藏鸡致病沙门菌耐药性分析及质粒基因检测探析

蒋卫国

（湖南省常德市澧县动物卫生监督所415500）

1 试验材料与方法

1.1 菌株与药敏纸片

本次试验中所使用的菌株源于西藏山南市隆子县隆子镇新巴村，从中选取14株致病性沙门菌。由西藏山南试验室提供大肠杆菌。本次试验的主要应用试剂为MH琼脂培养基、LB及MH肉汤培养基等。主要应用到的药敏纸片为头孢唑啉、CFP、链霉素、AMK、多西环素、SPT等。

1.2 药物敏感性试验

本次试验主要采用琼脂纸片扩散方式对藏鸡致病性沙门菌进行药物敏感性试验，将大肠杆菌作为质控菌株。在引物设计与合成方面，根据相关文献资料中记载，采用相应设计方式，将沙门菌耐药基因引物扩展到20种，并且由西藏山南桑日县实验中心负责合成。

1.3 PCR扩增分析

将PCR扩增产物与10g/L的琼脂糖融合之后，通过凝胶成像仪对其进行观察，确定其为耐药基因阳性菌株。从试验样本中随机抽取2株，然后将PCR产物的试剂回收后送至相关单位进行检测，将最终检测结果与耐药基因序列进行对比分析。

2 试验过程

为了对藏鸡致病性沙门菌的耐药性进行分析，主要采用PCR扩增技术对其进行耐药表型及质粒耐药基因进行检测，通过药敏试验、质粒基因试验等方式获得最终结果。

2.1 药敏试验

将14株藏鸡致病性沙门菌与抗菌药物进行试验，分离株对85.71%含量的氨芐西林耐药性最强，然后是78.57%的阿莫西林，71.43%的复方新诺明、42.86%的四环素等。全部菌株对于头孢唑啉、丁胺卡那敏感，在13株分离菌当中，对3类以上药物耐药的情况称之为是多重耐药，在本次试验中发现，其比例为92.86%。

2.2 质粒耐药基因试验

将14株藏鸡致病性沙门菌进行质粒耐药基因试验，从分离株中检测出其具有 blaXOA、blaDHA、blaCMY-2等11种质粒耐药基因，并没有检测出blaACC、blaFOX、blaSHV等质粒耐药基因。将acc(6')-Ib-cr与blaTEM与产物进行测定后，检测结果显示，其扩增序列与耐药物基因序列相对比，在同源性方面达到99%。

3 试验结果

在耐药表型与质粒耐药基因之间的相关性方面，将14株藏鸡致病性沙门菌耐药表型与基因进行试验，在所有分离株当中，除了其中1株没有表现出耐药表型，并且具有acc(6')-Ib-cr外，其他13株有4～8株具有多重耐药性，且有超过两种质粒耐药基因。近年来，藏鸡中沙门菌的耐药性问题成为相关行业中关注的重点话题，对养殖场构成严重威胁，造成较大的经济损失。通过上述试验研究得出，阿莫西林、四环素、多西环素等药物具有较强耐药性。其中，阿莫西林耐药率为78.15%，中介率为14.29%，敏感率为7.14%；四环素的耐药率为64.29%，中介率为21.43%，敏感率为14.29%；多西环素耐药率为42.86%，中介率为28.57%，敏感率为28.57%；头孢哌酮的耐药率为0，中介率为7.41%，敏感率为92.86%；虽然头孢哌酮不具备耐药性，但其中介率较高，这将意味着在药物压力下，分离菌将会向耐药菌发生转变，进而致使耐药率上升。另外，大部分菌株都具备多重耐药性，对超过3类抗菌药物呈现出耐药反应，这也充分说明试验中养鸡场的致病性沙门菌多重耐药现象较为严重。当同一质粒对ESBLs及AmpC酶进行介导时，将被称为是超广谱β内酰胺酶，此类细菌将对所有类型抗生素药物具有耐药作用。在本次试验当中，有64.57%的菌株中被检测出携带有上述两种基因，据此可以推测出，这两种基因很可能存在于同一种质粒中，并且能共同参与到内酰胺酶的耐药机制中。

4 结束语

综上所述，藏鸡致病性沙门菌问题将对养殖场运营产生重大影响，因此，对此方面展开试验调查显得十分必要。在本次试验中共得到57.25%的质粒耐药基因，通过试验检测后能得出，当阳性基因接合之后，大多数得到供体菌的相应抗性表型，这将意味着对上述药物进行介导的耐药基因可能与质粒处于不同的细菌中，并且将以较高的频率发生水平转移。