一起聚集性发热事件病原菌的分离鉴定

刘 媛，邹自英，王文博，谭积善，熊 杰

2017年8月，驻成都某部营区出现聚集性发热病例，患者表现出不同程度发热、头痛，部分患者有咽痛、咳嗽，基本无流涕、胸闷等症状。初步怀疑为呼吸道病毒感染，采集患者咽拭子标本，经实时定量PCR检测，结果常见呼吸道病毒（甲型流感、乙型流感、腺病毒、呼吸道合胞病毒）均为阴性。为尽快明确引起这一发热事件的病原体，以确定合理的防控策略，防止感染扩散，对患者咽拭子标本进行细菌学检查，分离培养出的细菌鉴定为乙型溶血性停乳链球菌似马亚种。经敏感抗生素治疗，患者临床症状消失，复查停乳链球菌似马亚种为阴性，确定为一起停乳链球菌引起的聚集性发热事件，现对菌株检测情况报告如下。

1 资料与方法

1.1 基本情况 2017年8月某晚7时许，某部卫生队报告营区内出现不明原因群体性发热病例，第1 d发病人数为10余例，第2 d发病人数70余例，第3 d累计发病90余例，部分患者发热症状开始减退。患者均为男性，年龄19～23岁，主要临床表现是：头痛、头晕、发热（37.0～39.6 ℃）、畏寒、乏力，部分患者有鼻塞、咽痛、咳嗽、咳痰、扁桃体肿大。发病第2 d，3例发热病例送至医院救治；第3 d，医院又收治该部送诊的5例发热病例。

1.2 标本采集 患者入院后，均首先采集咽拭子标本、血液标本送检验科检测。所有标本采集严格按照《检验标本采集、运送制度》执行，采集后立即送检。

1.3 呼吸道病毒检测 呼吸道病原检测标本为现场采集的咽拭子标本[友康恒业生物科技（北京）有限公司]，采用病毒核酸提取试剂盒[赛默飞世尔科技(中国)有限公司]，从咽拭子标本中提取核酸，具体操作参照说明书进行。提取的核酸经荧光定量PCR检测甲型流感病毒、乙型流感病毒、人腺病毒、呼吸道合胞病毒和人副流感病毒，试剂盒购自天根生化科技(北京)有限公司。

1.4 细菌培养、分离及鉴定 无菌咽拭子接种到绵羊血琼脂培养皿上，采用法国梅里埃公司的BacT/Alert3D全自动血液培养仪进行血培养，VITEK2 COMPACT全自动微生物分析仪及GP鉴定卡对细菌进行鉴定，AST-GP67药敏卡检测菌株对抗菌药物的敏感性，结果评价按2013年美国CLSI抗菌药物敏感性试验执行标准（CLSI M100-S23）进行判断。

1.5 血液与生化检测 采集患者静脉血标本，分别用AU2700（中）生化分析仪器（美国贝克曼）和迈瑞BC6900血细胞分析仪（中国迈瑞）、检测相关指标。

2 结果

2.1 呼吸道病毒检测结果 8例咽拭子标本呼吸道病毒检测结果见图1，除阳性标准品检测结果为阳性外，8份标本检测结果均为阴性，提示患者可能不是呼吸道病毒感染所致。

2.2 患者血液、生化及细菌涂片检测 所有患者中性粒细胞比率和中性粒细胞绝对值均高于正常值，部分患者白细胞计数（WBC）、单核细胞绝对值、超敏C反应蛋白（hs-CRP）水平偏高，淋巴细胞比率和淋巴细胞绝对值偏低。见表1。

对患者咽拭子标本进行细菌涂片，镜下观察发现，6例标本中发现了较多的革兰染色阳性球菌，部分细菌聚集成链状（图2）。

图1 荧光定量PCR检测呼吸道病毒结果

表1 患者血液和生化检测结果

2.3 细菌分离培养及生化鉴定 将患者咽拭子标本接种血琼脂平板，37℃培养24 h，观察细菌生长情况。细菌培养结果显示，培养基上生长出具有溶血环的细菌，溶血环呈透明状、约3 mm宽（图3A），具有诊断价值。进一步对该菌进行分离纯化培养，细菌革兰染色为阳性，链状排列 （图3B）。利用VITEK2 COMPACT全自动微生物分析仪及GP鉴定卡对该菌进行鉴定，结果为停乳链球菌似马亚种（Streptococcus dysgalactiae subsp.equlsimilis）。

