沙棘果油与沙棘籽油脂肪酸组成及其抗氧化活性

赵二劳，徐 芬，尹爱萍，杨 洁，郝丽琴(.忻州师范学院 化学系，山西 忻州 034000； .重庆出入境检验检疫局，重庆 40000)

沙棘(HippophaerhamnoidesL.)为胡颓子科沙棘属小乔木或灌木，又称酸刺、醋柳，在我国主要分布于华北、西北、东北和西南等10多个省区。我国约有沙棘林140万hm2，占世界沙棘总面积的95%以上，其资源极为丰富，素有“沙棘王国”之称[1-2]。沙棘果罕有病虫害侵袭和农药污染，是一种无污染原生态绿色浆果。现代科学研究表明，沙棘果与沙棘籽富含蛋白质、氨基酸、有机酸、多种维生素以及微量元素等对人体有益的功能活性成分和营养成分，具有独特的保健功能和药用价值，享有“绿色黄金”的美誉[3-4]。沙棘果油与沙棘籽油是沙棘果中天然功能成分的浓缩物，具有极高的食用和药用价值[5-7]，被广泛应用于食品、饮料、医药和化妆品等领域。目前，对沙棘果与沙棘籽的研究，多集中于沙棘果与沙棘籽活性成分提取、功能以及沙棘果油与沙棘籽油的提取上[2,8-9]，有关沙棘果油与沙棘籽油脂肪酸组成的研究报道不多，特别是沙棘果油与沙棘籽油抗氧化活性的研究鲜有报道。基于此，本文重点研究沙棘果油与沙棘籽油脂肪酸组成，并以清除DPPH·法与·OH法评价沙棘果油和沙棘籽油的抗氧化活性。为人们正确认识沙棘果油、沙棘籽油的保健功能特性、合理应用以及相关保健产品的研发提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料

沙棘果油、沙棘籽油购于山西省山地阳光食品有限公司(由岢岚县产沙棘果(籽)经超临界CO2萃取而得)。1，1-二苯基-2-苦肼基(DPPH)(Sigma 公司)；2,6-二叔丁基对甲酚(BHT)、氢氧化钾、无水硫酸钠、硫酸亚铁、水杨酸、双氧水、甲醇、异辛烷、无水乙醇等，均为分析纯。试验用水为二次去离子水。

7890A气相色谱仪，美国Agilent公司；SP-723分光光度计，上海光谱仪器有限公司；AL204型电子分析天平，梅特勒-托利多(上海)仪器有限公司。

1.2 试验方法

1.2.1 沙棘果油与沙棘籽油脂肪酸组成分析

沙棘果油与沙棘籽油的甲酯化：称取约60 mg沙棘油样，置于10 mL具塞试管中，依次加入5 mL异辛烷，0.2 mL 2.0 mol/L的氢氧化钾甲醇溶液，塞紧试管塞，剧烈振摇1～2 min，至试管内混合溶液澄清，加入1.0 g一水合硫酸氢钠，剧烈振摇0.5 min，静置，上清液稀释40倍后，进行气相色谱分析。

气相色谱分析条件：SPTM-2560色谱柱(100 m×0.25 mm×0.2 μm)；升温程序为柱初始温度40℃，保持1 min，以30℃/min上升到140℃，保持5 min，再以2℃/min上升到240℃，保持12 min；载气为氮气，流速1 mL/min；氢气流速45 mL/min；空气流速450 mL/min；氢火焰离子化检测器(FID)；进样口温度200℃；检测器温度260℃；进样量2 μL，不分流进样。

分析方法：通过比较脂肪酸甲酯标准品与样品甲酯保留时间，确定样品沙棘果油与沙棘籽油的脂肪酸组成，采用面积归一化法计算其脂肪酸含量。

1.2.2 沙棘果油与沙棘籽油抗氧化活性测定

试验以合成抗氧化剂BHT作阳性对照，采用清除DPPH·法与·OH法评价沙棘果油和沙棘籽油的抗氧化活性，并利用半清除率(IC50)定量描述比较沙棘果油和沙棘籽油的抗氧化活性[10]。

1.2.2.1 沙棘果油与沙棘籽油对DPPH·清除率的测定

[11-12]的方法，并稍作修改。准确吸取2.0 mL质量浓度为0.20 mg/mL的DPPH乙醇溶液置于10 mL比色管中，再加入一定量沙棘果油或沙棘籽油，用95%乙醇定容至刻度，摇匀，室温下避光反应40 min后，用分光光度计在517 nm处测定其吸光度，按下式计算DPPH·清除率。

清除率=[1-(Ai-Aj)/A0]×100%

式中：A0为未加沙棘油体系的吸光度；Ai为加入沙棘油后体系的吸光度；Aj为仅沙棘油本底的吸光度。

同法测定不同质量浓度BHT溶液对DPPH·清除率。

1.2.2.2 沙棘果油与沙棘籽油对·OH清除率的测定

试验利用Fenton反应产生·OH，采用水杨酸法测定沙棘油对·OH的清除率。参考文献 [12-13] 的方法，并稍作修改。在10 mL比色管中，依次加入1.0 mL浓度为7.55 mmol/L硫酸亚铁溶液，1.0 mL浓度为7.50 mmol/L水杨酸溶液，一定量沙棘油，0.5 mL 0.3%的双氧水，乙醇定容至刻度，50℃水浴反应30 min，冷却至室温，用分光光度计在510 nm处测定其吸光度为A1，同法操作，以不加沙棘油溶液体系为空白对照测定其吸光度为A0；考虑沙棘油溶液本身吸光度可能对结果的影响，测定以不加水杨酸溶液体系的吸光度为A2。按下式计算沙棘油对·OH的清除率。

