食品中黄曲霉毒素B1柱后光化学衍生-高效液相色谱检测法研究

□ 黄 轩 铜川市产品质量监督检验所

1 高效液相色谱-柱后衍生法的优势

目前，对黄曲霉毒素B1（AFB1）的检测主要以《食品安全国家标准 食品中黄曲霉毒素B族和G族的测定》（GB5009.22-2016）的规定为主，有以下几种：同位素稀释液相色谱-串联质谱法、高效液相色谱-柱前衍生法、高效液相色谱-柱后衍生法、酶联免疫吸附筛查法与薄层色谱法等。在测定黄曲霉毒素过程中主要方法有薄层色谱法、酶联免疫修复筛选法、同位素稀释液相色谱—串联质普法三种方法[1]。其中薄层色谱法相对复杂，试剂消耗相对较大，对于人们身体会产生极大的危害，方法专一性相对较差，属于一种半定量方法。而相较于薄层色谱法来说，酶联免疫修复筛查法步骤上相对简单，但所需要的抗体的寿命需要低温保存，寿命非常短暂，保存难度非常高，同时检测所得的结果上会出现较高的阳性率，在大量样品的大范围筛选中应用较为广泛，但无法实现对样品的精准定量。相较于以上两种方法来说同位素稀释液相色谱—串联质普法此种检测方法检测灵敏度相对较高，但设备昂贵、实验成本非常高，对于很多实验室来说并不具备使用此类方法的实验条件。

AFB1在不同条件之下会出现不同的反应，在水溶液中会出现荧光淬灭，但在紫外线激发作用之下会出现荧光，可以通过三氟乙酸柱前衍生-HPLC法、碘或溴柱后衍生-HPLC法、光化学柱后衍生-HPLC法等三种衍生法来提升AFBI的荧光信号[2]。

光化学柱后衍生-HPLC法是采用光化学衍生器内部是一定长度的聚四氟乙烯管固定于254 nm紫外灯照射的不透光的反应池架里，当AFB1流过时，受到紫外光的照射后使AFB1的荧光性增强，从而提高检测灵密度。因此光化学柱后衍生-HPLC法在使用了光化学衍生器后不需要其他化学试剂，只是连接到色谱柱和检测器之间，其操作简单，重复性好，灵密度高。

2 黄曲霉毒素B1检测的材料和方法

2.1 仪器和试剂

岛津LC-20AT高效液相色谱仪、RF-20A荧光检测器、Milli-Q型纯水机、月旭光化学衍生器、AFB1标准品、甲醇色谱纯等。

2.2 检测样品前处理

首先将样品玉米研磨粉碎，颗粒控制在2 mm左右，称取5 g样品于50 mL的离心管中，加入1 g氯化钠，再加入70%的甲醇溶液离心管液面到25 mL；盖上瓶盖轻微震荡让其混均匀，再将溶液在均质器提取大约2分钟，将溶液玻璃纤维虑纸过滤，吸取液3 mL加6 mL超纯水再经玻璃纤维虑纸过滤，吸取3 mL过滤液以不大于2 mL/min流速通过免疫亲和柱，以10 mL超纯水淋洗后吹干去除水分，准确加入1 mL甲醇进行洗脱，收集洗脱液并准备上机。

2.3 色谱条件

色谱柱：月旭C18柱（4.6×250 mm，5 μm）。流动相：甲醇∶水=45∶5。荧光检测器激发波长360 nm，发射波长450 nm，柱温30 ℃，流速0.8 mL/min。

2.4 标准溶液的配制

AFB1标准品1 mg/L 1 mL一瓶，用甲醇溶液定容10 mL容量瓶把它稀释 成 2.5、5、10、20、40 ng/mL的系列AFB1标准工作溶液。

2.5 加标回收实验室

取样品加入10 ng/mL AFB1标准工作溶液1 mL，进行加标回收实验。

3 结果与讨论

3.1 方法的线性范围及检出限用

分别检测2.5、5、10、20、40 ng/mL的系列AFB1标准溶液，以待测AFB1标准的浓度为横坐标，响应峰面积为纵坐标，计算并绘制标准曲线。结果表明AFB1在2.5～40 ng/mL范围内，峰面积和浓度呈良好的线性关系，线性方程式为Y=aX+b，相关系数为R为0.999 2。

3.2 加标回收利率

样品加入10 ng/mL AFB1标准工作溶液1 mL，进行样品前处理上机，样品检测结果9.75 ng/mL, 回收率为97.5%。

4 结论

光化学柱后衍生-HPLC法相比其样品前处理简单、仪器成本较低、专一性高、灵密度高、准确度高等优势。食品安全在现如今人们的日常生活中所受到的关注程度越来越高，而食品中的黄曲霉素B1其危害性非常高，所以在食品检测过程中针对黄曲霉素B1的检测方法也在不断进行改善，发挥出了非常显著的作用。今后随着时代的发展，食品中黄曲霉素的检测方法还会不断进步。