无气泡的均匀混悬黏稠状态时，涂膜，于50℃下干燥30min。脱膜，切割成所需大小。1.3.3 溶液的制备 （1）流动相的制备：称取6.8 g磷酸二氢钾与70 mL 0.1 mol/L氢氧化钾溶液，加水稀释至850 mL，用0.5%氨溶液调节pH至6.3±0.1。加入80 mL甲醇，用水稀释至1 000 mL，即得。（2）对照品储备液的制备：精密称取叶酸对照品55.0 mg置于25 mL量瓶中，加入15 mL 0.5%氨溶液，使之溶解，加水稀释至刻度，摇匀，即得对照品储备液。（3）对照品溶液的制备：精密称取叶酸对照品11.0 mg置于50 mL量瓶中，加入30 mL 0.5%氨溶液溶解，加水稀释至刻度并摇匀，即得对照品溶液。（4）供试品溶液的制备：取叶酸口腔速溶膜5片量（约含叶酸2 mg），称重后置于10 mL量瓶中，加入6 mL 0.5%氨溶液使之溶解，再加水稀释至刻度，充分振荡，摇匀。用0.45 μm微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液。（5）阴性对照溶液的制备：按照自制处方制得不含叶酸的空白膜剂，依上述供试品溶液的制备方法配制阴性对照溶液。（6）空白溶液的制备：取30 mL 0.5%氨溶液于50 mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。

1.3.4 厚度考察 膜剂厚度的均匀性关系到其剂量准确性和溶化速度的大小。通过电子数显千分尺来测量膜剂的厚度。任意选取3片自制叶酸口腔速溶膜，在膜上任意选取3点测定厚度，求其平均值，并计算标准差[15]。

1.3.5 溶化时限的考察 本研究借鉴《中国药典》2015版克霉唑口腔药膜溶化时限的测定方法，将膜剂剪成1 cm2大小，取6片分别用两层筛孔内径为2.0 mm的不锈钢丝夹住，置于上述吊篮的玻璃管中依崩解时限检查法片剂项下的方法（通则0921）检查。在盛有 (37±1)℃纯净水的1 000 mL烧杯中，以30~32次/min的速度上下移动（55±2）mm，当膜剂出现崩裂时，记录所用时间，计算其平均值和RSD。

1.3.6 系统适用性试验 分别取空白溶液和对照品溶液各20 μL进样，按照“1.3.1项下”的色谱条件进行测定，记录色谱图。

1.3.7 专属性试验 分别取“1.3.3项下”空白溶液、阴性对照溶液、对照品溶液和供试品溶液进样20μL，依照“1.3.1项下”的色谱条件进行测定，并记录色谱图。

1.3.8 定量限考察 精密移取“1.3.3项下”对照品溶液1 mL于100 mL量瓶中，加水稀释至刻度，充分摇匀，得到的待测溶液，记为浓度1。再分别取上述溶液4 mL、5 mL于10 mL量瓶中，加水稀释至刻度，充分摇匀，得到的待测溶液，依次记为浓度2、浓度3。分别进样，测定其信噪比。将所确定的定量限浓度溶液连续进样6次，记录其信噪比，并求其平均值和RSD。

1.3.9 线性关系考察 用移液管分别精密移取0.7、0.9、1.0、1.1 和 1.3 mL 对照品储备液，置 10 mL量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即得浓度分别为70%、90%、100%、110%、130%的样品溶液。取对照品储备液1 mL至50 mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得浓度为20%的样品溶液。另精密移取“1.3.3项下”对照品溶液1 mL于200 mL量瓶中，加水稀释至刻度，充分摇匀，得到浓度为0.5%的样品溶液。将上述样品溶液分别进样20 μL，按照“1.3.1项下”的色谱条件进行测定并记录峰面积。

1.3.10 精密度试验 （1）日内精密度：取“1.3.3项下”所制供试品溶液，同一天内连续进样6次，依照“1.3.1项下”的色谱条件进行测定，并计算峰面积的RSD。（2）中间精密度：取“1.3.3项下”所制供试品溶液，在同一实验室，不同时间由不同分析人员用不同设备于同一天内连续进样6次，依照“1.3.1项下”的色谱条件进行测定，并计算峰面积的RSD。

1.3.11 稳定性试验 按照自制处方制得叶酸口腔速溶膜胶液，静置备用。分别取室温放置0、1、2、4、8、12和24 h胶液约300 mg，精密称定，置于50 mL棕色量瓶中，加入30 mL 0.5%氨试液振荡溶解，用水稀释至刻度，混匀，用0.45 μm微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液，同法平行配制两份供试品溶液。依照“1.3.1项下”的色谱条件进行测定，计算其含量，统计其平均值与RSD。另外，分别取室温放置 0、1、2、4、8、12 和 24 h 的对照品溶液、空白溶液和供试品溶液进样，依照“1.3.1项下”的色谱条件进行测定，计算其含量，统计其平均值与RSD。

1.3.12 耐用性试验 根据“1.3.1项下”的色谱条件，依次变动色谱柱、柱温、检测波长、流动相流速、流动相比例和流动相pH等条件测定叶酸含量，取“1.3.3项下”的对照品溶液和供试品溶液分别进样2次，使用外标一点法计算叶酸的含量，并计算RSD。1.3.13 回收率试验 分别精密移取0.8、1.0和