清除率=[1-(A1-A2)/A0]×100%

同法测定不同质量浓度BHT溶液对·OH清除率。

2 结果与讨论

2.1 沙棘果油与沙棘籽油脂肪酸组成及含量

按试验方法对沙棘果油与沙棘籽油脂肪酸组成及含量进行分析，结果见表1。

由表1可知，沙棘果油中检出11种脂肪酸，主要为棕榈油酸(35.945%)、棕榈酸(34.108%)、油酸(18.357%)和亚油酸(6.198%)；沙棘籽油中检出8种脂肪酸，主要为亚油酸(38.958%)、亚麻酸(29.327%)、油酸(20.859%)和棕榈酸(7.659%)。可见，沙棘果油和沙棘籽油中脂肪酸组成及含量有明显差异。沙棘果油中饱和脂肪酸含量为37.50%，沙棘籽油中饱和脂肪酸含量为10.035%，沙棘果油中饱和脂肪酸含量约是沙棘籽油的3.7倍。沙棘果油不饱和脂肪酸含量为62.501%，沙棘籽油不饱和脂肪酸含量为89.965%，沙棘籽油不饱和脂肪酸含量明显高于沙棘果油的。油脂中的不饱和脂肪酸与饱和脂肪酸的比值越大，越有利于降低血液中胆固醇和心脏病发生的风险[11,14]。沙棘籽油该比值为8.97，沙棘果油该比值为1.67，沙棘籽油不饱和脂肪酸与饱和脂肪酸的比值远高于沙棘果油的。由表1也可知，沙棘果油和沙棘籽油中亚油酸和亚麻酸含量差异较大，亚油酸和亚麻酸是人体的两种必需脂肪酸。研究[15]表明，亚油酸具有抗氧化、抗肿瘤、抗动脉粥样硬化、降低血脂、防治糖尿病、预防心脑血管疾病等多种生物活性；亚麻酸则具有抗癌、抗凝血、抗炎、降血脂、增强免疫力、提高智力、延缓脑细胞衰老、促进婴幼儿大脑发育、预防老年性痴呆等药理作用。可见，沙棘果油与沙棘籽油均具有保持、促进人体健康的功效，沙棘籽油更具优势。

表1 沙棘籽油与沙棘果油脂肪酸组成及含量 %

2.2 沙棘果油与沙棘籽油对DPPH·清除率(见图1)

由图1可知，沙棘果油、沙棘籽油和BHT对DPPH·清除率都随其质量浓度的增加而增大，并呈一定的量效关系。沙棘果油、沙棘籽油和BHT清除DPPH·的IC50分别为25.68、17.29 μg/mL和27.61 μg/mL。表明沙棘果油与沙棘籽油对DPPH· 的清除能力都强于合成抗氧化剂BHT，即沙棘果油与沙棘籽油均具有较强的抗氧化活性，且沙棘籽油的抗氧化活性高于沙棘果油。

图1 沙棘果油、沙棘籽油和BHT对DPPH·的清除率

2.3 沙棘果油与沙棘籽油对·OH清除率(见图2)

图2 沙棘果油、沙棘籽油和BHT对·OH的清除率

由图2可知，沙棘果油、沙棘籽油和BHT对·OH 清除率都随其质量浓度的增加而增大，并呈一定的量效关系。沙棘果油、沙棘籽油和BHT清除·OH的IC50分别为29.32、25.48 μg/mL和33.60 μg/mL。表明沙棘果油与沙棘籽油对·OH的清除能力都强于合成抗氧化剂BHT，即沙棘果油与沙棘籽油均具有较强的抗氧化活性，且沙棘籽油的抗氧化活性强于沙棘果油。

自由基具有很强的活性，正常情况下，生命机体内自由基处于稳定平衡状态，但某些状态下会产生过量的自由基。过量的自由基会氧化损伤机体内糖类、氨基酸、核酸、蛋白质和脂类等大分子，使人体组织细胞坏死或突变，导致机体衰老或引起肿瘤等诸多疾病的发生和发展。沙棘果油与沙棘籽油能有效清除自由基。

3 结 论

通过气相色谱分析，沙棘果油中检出11种脂肪酸，主要含有棕榈油酸(35.945%)、棕榈酸(34.108%)、油酸(18.357%)和亚油酸(6.198%)，不饱和脂肪酸含量为62.501%。沙棘籽油中检出8种脂肪酸，主要含有亚油酸(38.958%)、亚麻酸(29.327%)、油酸(20.859%)和棕榈酸(7.659%)，不饱和脂肪酸含量为89.965%。抗氧化试验表明，沙棘果油、沙棘籽油和BHT清除DPPH·的IC50分别为25.68、17.29 μg/mL和27.61 μg/mL，清除·OH 的IC50分别为29.32、25.48 μg/mL和33.60 μg/mL。表明沙棘籽油与沙棘果油均具有较强的抗氧化活性，且沙棘籽油的抗氧化活性强于沙棘果油。

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