尿路上皮癌胚抗原1在卵巢癌组织中的表达及临床意义

谭歆

（江苏大学附属人民医院妇产科，江苏镇江212002）

上皮性卵巢癌（epithelial ovarian cancer，EOC）是女性常见的恶性肿瘤，由于环境因素和生活方式的改变，其发病率呈逐年增高，且发病年龄趋于年轻化[1－2]，5年生存率低于 50%[1]。尿路上皮癌胚抗原1（urothelial carcinoembryonic antigen 1，UCA1）是一种常见的长链非编码RNA（long non-coding RNA，lncRNA），在胃癌、胆囊癌、肺癌等多种实体肿瘤中异常高表达，且与肿瘤的进展、增殖和转移等密切相关[3－5]。已有文献报道 UCA1可促进 EOC细胞株OMC685、A2780以及 SKOV3的侵袭和转移[6]。目前关于EOC临床标本中的UCA1表达尚不清楚，因此，本研究拟检测EOC肿瘤标本中UCA1的表达并进一步分析其临床意义。

1 材料与方法

1.1 研究对象

本研究包括66例EOC患者和30例卵巢良性疾病者（作为对照），均为2008年1月至2016年12月在江苏大学附属人民医院妇产科就诊患者。EOC患者年龄38～87岁（中位55岁）；卵巢良性疾病者年龄35～85岁（中位50岁）；患者术前均未行放疗、化疗，未服用激素类药物。

卵巢组织标本均为手术切除获得，在离体10 min内取材，液氮速冻后于－80℃保存。所有标本均经术后病理诊断证实。本研究经江苏大学附属人民医院伦理委员会同意，并获得所有受试者的知情同意。

1.2 组织RNA提取和cDNA合成

所有组织经研磨匀浆后用Trizol试剂（美国Invitrogen公司）提取总RNA。通过紫外分光光度计评价RNA浓度和纯度，并据此将浓度统一标准化。反转录反应体系总体积为40μL，含17μL无RNA酶水、4μL随机引物、4μL样品RNA、8μL 5×缓冲液、4μL dNTP、1μL RNA酶抑制剂和2μL反转录酶（美国Thermo Fisher Scientific公司）。反转录产物于4℃保存。

1.3 实时荧光定量 PCR（qRT-PCR）检测 UCA1 mRNA的表达

应用SYBR®Premix ExTaqTM试剂（日本TaKaRa公司）检测UCA1转录本水平。UCA1引物序列：上游 5′-CTCTCCATTGGGTTCACCATTC-3′；下游5′-GCGGCAGGTCTTAAGAGATGAG-3′[7]。内参基因GAPDH引物序列：上游 5′-GAAGGTCGGAGTCAACGG-3′；下游 5′-TGGAAGATGGTGATGGGAT-3′。具体反应配比参照试剂说明书。反应条件：95℃变性5 s，57℃退火30 s，72℃延伸30 s，75℃收集荧光30 s，共40个循环。每个样品均检测3孔，且每次实验都含阳性和阴性质控。UCA1相对表达水平采用2－△△CT进行分析。

1.4 统计学分析

应用软件SPSS 20.0进行统计学分析。χ2检验用于分析EOC中UCA1表达与各临床参数的相关性。非正态性连续型变量采用Wilcoxon秩和检验分析。依据ROC曲线和曲线下面积（AUC）评价UCA1表达对EOC的诊断意义。Kaplan-Meier生存曲线分析UCA1表达对EOC患者生存的影响。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 UCA1在卵巢癌组织中的表达

由图1可见，EOC患者卵巢癌组织中UCA1表达水平明显高于良性疾病卵巢组织（U＝320.000，P＜0.01）。

图1 不同卵巢组织中UCA1表达水平比较

2.2 UCA1表达对EOC的诊断价值

ROC分析提示UCA1诊断EOC的AUC值为0.838（95%CI：0.749～0.927，P＜0.05）。见图2。

图2 UCA1表达诊断上皮性卵巢癌的ROC曲线

将UCA1表达水平的临界值设定为0.463，通过ROC曲线区分EOC和卵巢良性疾病者的灵敏度为53%，特异性为90%。结果提示UCA1表达能较好地判别EOC患者与卵巢良性疾病者，并可能是鉴别EOC与非肿瘤疾病的潜在标志物。

2.3 UCA1表达与临床参数及预后的关系

以截断值0.463为界，将EOC患者分为UCA1高表达组和低表达组，分析两组间临床病理参数的差异。两组患者年龄、肿瘤直径、血浆CA125水平以及腹腔积液等差异均无统计学意义（P＞0.05），而UCA1异常表达与FIGO分期、肿瘤分化程度以及淋巴结转移相关（P＜0.05）。见表1。

Kaplan-Meier生存分析显示，UCA1高表达者总体生存、无病生存较UCA1低表达者明显缩短（P＝0.004，P＝0.037）。见图3。

表1 UCA1表达与卵巢癌患者的临床参数分析

图3 UCA1表达对EOC患者总体生存和无病生存的影响

3 讨论

UCA1在多种实体肿瘤及血液肿瘤中表达显著上调，并作为促癌基因参与肿瘤的发生发展[8－9]。而UCA1在EOC中的研究也得到越来越多的关注。Zhang等[10]发现UCA1过表达与EOC患者的淋巴结转移、FIGO分期以及化疗反应相关。本研究进一步证实 UCA1在 EOC中呈过表达，且高水平的UCA1与较晚的临床分期、淋巴转移以及低分化有关。此外，ROC分析也提示UCA1过表达可辅助鉴别诊断EOC患者和卵巢良性疾病患者，具有一定的临床应用价值。

除扮演癌基因角色外，UCA1也与患者肿瘤耐药及预后密切相关[9，11]。研究报道UCA1过表达与食管癌、下咽癌、骨肉瘤等恶性肿瘤的不良预后相关[12－14]。本研究发现UCA1过表达的EOC患者总体生存和无病生存显著缩短，提示UCA1表达也是EOC患者预后监测的重要分子标志。既往已有报道指出UCA1可竞争性抑制miR-485-5p从而上调癌性蛋白编码基因MMP14，促进EOC细胞的迁移和侵袭[6]。Wang等[7]也揭示 UCA1过表达可增强EOC细胞株SKOV3对顺铂的耐药性，并且抑制细胞凋亡。上述研究结果间接阐述了UCA1过表达致EOC患者预后不良的潜在机制，以及UCA1在EOC疾病发生中的作用。本研究中UCA1过表达与EOC的淋巴结转移相关，而关于其具体的作用机制是否与miRNA调节有关或存在其他的作用途径，仍有待后续深入研究。

综上所述，本研究表明lncRNA UCA1过表达是EOC患者的常见分子事件，可作为辅助诊断EOC以及判断预后的生物分子标志。

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