血府逐瘀汤对动脉粥样硬化金黄地鼠血清血脂和炎症因子的影响

林敏瑜+林绍彬+余碧菁++刘菁

[摘要] 目的 观察血府逐瘀汤对动脉粥样硬化金黄地鼠主动脉的病理变化、血脂和炎症因子的影响。 方法 32只雄性金黄地鼠随机分四组：正常组、模型组、血府逐瘀汤组[8.125 g/（kg·d）]、立普妥组 [2 mg/（kg·d）]，正常组喂食基础饲料，余组喂食高脂饲料8周，同时给予药物干预4周后处死，HE染色观察主动脉病理形态变化，ELISA检测血脂四项、血清炎症因子表达水平。 结果 模型组主动脉管腔狭窄、内膜增厚、泡沫细胞堆积、平滑肌细胞排列紊乱，总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、白细胞介素-6显著升高（P<0.01）；血府逐瘀汤组、立普妥组脂质斑块面积减小，三层结构较清晰，甘油三酯、白细胞介素-6、肿瘤坏死因子-α、髓过氧化物酶降低（P<0.05）。 结论 血府逐瘀湯可缩小斑块面积，改善血管壁结构，其作用机制可能是通过降低血脂水平，减少炎症因子的表达以减缓动脉粥样硬化病程。

[关键词] 动脉粥样硬化；血府逐瘀汤；血脂；炎症因子

[中图分类号] R289.5 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701（2017）34-0032-03

Effect of Xuefu Zhuyu decoction on serum lipids and inflammatory factors in atherosclerotic golden hamster

LIN Minyu LIN Shaobin YU Bijing LIU Jing

Department of Cardiology， Fuzhou Second Hospital， Fuzhou 350007， China

[Abstract] Objective To observe the effect of Xuefu Zhuyu decoction on the pathological changes， blood lipids and inflammatory factors in atherosclerosis golden hamster aorta. Methods 32 male golden hamsters were randomly divided into 4 groups including normal group， model group， Xuefu Zhuyu decoction group [8.125 g/（kg·d）]， Lipitor group [2 mg/（kg·d）] . Normal group was fed with basal diet. Other groups were fed with high-fat diet for 8 weeks， while were sacrificed after drug intervention for 4 weeks. HE staining was used to observe pathological changes of aorta. And ELISA was used to detect the expressions of four items of blood lipids and serum inflammatory cytokines. Results In the model group， the aortic lumen was narrow， endometrial was thickened， foam cell accumulated and smooth muscle cells arranged disorderly. And total cholesterol， triglyceride， high density lipoprotein， low density lipoprotein and interleukin-6 were significantly increased（P<0.01）. In the Xuefuzhuyu decoction group and the Lipitor group， the lipid plaque area was reduced and the three-layer structure was clear. The levels of triglyceride， interleukin-6， tumor necrosis factor α and myeloperoxidase were decreased（P<0.05）. Conclusion Xuefu Zhuyu decoction can reduce the area of plaque and improve the structure of blood vessel wall. Its mechanism may be to slow down the course of atherosclerosis by reducing blood lipid level and reducing the expression of inflammatory factors.

[Key words] Atherosclerosis； Xuefu Zhuyu decoction； Blood lipids； Inflammatory factor

动脉粥样硬化（atherosclerosis，AS）是慢性全身性炎症性疾病，是多种心脑血管疾病的病理基础。单核细胞、巨噬细胞、淋巴细胞等炎细胞浸润，低密度脂蛋白氧化，泡沫细胞形成，平滑肌细胞增殖，血小板集聚，血栓形成，促使斑块形成，血管内皮的炎症反应贯穿病程的始终。血府逐瘀汤是临床治疗和实验研究多用的方剂[1，2]，本实验建立金黄地鼠动脉粥样硬化模型，观察血府逐瘀汤对主动脉形态结构，血清总胆固醇（TC）、甘油三酯 （TG）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和髓过氧化物酶（MPO）的影响，为其临床应用提供实验依据。endprint

1 材料与方法

1.1 实验动物

普通级雄性金黄地鼠32只，体重（120±10）g，许可证号码SCXK（沪）2012-0011，饲养于福建省中医药研究院比较医学中心（合格证号：医动学第23-016号）。

1.2 实验药物

血府逐瘀汤由桃仁12 g、红花9 g、当归9 g、生地黄9 g、牛膝9 g、川芎4.5 g、桔梗4.5 g、赤芍6 g、枳壳6 g、甘草6 g、柴胡3 g生药组成，颗粒剂由福州市第二医院颗粒药房提供。阿托伐他汀钙片（立普妥，20 mg，辉瑞制药有限公司）。

1.3 模型建立及干预

金黄地鼠采用高脂喂养建立动脉粥样硬化模型[3，4]，32只金黄地鼠随机分为四组：正常组、模型组、血府逐瘀汤组、立普妥组，每组8只。正常组喂食基础饲料，余组喂食高脂饲料：1%胆固醇、15%猪油、84%基础饲料，4周后进行药物干预，灌胃剂量按实验动物体表面积换算，血府逐瘀汤组给药量为8.125 g/（kg·d），立普妥组给药量为2 mg/（kg·d），模型组给予等量生理盐水，干预4周。

