超高效液相色谱-串联质谱测定动物源性食品中氯丙嗪残留量
2018-01-17李景娜中检集团中原农食产品检测河南有限公司
□ 李景娜 中检集团中原农食产品检测（河南）有限公司
近几年国家食品安全抽检从未放松对猪肉中氯丙嗪的监测，目前比较成熟的氯丙嗪类残留检测方法主要有高效液相色谱法（HPLC）、气质联用法和液质联用法，液相色谱串联质谱以其高特异性、高灵敏度等优点，已成为兽药残留检测的首选[1]。本研究采用脂肪提取率高的碱性乙酸乙酯提取，正己烷净化、氘代氯丙嗪为内标，超高效液相色谱-串联质谱法对动物源性食品中氯丙嗪进行测定，处理简单、结果准确，抗干扰能力强。
1 材料和方法
1.1 仪器
超高效液相色谱-串联质谱仪1290-6470、C18色谱柱 （4.6×100 mm，3.5μm）、涡旋振荡器、超声波清洗机、高速离心机、旋转蒸发仪、分析天平。
1.2 药品与试剂
盐酸氯丙嗪，纯度≥99.2% ，盐酸氯丙嗪-D6，纯度≥99.0% ；甲醇、乙腈、乙醚、乙酸乙酯、叔丁基甲醚、乙酸铵，色谱纯；甲酸、乙酸、氨水，色谱纯，科密欧公司；超纯水由Milli Q 系统制得。
1.3 实验方法
1.3.1 液相色谱和质谱条件
Eclipse Plus C18（4.6 mm×100 mm，3.5μm）柱温 40 ℃ ；进样量 2 μL 。流动相为乙腈：5 mmol/L乙酸铵+0.1%甲酸水溶液（35∶65，V/V），流速0.3 mL/min，等度洗脱；带鞘气电喷雾离子源，正离子扫描（ESI+）；多反应监测（MRM）；毛细管电压4.0 kV；雾化气压力35 psi；雾化气温度340 ℃；雾化气流速10 L/min；鞘气温度360 ℃；鞘气流速11 L/min；分析中以保留时间和定性离子相对丰度定性；以氯丙嗪-D6为内标物，内标法定量。
2 结果与讨论
2.1 提取和净化条件的优化
为有效提取脂溶性药物氯丙嗪，实验比较了常用的提取试剂乙腈、甲酸乙腈、乙酸乙腈、碱性叔丁基甲醚、碱性乙醚、碱性乙酸乙酯的提取效果，外标法定量。
经比较发现，乙腈及酸化乙腈作为提取剂时，由于提取出来的脂肪量较乙酸乙酯少，而氯丙嗪属于脂溶性药物，回收率不理想；乙酸乙酯作为提取剂时，加入1%氨水调节pH值呈弱碱性，用正己烷净化除油，内标校正，回收率达90%，效果最好。
2.2 色谱及质谱条件的优化
氯丙嗪类药物是极性较大的弱碱性药物，实验分别以乙腈-水、乙腈-甲酸水溶液、乙腈-乙酸铵+甲酸水溶液为流动相。结果发现，乙腈-水作流动相时峰形拖尾；乙腈-甲酸水溶液为流动相时，峰形好，但分离度稍差；在流动相中加入一定比例的铵盐，可以竞争或抑制固定相表面的游离硅醇基活性，使碱性物质易于出峰，改善峰形，乙酸铵是较理想的流动相，可增强电离作用，因此最终选择乙腈：5 mmol/L乙酸铵+0.1%甲酸水溶液（35∶65，V/V）作为流动相。
2.3 线性关系和检出限
取一系列氯丙嗪的标准工作液，在最优的色谱和质谱条件下进行测定。以定量离子色谱峰面积与内标的峰面积比为纵坐标，标准溶液的浓度为横坐标，绘制标准曲线。氯丙嗪在0.5～100 μg/L浓度范围内线性良好，内标氯丙嗪-D6浓度为固定值2 μg/L。线性方程为：y=1.08923x+0.014722，线性相关系数0.998 8。在空白样品中添加标准溶液，按照信噪比（S/N）等于3计算检出限，信噪比等于10计算定量限，本方法的检出限为0.5 μg/kg，定量限为 1.5 μg/kg。
2.4 线性关系和检出限
取一系列氯丙嗪的标准工作液，在最优的色谱和质谱条件下进行测定。以定量离子色谱峰面积与内标的峰面积比为纵坐标，标准溶液的浓度为横坐标，绘制标准曲线。氯丙嗪在0.5～100 μg/L浓度范围内线性良好，内标氯丙嗪-D6浓度为固定值2 μg/L。线性方程为：y=1.08923x+0.014722，线性相关系数0.998 8。在空白样品中添加标准溶液，按照信噪比（S/N）等于3计算检出限，信噪比等于10计算定量限，本方法的检出限为0.5 μg/kg，定量限为 1.5 μg/kg。
2.5 实际样品的分析
应用本法测定了当地及周边地区市场常见的猪肉、猪肾、猪肝等40个样品，均未检出氯丙嗪药物。
3 结论
本研究建立了一种高效液相色谱-电喷雾电离串联四级杆质谱、等度洗脱的方式测定动物源性食品中氯丙嗪的残留。方法检出限0.5 μg/kg，在0.5、1.5、10 μg/kg添加水平下，回收率为72.2%～101.0%，相对标准偏差（RSD）均小于10%（n=6）。该方法快速、准确、灵敏度高、重复性好，能满足目前大多数日常监测和检测的要求。