1.2 mL对照品储备液于10 mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，离心，取上清液过滤，所得续滤液即为标准浓度80%、100%、120%的供试品溶液。将上述每个浓度平行配制3个样品。依照“1.3.1项下”的色谱条件进行测定并计算回收率。

1.3.14 含量测定 根据“1.3.3项下”的供试品溶液的制备方法对3批样品进行处理，得到样品溶液，进样，依照“1.3.1项下”的色谱条件进行测定，使用外标一点法计算叶酸的含量。

1.3.15 含量均匀度的测定 精密移取对照品溶液2 mL于10 mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为含量均匀度测定试验的对照品溶液。另取10片自制叶酸膜样品分别置于10个10 mL量瓶中，加入6 mL 0.5%氨溶液使溶解。加水稀释至刻度，摇匀，离心。取上清液用0.45 μm微孔滤膜过滤，所得滤液即为待测样品溶液。进样，依照“1.3.1项下”的色谱条件进行测定。计算每一片药膜的含量，统计其平均值与标准差，按照《中国药典》2015版（二部）附录ⅩE规定进行测定。

2 结果

2.1 厚度考察结果 见表1。所得叶酸口腔速溶膜厚度均匀。

表1 叶酸口腔速溶膜的厚度考察Tab 1 The thickness of rapidly dissolving oral film of folic acid

2.2 溶化时限考察结果 见表2。平均溶化时限为18.17 s，且均不超过 30 s。

表2 叶酸口腔溶解膜的溶化时限Tab 2 The disintegration time of rapidly dissolving oral film of folic acid

2.3 系统适用性试验色谱图 见图1。于“1.3.1项下”的色谱条件下测得的色谱图，主峰分离度大于1.5，理论塔板数大于2 000且拖尾因子为0.91，符合要求，该色谱系统有效适用。

图1 系统适用性试验Fig 1 System adaptability test

2.4 专属性试验结果 见图2。在“1.3.1项下”的色谱条件下，主药与辅料之间可明显分离，互不干扰。该色谱方法有良好的专属性。

2.5 定量限的考察结果 样品浓度为1.0 μg/mL时，平行测定6次，信噪比为11.0，RSD为1.08%。确定该浓度为定量限浓度。

图2 专属性试验Fig 2 Specific test

2．6 线性关系考察结果 以叶酸的峰面积（A）对浓度（C）做线性回归的标准曲线，得到线性方程为A=14551C-15665，R=0．999 8，表明叶酸在 40．0～260．0 μg/L的浓度范围内线性关系良好。

2．7 精密度试验结果 叶酸的日内精密度试验的RSD 为 0．23%（n=6），日间精密度的 RSD 为 0．26%（n=6），表明精密度良好。

2．8 稳定性试验结果 自制处方制得的叶酸口腔速溶膜胶液的RSD为0．82%，叶酸对照品溶液的RSD 为 1．44%，供试品溶液的 RSD 为 0．86%，表明叶酸口腔速溶膜胶液、叶酸对照品和供试品溶液室温放置24 h稳定。

2．9 耐用性试验结果 依次变动色谱柱、柱温[（25±2）℃、(30±2)℃和(35±2)℃]、检测波长（252 nm、254nm、256nm）、流动相流速（0．9mL/min、1．0mL/min、1．1 mL/min）、流动相比例（有机相-水相=6∶94、8∶92、10∶90）和流动相 pH（6．1±0．1、6．3±0．1、6．5±0．1），其它条件不变测定叶酸含量，其RSD为0．70%。结果表明，在测定条件有小的变动时，含量测定结果基本不受影响，该测定方法具有良好的耐用性。

2．10 回收率试验结果 叶酸的平均加样回收率为99．02%，RSD 为 0．41%，符合要求，详细测定结果见表3。

表3 叶酸的回收率试验Tab 3 The recovery tests of folic acid

2．11 含量测定结果 3批样品中叶酸的含量测定结果见表4。

表4 叶酸的含量测定结果Tab 4 Content determination of folic acid

2．12 含量均匀度的测定结果 根据测得含量计算A+2．2S=1．42＜15．0，表明自制叶酸口腔速溶膜中，叶酸的含量均匀度良好。

3 讨论

3．1 供试品的制备方法 本研究采用溶剂浇铸法制备叶酸口腔速溶膜剂，筛选和调整了几种辅料的种类与配比，并从成膜性、脱膜性、溶化时限、耐折度等几个方面考察其特性。所得膜剂外形美观，柔韧性良好，实现了30 s内迅速溶化。相比于传统的叶酸片剂，该制剂具有速溶起效快、生物利用度高、患者顺应性好等优点。但该制剂尚存在载药量较小、对包装要求较高等缺点，这就需要与其他学科共同发展，以期克服上述困难，使其应用范围更加广泛。

3．2 溶化时限的测定方法 目前，口腔速溶膜剂的溶化时限测量方法尚未给出官方指导。因此，本研究借鉴 CDER（CenterforDrugEvaluationandResearch）[16]给出的口腔崩解片的指导说明，即崩解时间不超过30 s，来规范开发阶段的定性指标。

3.3 研究现状 本制剂具有口腔速溶膜剂的优良特性，制备过程简单易行，工艺较为成熟，易于实现产业化，或可为科研工作者提供有益的借鉴。但本研究尚未完成对该制剂的黏性测试、表面pH测试和部分机械性能考察，仍需要进一步补充完善。

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