1.4 仪器和试剂

生物组织自动脱水机（亚光，TS-12U）；石蜡包埋机（亚光，BM-VⅡ）；切片机（Leica，RM2235）；显微镜（Leica，DM4000B）；多功能酶标仪（TECAN，Infinite 200 PRO）；苏木素染液、伊红染液（索莱宝）；TC、TG、HDL-C、LDL-C测试盒（南京建成）；IL-6、TNF-α、MPO测试盒（Invitrogen）。

1.5 样本收集

干预4周后取材，腹主动脉采血，3000 r/min，离心10 min，取血清，严格按测试盒说明书操作，酶标仪测定各孔吸光度。夹闭腹主动脉，取心脏、主动脉根部至腹主动脉待检。

1.6 组织形态学观察

置10%甲醛中常温固定24 h，取主动脉弓梯度乙醇脱水、二甲苯透明、石蜡包埋，横断面为切面，4 μm厚连续切片。切片脱蜡至水，苏木素15 min，1%盐酸酒精分色，返蓝20 min，伊红1 min，脱水、透明，封片，光镜下观察。

1.7 统计学方法

应用SPSS18.0软件分析，计量资料以（x±s）表示，正态分布检验齐采用单因素方差分析，正态分布检验不齐采用非参数检验，P<0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 一般情况

正常组一般情况良好，毛发光泽，进食正常，活动灵敏。模型组高脂饲料造模期间出现毛发晦暗无光泽，进食减少，活动笨拙，精神状态较差，血府逐瘀汤组、立普妥组一般情况较模型组有所改善。

2.2 主动脉病理形态学观察

正常组主动脉管腔大，血管壁三層结构清晰，内膜光滑连续完整，内皮下层未见脂质沉积，中膜以弹性膜为主，弹性纤维紧密相连，其间可见排列规则的长梭形平滑肌细胞，外膜为疏松结缔组织（封三图6A）。模型组可见脂质斑块，内腔缩窄，内膜增厚并向管腔内凸出，内皮细胞下大量泡沫细胞聚集、少量炎细胞浸润，该处中膜变薄，弹性纤维破坏，平滑肌细胞排列紊乱，可见少量泡沫细胞、脂质沉积（封三图6B）。血府逐瘀汤组血管内膜部分增厚，内皮细胞下可见少许泡沫细胞，弹性膜结构较模糊，平滑肌细胞排列较规则（封三图6C）。立普妥组管壁三层结构较清晰，内膜连续，内皮细胞下少量炎细胞浸润，中、外膜结构较好（封三图6D）。

2.3 对血脂四项的影响

与正常组比较，模型组5只金黄地鼠为乳糜血，TC、TG、HDL-C、LDL-C水平均显著升高（P<0.01）；与模型组比较，血府逐瘀汤组2只为乳糜血，TG水平显著降低（P<0.05），TC、HDL-C、LDL-C水平降低。见表1。

2.4 对炎症因子的影响

与正常组相比，模型组血清IL-6、TNF-α、MPO表达显著升高（P<0.01），与模型组相比，血府逐瘀汤组、立普妥组IL-6、TNF-α、MPO水平降低（P<0.05）。见表2。

3 讨论

AS可分为脂质条纹（早期）、纤维斑块、粥样斑块（进展期），不稳定斑块、斑块破裂和血栓形成（后期）。脂质代谢紊乱是AS高危因素[5]，LDLC氧化修饰后形成氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL），ox-LDL损伤内皮细胞促进单核细胞、T细胞等黏附，巨噬细胞吞噬大量脂质而成泡沫细胞[6]，形成脂质条纹。单核细胞、巨噬细胞、T细胞可释放IL-6、TNF-α等炎症因子，诱导血小板源生长因子分泌，促使中膜平滑肌细胞向内膜迁移并大量增殖，纤维斑块形成，血管重构进入进展期。炎症细胞浸润可促使血管内皮细胞坏死凋亡[7]，又可分泌MMP-2、MMP-9，降解纤维帽，引起纤维斑块破裂、出血和继发性血栓的形成[8]，引发急性心脑血管缺血性疾病。

血管内皮炎症反应贯穿病程的始终，与AS的发生发展呈正相关[9，10]。IL-6是单核细胞、淋巴细胞等产生的多功能细胞因子，参与机体各种调节作用，促使血管平滑肌细胞增生，激活巨噬细胞，分泌单核细胞趋化蛋白、TNF-α，可与TNF-α形成免疫复合物，进入血管内皮下参加纤维斑块的形成，也可刺激MMPs合成，降解细胞外基质中的胶原纤维导致斑块不稳定、破裂。TNF-α是单核细胞、巨噬细胞产生的具广泛的生物学活性的细胞因子，可作为炎症强度的标志，主要损伤血管内皮细胞结构和功能的完整性、促进炎性细胞的聚集和炎症因子的释放，促进疾病进程。MPO与中性粒细胞激活程度密切相关，是新型炎症标志物，参与炎症反应的发展的整个过程。本研究结果显示，模型组主动脉管腔狭窄，内膜增厚，内膜下泡沫细胞堆积，IL-6、TNF-α、MPO较正常组显著升高，表明炎症因子与AS的发病机制密切相关。endprint