保健食品中铬测定的方法学验证
2018-09-26黄玲珠广州金域医学检验中心有限公司
□ 黄玲珠 庞 恩 李 庚 广州金域医学检验中心有限公司
铬是葡萄糖代谢中的一种物质，对胆固醇、脂肪和蛋白质的合成十分重要。健康的食物能促进铬的吸收。从减肥到降低胆固醇，到摆脱抑郁症，再到治疗低血糖症和糖尿病，都需要铬元素。许多全麦食品、肉类、奶制品，甚至啤酒中都含有铬。显然，体内铬元素水平正常对血糖代谢是必不可少的。同时，铬还有助于促进葡萄糖代谢的正常化，部分糖尿病患者服用铬元素来提高胰岛素的含量。因此，富铬类保健食品的功效指标显得尤其重要。
本文旨在通过对方法的检出限、定量限、专属性、重复性、中间精密度及准确度等指标进行验证，证明该检测方法对保健食品中铬含量测定的可行性[1,2]。
1 材料与方法
1.1 试剂与仪器
1.1.1 试剂
GB/T 6682中规定的一级水；硝酸（HNO3)，优级纯；30%过氧化氢（H2O2），优级纯；1 %的硝酸溶液；磷酸二氢铵溶液（20g/L）。
标准物质：铬元素标准溶液（1000 mg/L），GBW08614，来自中国计量科学研究院。
1.1.2 标准溶液配制
标准溶液配制：铬元素标准中间储备液1（10 mg/L）：用1 %的硝酸溶液定容至刻度，摇匀备用。
铬元素标准中间储备液2（1 mg/L）：用1 %的硝酸溶液定容至刻度，摇匀备用[3]。
铬标准系列工作曲线：分别精密吸取适当体积的铬元素标准中间储备液2（1 mg/L）于容量瓶中，用1 %硝酸溶液定容至刻度，混匀，此标准使用液中铬的浓度为0、5.0、10. 0、15. 0、20. 0、30. 0 µg/L。
1.1.3 主要仪器与设备
原子吸收光谱仪，配石墨炉原子化器，附铬空心阴极灯，Z2010，日立；微波消解仪，ETHOS UP，麦尔斯通；赶酸器，VB24，莱伯泰科；电子天平，SQP QUINTIX 224-1CN，赛多利斯；超纯水机，Milli-Q IQ7000，默克。
1.2 试验方法
1.2.1 样品前处理
于微波消解内罐中称取样品约0.25 g（精确至0.0001 g），于赶酸器上90℃预消解30 min，旋紧罐盖，按照微波消解仪标准操作步骤设定条件、安装罐子[4]。微波消解仪消解完毕后取出，缓慢打开罐盖泄压，将消解罐放在赶酸器上于120 ℃加热120 min后用一级水转移到容量瓶中，冷却至室温，再用一级水定容至50 mL，摇匀，同时做空白试验。微波消解仪仪器参数见表1。
1.2.2 仪器条件参数设定
打开空心阴极灯进行预热30 min，仪器测定参数见表2。
1.2.3 测定标准曲线
将标准系列溶液工作液按浓度由低到高的顺序分别取10、5μL磷酸二氢铵溶液（20g/L），注入石墨管，原子化后测其吸光度值，以浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线[5]。
1.2.4 测定样品
在与测定标准溶液相同的实验条件下，将空白溶液和样品溶液分别取10、5μL磷酸二氢铵溶液（20g/L），注入石墨管，原子化后测其吸光度值，与标准系列溶液比较定量。
表1 微波消解仪仪器参数
表2 原子吸收分光谱仪仪器参数
2 结果与分析
2.1 标准曲线
对 0 、5.0、10.0、15.0、20.0、30.0µg/L这一系列的标准工作曲线进行测定，结果见表3。
图1以铬溶液浓度为横轴，仪器测定吸光值为纵坐标，线性回归方程为y=0.0090x+0.0063，相关系数R=0.9992＞0.9990，满足分析需求。
表3 标准工作曲线测定结果
图1 标准工作曲线
图2 仪器信号图
2.2 检出限与定量限
2.3 专属性
选取空白样品，阳性样品，阳性加标样品进行试验，通过仪器信号图进行分析。信号如图2所示。
通过空白样品、阳性样品及阳性加标样品的信号图可以看出，空白样品仪器基本无吸光值，阳性样品于357.9 nm处有明显的吸收信号，阳性加标样品于357.9 nm处有明显的信号值叠加[7]。因此可以得出结论，采用原子吸收光谱仪于357.9 nm处可以准确测定铬元素，满足分析需求。
2.4 重复性
平行称取7个样品，对样品进行前处理，使用原子吸收光谱仪对样品进行测定，对7个平行样品的相对标准偏差RSD进行计算。试验结果见表4。
根据试验结果，均能满足GB/T 27404-2008 《实验室质量控制规范 食品理化检测》中规定的相对标准偏差RSD（%）要求。
2.5 准确度
根据重复性试验，7次平行样品的平均值为186.6mg/kg，以此为基准，设计3种不同浓度，每种浓度分别制备3份平行品溶液进行测定，用9份样品的测定结果进行评价。髙、中、低浓度样品加标量与所取样品中铬测定浓度之比控制在1.2∶1，1∶1，0.8∶1范围内[8]。
对样品进行前处理，同时做空白试验，采用原子吸收光谱仪进行测定，分析结果见表5。
根据试验结果，均能满足GB/T 27404-2008 《实验室质量控制规范 食品理化检测》中回收率95%～105%的相关规定。
2.6 中间精密度
由相同人员连续三天测试同一批号样品，称取平行样，对样品进行前处理，结果分别为186.4、178.5、184.3、191.6、191.2、186.2 mg/kg，样品中铬含量测定结果的RSD为2.59 %[9]。
由三个不同人员，相同仪器，对同一批次样品，称取平行样，对样品进行前处理，结果分别为181.4、177.9、187.1、184.2、181.6、181.5mg/kg， 样品中铬含量测定结果的RSD为1.70 %。
根据试验结果，同一人员连续3天对同一样品进行测定，相对标准偏差RSD为2.59%，三个人员对同一样品进行测定，相对标准偏差RSD为1.70%。根据GB/T 27404-2008 《实验室质量控制规范 食品理化检测》中对精密度的规定，含量范围为100～1000 mg/kg的精密度要求为RSD＜5.3 %，故本次试验满足需求。
表4 重复性试验测定结果
表5 加标试验测定结果
3 结论
本文通过微波消解对样品进行前处理，采用原子吸收光谱仪对样品进行分析。通过对各种指标对该方法进行验证，均能符合试验需求，故本试验方法能准确测定保健食品中铬的含量。
