β-catenin在非特殊型浸润性导管癌中的表达及其对患者预后的影响

杨丽敏，秦凤霞，黄勇，马勇杰

（天津医科大学肿瘤医院，国家肿瘤临床医学研究中心，乳腺癌防治教育部重点实验室，天津市“肿瘤防治”重点实验室，天津市恶性肿瘤临床医学研究中心，天津300060）

乳腺癌是严重危害女性生命健康的常见恶性肿瘤之一，其发病率呈不断上升趋势。我国乳腺癌患者发病率每年约以3%~4%以上的速度递增，因此，预防和治疗乳腺癌具有重大意义。β-catenin是一种多功能蛋白，重要功能是参与细胞间的相互黏连，在乳腺上皮中，β-catenin通过介导与 E-cadherin的相互作用，将细胞外黏附分子与胞质内组织骨架相互连接，以保持质膜的完整性，并参与细胞的黏附、迁徙与转移等过程。随后的研究发现，它不仅是细胞黏附分子，还是wnt信号通路中重要的传递因子。在细胞核中，β-catenin通过调节基因表达过程，在乳腺癌发生发展中具有重大作用。本研究采用免疫组织化学方法检测β-catenin在273例非特殊型浸润性导管癌（IDC-NOS）中的表达，并分析其表达情况与乳腺癌临床病理特征及预后的关系。

1 资料与方法

1.1 病例资料 随机选取天津医科大学肿瘤医院2004-2006年病例资料完整的经病理诊断证实的IDC-NOS 273例，并对其标本对应的石蜡切片进行免疫组化染色。273例IDC-NOS患者均为女性，年龄27~76岁，平均年龄为50.00岁。患者的随访起点为手术日期，末次随访时间为2014年11月24日，平均随访73．5月。至随访截止日，有44例（16．1%）患者出现了肿瘤的复发或远处转移，25例（9．2%）患者死于癌症。

1．2 免疫组化染色 免疫组织化学染色采用链霉素抗生物素-过氧化物酶免疫组化试剂盒SP-9000操作说明进行，简述如下：组织切片经脱蜡复水，组织抗原修复（pH=6．0的枸橼酸盐缓冲液），3%H2O2室温孵育10 min，试剂2（非特异性染色阻断剂）室温孵育20 min，滴加β-catenin鼠抗人单克隆抗体（Santa Cruz），4℃过夜，室温复温45 min后，滴加试剂3（生物素标记的羊抗鼠/兔IgG）37℃孵育20 min，PBS清洗3次，滴加试剂4（链霉卵白素-过氧化物酶）37℃孵育20 min，之后用DAB显色，苏木精复染，1%盐酸酒精分化，0．2%氨水返蓝，脱水透明后封片。

1．3 结果判断 免疫组织化学的检测结果由两位病理学医师独立观察得出。β-catenin染色结果分别从细胞膜、细胞浆两个方面判断β-catenin在癌细胞内的分布，膜阳性细胞率＞70%为正常表达，膜阳性细胞率≤70%为表达减弱或缺失；细胞浆阳性率＞10%为胞浆异位表达。膜表达减弱或缺失及胞浆异位表达均称作异常表达。ER的判定以1%为临界值，至少1%肿瘤细胞显示核显色时，将肿瘤判读为ER阳性[1-2]。

1．4 统计学分析 采用SPSS 19．0统计软件包进行数据分析，以P＜0．05为差异有统计学意义。各组间临床病理资料及差异的比较使用χ2检验，β-catenin的表达情况与临床病理参数的相关性分析采用Spearman秩相关检验。总生存分析和无进展生存分析采用Kaplan-Meier法分析，总生存期是从诊断日期到因乳腺癌死亡的日期，无进展生存期是由手术日期到癌症复发、转移或者死亡的日期。

2 结果

2．1 β-catenin的表达情况与IDC-NOS患者预后的关系 本研究中β-catenin有 11．7%（32/273）仅表现胞浆着色，65．2%（178/273）仅胞膜着色，14．7%（40/273）既有胞浆着色又有胞膜着色，其余为阴性表达，未见胞核着色。根据癌细胞中β-catenin的胞浆、胞膜表达情况将β-catenin的表达分为正常表达和异常表达。在273例IDC-NOS患者中，有133例（48．7%）患者属于β-catenin正常表达，140例（51．3%）患者呈现出β-catenin异常表达，见图1。Kaplan-Meier生存分析发现，β-catenin异常表达的乳腺癌患者预后差（图2A，2B）。

图1 IDC-NOS患者β-catenin表达免疫组化图（×200）Fig 1 β-catenin expression in IDC-NOS patients（×200）

图2 β-catenin正常表达与异常表达患者的生存分析Fig 2 Survival analysis of normal and aberrant expressions of β-catenin in IDC-NOS patients

