胰腺导管内乳头状黏液性肿瘤患者K-ras基因的突变

于　军　王　峰　李开良　杨　蕾　曹振强　

(吉林大学第二医院电诊科，吉林　长春　130041)

1吉林省人民医院肝胆胰外科2吉林大学中日联谊医院镜检科

胰腺导管内乳头状黏液性肿瘤(IPMN)是胰腺癌最重要及最常见的癌前病变之一，是一种相对良性肿瘤，术后预后较好〔1〕。但部分IPMN具有侵袭性及快速发展和预后差的特点，常规影像学与病理学检测很难对这一类IPMN病例做出正确诊断及鉴别〔2〕。K-ras基因是一种原癌基因，其所在信号通路在调控细胞生长和恶性肿瘤转化的过程中起重要作用。约20%人类肿瘤中都存在K-ras基因突变〔3〕。K-ras基因突变与胰腺癌的发病及预后密切相关〔4～6〕。有学者报道了IPMN样本K-ras突变及与病理分型的关系，指出在IPMN样本中存在K-ras突变，但突变率及与临床相关性报道不一〔7～9〕。本研究分析IPMN病例标本K-ras基因的突变情况，探讨其与相关临床及病理特点的关联性。

1　资料与方法

1.1标本资料标本资料及纳入标准同文献〔10〕，31例IPMN 患者组织标本来自吉林大学中日联谊医院2012年1月至2014年12月胰腺手术切除肿瘤患者。男16例(51.6%)，女15例(48.4%)，平均年龄63.9岁；临床病理分型：胃型15例(48.39%)，肠型8例(25.81%)，胰胆管型7例(22.58%)，嗜酸细胞型1例(3.22%)；肿瘤向周边组织浸润情况：浸润型7例(22.58%)，非浸润型24例(77.42%)；分化程度：高分化14例(45.16%)、中分化9例(29.03%)、低分化8例(25.81%)；IPMN入组标准：以下3条中符合任意1条均可入组。①影像学检查发现胰腺导管有扩张；②病理学检查发现囊性扩张的导管内被覆黏液上皮或壶腹部有黏液溢出；③影像学检查发现导管内具有乳头状增生肿瘤并伴导管扩张。扩张导管直径≥1 cm。所有病理学类型及TNM分期均按照世界卫生组织(WHO)标准。

1.2K-ras基因突变检测分析IPMN患者肿瘤石蜡组织切片(厚度10 μm)3片，应用二甲苯脱蜡后，无水乙醇清洗2次，晾干后，应用刀片采集肿瘤组织至1.5 ml离心管，应用石蜡组织DNA提取试剂盒(BIOMIGA)进行样本DNA提取，应用紫外分光光度计在260 nm与280 nm测定OD值，计算含量与纯度。应用K-ras基因突变检测试剂盒(武汉友芝有生物技术有限公司)通过实时定量PCR仪(罗氏Lightcycler480)对提取DNA的K-ras基因突变情况进行检测。

1.3统计学分析应用SPSS10.0 软件进行Fisher检验。

2　结　果

31例IPMN患者组织中检测出10例(32.26%)发生K-ras基因突变。10例K-ras基因突变中GGT(Gly)to GAT(Asp)6例；GGT(Gly) to GTT(Val)3例；GGT(Gly) to CGT(Arg)1例。其中，胰胆管型5例(71.4%)、胃型2例(13.3%)、肠型2例(25.0%)、嗜酸细胞型1例(100.0%)，各临床分型差异显著(P=0.022)；浸润型6例(85.7%)显著高于非浸润型4例(16.7%，P=0.002)；高分化1例(7.1%)、中分化2例(22.2%)、低分化7例(87.5%)，不同分化类型差异显著(P=0.000)。

3　讨　论

内镜逆行胰胆管造影通常被用于IPMN的临床诊断〔11〕。然而，IPMN包括各种各样的组织类型如腺瘤和腺癌，仅应用影像学诊断及病理学诊断评价恶性程度往往很难。因此，需要采用一些新的检测方法包括基因检查进一步完善IPMN诊断。K-ras基因突变位点常位于该基因2号外显子的12号和13号密码子上及3号外显子的61号密码子，其中常见突变形式为：G12C、G12R、G12S、G12V、G12D、G12A、G13V/D，占90%以上〔12〕。在本研究中K-ras基因突变主要以GGT(Gly) to GAT(Asp)突变为主。本研究突变率低于Kaino等〔8〕报道IPMN患者胰腺液中检测K-ras 69%的突变率。本研究说明K-ras基因突变与IPMN的肿瘤组织浸润及分化密切相关，通过该基因突变检测可能为预测IPMN发生侵袭及恶性程度提供重要手段。

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