图2 咽拭子标本细菌学涂片检测结果

2.4 药物敏感实验及治疗结果 药物敏感实验结果显示，该菌对青霉素、环丙沙星、头孢类等抗生素均敏感，仅对红霉素、克林霉素、四环素具有耐药性（表2）。所有住院患者经阿莫西林或左氧氟沙星治疗，临床症状消失。再采集患者咽拭子标本进行复检，未发现溶血性链球菌，进一步提示上述分离的停乳链球菌似马亚种为致病性病原体。对患者血液和生化指标进行复检，也均恢复正常。

图3 血培养细菌菌落形态及革兰染色结果

表2 药物敏感实验结果

3 讨论

聚集性发热事件常发生在学校、部队营区等人员密集场所，其病因多为呼吸道病毒感染引起，如甲型流感病毒、腺病毒、诺如病毒等[1-2]；细菌、肺炎支原体等感染引起的聚集性发热事件也有报道[3]。

溶血性链球菌是革兰阳性球菌，镜下观察呈球形或椭圆形，链状排列，长短不一。停乳链球菌似马亚种属于乙型溶血性链球菌中的一种，该菌在血平板上形成灰白色、半透明、表面光滑、边缘整齐的细小菌落，菌落周围形成一个2～4 mm宽、界限分明、完全透明的无色溶血环。停乳链球菌似马亚种在自然界中分布较广，存在于水、空气、尘埃、粪便及健康人咽部，长期以来被认为是人体内正常寄居的非致病性病原菌，但近年来关于停乳链球菌引起感染的报道越来越多，已被列为重要的致病菌[4-5]。

从此次聚集性发热事件的8例患者中分离出6株停乳链球菌似马亚种，经敏感性抗生素治疗后复检，未再检出该菌，说明该菌是引起这起群体性发热事件的病原体。由于该菌可寄居健康人咽部，但目前并没有文献报道该菌在健康人群中的携带率，因此，引起此次聚集性发热事件病原体的来源并不十分明确。由于该菌也存在于环境中，结合本次疫情发病人数众多，且集中发病的特点，经现场调查，可能由于官兵集体接触到陌生环境中的细菌，并通过空气飞沫传播给密切接触者引起。

近年来，停乳链球菌似马亚种引起聚集性发热事件已有多篇文献报道，张彦丽等[6]对一工厂内发生的不明原因发热事件进行调查和病原体检测，病原菌为乙型溶血性停乳链球菌似马亚种，但没有查出具体的感染源；韩秀兰等[7]报道，停乳链球菌似马亚种引起的驻石家庄市某高等学校群体发热；翟永志等[8]报道，驻京某部队一起食源性停乳链球菌类马亚型引起的群体感染。可见停乳链球菌似马亚种在学校、工厂及部队中易引起暴发感染，一般表现为呼吸道感染症状，表现为发热、扁桃体肿大或炎症，一般症状较轻，鼻塞、流涕、肺部影像学异常等较为少见，可与呼吸道病毒感染鉴别。

[1] 陈诹,王远萍,徐红梅,等.2013～2015年上海市浦东新区聚集性发热疫情分析[J].实用预防医学,2017,24(5):563-565.

[2] 邓丽梅,韦连珍.大学城校区学生群体性发热防控措施的探讨[J].基层医学论坛,2011(4):188-189.

[3] 张彦丽,刘容珍,张桂玲,等.从一起聚集感染事件中分离培养出停乳链球菌似马亚种[J].中国卫生检验杂志,2014(13):1889-1891.

[4] 张辉,刘继锋,龚建仁.一起停乳链球菌似马亚种暴发感染的调查分析[J].中国食品卫生杂志,2015,27(6):707-710.

[5] 韩秀兰,李云,柳连顺,等.一起乙型溶血性停乳链球菌感染爆发的检测报告[J].中华流行病学杂志,2004,25(7):636-636.

[6] 张彦丽,刘容珍,张桂玲,等.从一起聚集感染事件中分离培养出停乳链球菌似马亚种[J].中国卫生检验杂志,2014(13):1889-1891.

[7] 韩秀兰,李云,董永辉.从一起暴发疫情分离的停乳链球菌似马亚种检测分析[J].预防医学论坛,2004,10(6):670-671.

[8] 翟永志,刘梦林,张志强,等.一起食源性停乳链球菌类马亚型暴发感染调查[J].解放军医学院学报,2013(11):1135-1137.