2．2 β-catenin的表达与IDC-NOS患者临床病理参数的关系 分析β-catenin的异常表达与乳腺癌的各项临床病理参数的相关性，发现β-catenin的异常表达与年龄、组织学分级、肿瘤大小、淋巴结转移状态、复发和/或远处转移、孕激素受体（PR）、人类表皮生长因子受体2状态（HER2）在内的病理指标均无相关性，与雌激素受体状态（ER）呈显著负相关关系（rs=-0．134，P=0．027）（表 1）。

表1 β-catenin的异常表达与浸润性导管癌临床病理参数的相关性Tab 1 The relationship between β-catenin and pathological features of IDC-NOS

2．3 不同 ER表达状态下，β-catenin的表达与IDC-NOS患者预后的关系 由于ER与β-catenin的异常表达呈负相关，本研究联合分析ER状态与β-catenin表达情况对预后的影响，发现在ER阴性的患者中（n=104），β-catenin异常表达患者与β-catenin正常表达患者的预后没有差异（图3A，3B），然而在 ER 阳性的患者中（n=168），β-catenin异常表达提示预后不良（图3C、3D）。

图3 在ER阴性患者（A，B）和ER阳性患者（C，D）中，β-catenin正常表达与异常表达患者的生存曲线分析Fig 3 The survival curves of normal and aberrant expressions of β-catenin in ER-negative patients(A,B)and ER-positive patients(C,D)

3 讨论

β-catenin是一种多功能蛋白，在肿瘤发生发展过程中发挥多重作用。β-catenin可与E-cadherin的胞质区相连形成复合体，在介导和调节同质细胞黏附中起着重要作用[3-4]。同时，β-catenin也是wnt信号转导通路的中心效应器[5-6]。胞浆中积累的β-catenin进入细胞核，与TCF/LEF（T cell factor/lymphoid enhancer factor）家族的DNA结合蛋白结合，转录激活并调控下游靶基因的表达[7-9]。

许多研究表明β-catenin在乳腺癌的发生发展过程中起着举足轻重的作用[10]，但是在乳腺癌标本中，β-catenin的免疫组织化学染色结果还很混乱，主要是由于β-catenin的亚细胞定位以及分析方法不同。Li等[11]通过免疫组织化学技术检测了169例浸润性乳腺癌标本，观察到β-catenin的胞膜、胞浆及胞核中都有着色，且认为β-catenin胞浆和胞核阳性着色为wnt通路激活状态，β-catenin胞浆和胞核阳性表达的乳腺癌患者预后差。López-Knowles等[12]使用免疫组织化学染色技术检测了276例浸润性导管癌标本中β-catenin的表达，有4%（12/276）的患者仅胞膜着色，5%（15/276）仅胞浆着色，其余的胞浆、胞膜都有着色，另外仅在3例患者中观察到β-catenin胞核着色。研究者认为β-catenin胞浆表达水平高于β-catenin胞膜表达水平的乳腺癌患者预后差。Pang等[13]表明β-catenin在乳腺癌细胞的细胞膜上表达，β-catenin低表达的乳腺癌患者预后差。Zhang等[14]通过meta分析发现，细胞质/细胞核中β-catenin的高表达的乳腺癌患者预后差，而细胞膜上β-catenin的表达不能指示预后。

本研究通过免疫组织化学染色实验检测了273例浸润性导管癌标本中β-catenin的表达，其中有11.7%（32/273）仅胞浆着色，65.2%（178/273）仅胞膜着色，14.7%（40/273）既有胞浆又有胞膜着色，其余为阴性表达，并未发现有胞核着色。将胞膜表达低于70%或胞浆表达高于10%视为β-catenin异常表达，共有133例（48.7%）患者表现出β-catenin正常表达，140例（51.3%）患者表现出β-catenin的异常表达。对其生存分析发现，β-catenin异常表达的乳腺癌患者预后差。通过Spareman相关分析发现，β-catenin的异常表达与患者的ER状态显著负相关，ER阳性时β-catenin正常表达所占的比例高（rs=-0.134，P=0.027）。

有文献报道，β-catenin能够正调ERα下游靶基因的表达[15]。本研究通过联合分析ER的状态与β-catenin表达情况对乳腺癌患者预后的影响发现，在ER阴性的患者中，β-catenin异常表达与正常表达的乳腺癌患者的预后没有差异，而在ER阳性的患者中，β-catenin异常表达的乳腺癌患者预后差于β-catenin正常表达的患者。表明在ER阳性的条件下，β-catenin的表达情况才能够影响乳腺癌患者的预后。这可能是由于β-catenin能够增强ER的转录激活作用，进而促进下游靶基因转录，最终导致肿瘤的发生。

综合以上分析结果得出，β-catenin在IDC-NOS中的异常表达与ER的状态呈负相关。在ER阳性的条件下，β-catenin的表达情况能够影响IDCNOS患者的预后。

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